肠道微生物宏基因组文库构建及酯解酶基因筛选

利用宏基因组学方法,以人肠道微生物样品为原材料,构建了1个约30 000个克隆的fosmid文库。以三丁酸甘油酯为底物,通过功能筛选,获得1个酯解酶阳性克隆。对该阳性克隆构建亚克隆,挑选具有酯解酶活性的阳性亚克隆进行测序分析,最终获得1个肠道微生物来源的酯解酶基因(GenBank登录号:JQ972699)。结果表明,文库克隆的平均插入片段约为40kb,没有重复插入片段克隆。获得的酯解酶基因推演蛋白与Pyramidobacterpiscolens W5455的patatin样磷脂酶同源性最高,氨基酸一致性为95%。生物信息学分析结果表明该基因可能通过Vd型分泌方式进行分泌并发挥功能。本研究是通过构建人肠道微生物宏基因组大片段文库并结合重组子功能筛选获得酯解酶的首次报道,可为食品工业提供新的酯解酶来源和筛选方法。

ZAP蛋白在抗病毒天然免疫应答过程中的功能研究

ZAP蛋白于筛选限制逆转录Moloney鼠白血病病毒(M-MLV)增殖的宿主因子时被首次发现,随后证实ZAP蛋白在抗病毒天然免疫应答中发挥重要作用。该蛋白主要通过抑制病毒RNA合成、降解病毒mRNA或抑制病毒mRNA翻译、介导病毒靶蛋白泛素化降解等多种途径直接抑制某些RNA病毒和DNA病毒的复制。另外,它可作为免疫调节因子,通过增强RIG-I介导的I型干扰素反应起到重要的抗病毒作用。同时许多病毒也已进化出包括抑制ZAP基因mRNA合成、降解ZAP基因mRNA、降解ZAP蛋白和抑制ZAP蛋白与靶病毒的mRNA或目标蛋白结合在内等多种机制,拮抗ZAP蛋白介导的抗病毒天然免疫应答。本文针对宿主ZAP蛋白与不同病毒互作机制进行综述,为宿主抗病毒天然免疫与病毒拮抗宿主天然免疫之间的关系研究,以及后续ZAP蛋白的机制研究提供科学参考。

糖基化磁性纳米粒子的制备及其对凝集素的富集分离

为了构建简单高效的病原微生物分离纯化方法,首先制备了双金属磁性纳米粒子Au-Fe3O4,然后在Au组份的表面修饰了可特异性结合凝集素及病原微生物的的乳糖基(Lac),获得了糖基化磁性纳米粒子Lac-Au-Fe3O4,并进一步研究了Lac-Au-Fe3O4与蓖麻凝集素(RCA120)之间的反应及其对RCA120分离效率的影响,结果表明:1)Au-Fe3O4纳米粒子尺寸均一(8+14nm),呈哑铃状,Au和Fe3O4组份分别位于哑铃的两端;2)Lac-Au-Fe3O4具有良好的水溶性和磁学性质,在30min之内可特异性地与RCA120充分结合;3)在外加磁场作用下,Lac-Au-Fe3O4对水溶液中RCA120的分离效率约为70%,可有效分离微量样品(1nmol/L)。通过本实验,笔者对糖基化磁性纳米粒子的制备及其与凝集素的反应有了较为深入的了解,为进一步发展简单、快速的病原微生物分离方法奠定了基础。