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应用四聚体酶联免疫斑点法和细胞内细胞因子染色法检测HIV-1感染者体内特异性细胞毒性T淋巴细胞的研究
1
作者
褚福亮
徐东平
+2 位作者
金磊
高福
王福生
《中国艾滋病性病》
CAS
2007年第1期7-10,41,共5页
目的应用四聚体(tetramer)、酶联免疫斑点法(ELISPOT)和细胞内细胞因子染色(ICCS)方法研究HIV-1感染者细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)的数量和功能。方法应用三种tetramer检测14例HLA-A2阳性的HIV-1感染者外周血中特异性CTLs的频率,同时采用SL...
目的应用四聚体(tetramer)、酶联免疫斑点法(ELISPOT)和细胞内细胞因子染色(ICCS)方法研究HIV-1感染者细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)的数量和功能。方法应用三种tetramer检测14例HLA-A2阳性的HIV-1感染者外周血中特异性CTLs的频率,同时采用SL9(SLYNTVATL)体外冲击HIV-1感染者的外周血单核细胞(PBMCs)。通过ELISPOT和ICCS方法检测产生γ-干扰素(IFN-γ)的CTLs,初步分析特异性CTLs在HIV-1感染中的作用。结果Tetramer SL9、IV9和YI9检测出的特异性CTLs占CD8+T细胞的百分比范围分别为0.06%-3.27%,0.05%-0.57%和0.09%-0.66%;其检出阳性率分别为11/14、10/14和5/7。ELISPOT和ICCS检测的产生IFN-γ的细胞近似,但远低于tetramer检测出的病毒特异性CTLs的数量。结论Tetramer可以敏感地检测出特异性CTLs。ELISPOT和ICCS则是研究CTLs功能的重要手段。联合使用三种方法可以更准确地评价HIV-1感染者体内CTLs的特征及其临床意义。
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关键词
艾滋病病毒
细胞毒性T淋巴细胞
四聚体
酶联免疫斑点法
细胞内细胞因子染色
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职称材料
腺病毒介导的低氧诱导因子-1α基因对大鼠缺血再灌注后脑梗死体积影响的初步观察
被引量:
2
2
作者
陶陶
陈莉芬
+1 位作者
胡长林
唐宏
《复旦学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第5期594-596,F0003,共4页
目的探讨腺病毒介导的低氧诱导因子1α(HIF1α)基因对大鼠缺血再灌注后脑梗死体积的影响。方法构建HIF1α基因的重组腺病毒(AdvHIF1α),建立大鼠大脑中动脉阻塞性脑缺血(MCAO)模型:①将携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的重组腺病毒(Adv)于MCA...
目的探讨腺病毒介导的低氧诱导因子1α(HIF1α)基因对大鼠缺血再灌注后脑梗死体积的影响。方法构建HIF1α基因的重组腺病毒(AdvHIF1α),建立大鼠大脑中动脉阻塞性脑缺血(MCAO)模型:①将携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的重组腺病毒(Adv)于MCAO后立即注射入缺血侧脑室,观察其在脑内的表达部位和持续时间;②动物被随机分为4组:假手术(sham)组、缺血再灌注(IR)组、AdvHIF1α组、Adv组,除sham组外,其余3组均于MCAO后立即在缺血侧脑室分别注射磷酸盐缓冲液、AdvHIF1α基因和Adv,治疗72h,取大脑,平均切成6片,用2,3,5三苯基氯化四氮唑染色,以观察AdvHIF1α对大鼠脑梗死体积的影响。结果注射Adv后,GFP仅在大鼠双侧侧脑室壁和脑室内的脉络丛及室管膜上皮细胞表达,持续2周左右;AdvHIF1α能明显缩小脑梗死体积,分别与IR组和Adv组相比有显著性差异(P<0.05)。结论AdvHIF1α能显著缩小大鼠缺血再灌注的脑梗死体积,提示其具有治疗缺血性卒中的作用。
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关键词
低氧诱导因子-1Α
局灶性脑缺血
重组腺病毒
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职称材料
EHEC0157:H7紧密黏附素及突变体与受体Tir的结合特性研究
3
作者
易勇
肖敏
+12 位作者
罗萍
樊峥
贾莉萍
魏平
陈兴明
李丹
刘春雷
高峰
王贵华
司少艳
毛旭虎
邹全明
敬华
《中华微生物学和免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第6期525-531,共7页
目的表达纯化肠出血性大肠杆菌(EHEC)0157:H7的紧密黏附素(intimin)及突变体intiminN916Y,并构建其转位紧密黏附素受体(translocatedint intin receptor,Tir)结合片段(intiminbinding domain,Tir-IBD),通过BIACore技术检...
目的表达纯化肠出血性大肠杆菌(EHEC)0157:H7的紧密黏附素(intimin)及突变体intiminN916Y,并构建其转位紧密黏附素受体(translocatedint intin receptor,Tir)结合片段(intiminbinding domain,Tir-IBD),通过BIACore技术检测紧密黏附素及突变体intiminN916Y与Tit.IBD蛋白质相互作用特性的变化,探索特定氨基酸的突变对其黏附结合功能的影响。方法设计引物采用PCR法自EHEC0157:H7基因组扩增Tir—IBD的编码基因tir-~d,TA克隆后构建原核表达质粒pET-21a(+)-tir—ibd,经测序鉴定后转化最coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,PAGE检测。目的蛋白经Ni.NTA亲和纯化后,再用阴离子交换柱ResourceQ和分子筛柱Superdex200进行纯化。同时按包涵体复性后纯化的方案制备紧密黏附素及突变体intiminNgl6Y,将所得高纯度目的蛋白Tir-IBD适当稀释后耦联BIACore3000配套的NTA芯片,在25℃和37℃条件下分别以紧密黏附素及突变体intim.inN916Y作为流动相进行BIACore检测。结果EHEC0157:H7基因组扩增出了约270bp的目的片段;原核表达质粒pET-21a(+)-tir-ibd经酶切及测序鉴定与设计序列一致。转化EcoliBL21(DE3)后IPTG诱导目的蛋白表达率约15%;PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量(肘,)约10x103,破菌后电泳证实目的蛋白为可溶表达。Ni-NTA亲和纯化和阴离子交换纯化效果明显,高纯度的Tir-IBD蛋白耦联NTA芯片,在25℃和37℃条件下对紧密黏附素及突变体intiminN916Y与'Fir.IBD相互作用的BIACore检测结果显示,intiminN916Y特定氨基酸的突变对其结合能力有明显影响并呈温度依赖性。结论EHEC0157:H7的紧密黏附素、突变体intiminN916Y及Tir-IBD经基因克隆后获得了较好的表达,纯化后获得高纯度的目的蛋白。在此基础上建立了蛋白相互作用的BIACore检测体系,证明intiminN916Y特定氨基酸的突变对其结合能力有明显影响并呈温度依赖性。
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关键词
EHEC0157:H7
蛋白质相互作用
紧密黏附素
imiminNgl6Y
Tir—IBD
原文传递
题名
应用四聚体酶联免疫斑点法和细胞内细胞因子染色法检测HIV-1感染者体内特异性细胞毒性T淋巴细胞的研究
1
作者
褚福亮
徐东平
金磊
高福
王福生
机构
中国科学院微生物研究所分子免疫中心
中国科学院
研究
生院
出处
《中国艾滋病性病》
CAS
2007年第1期7-10,41,共5页
文摘
目的应用四聚体(tetramer)、酶联免疫斑点法(ELISPOT)和细胞内细胞因子染色(ICCS)方法研究HIV-1感染者细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)的数量和功能。方法应用三种tetramer检测14例HLA-A2阳性的HIV-1感染者外周血中特异性CTLs的频率,同时采用SL9(SLYNTVATL)体外冲击HIV-1感染者的外周血单核细胞(PBMCs)。通过ELISPOT和ICCS方法检测产生γ-干扰素(IFN-γ)的CTLs,初步分析特异性CTLs在HIV-1感染中的作用。结果Tetramer SL9、IV9和YI9检测出的特异性CTLs占CD8+T细胞的百分比范围分别为0.06%-3.27%,0.05%-0.57%和0.09%-0.66%;其检出阳性率分别为11/14、10/14和5/7。ELISPOT和ICCS检测的产生IFN-γ的细胞近似,但远低于tetramer检测出的病毒特异性CTLs的数量。结论Tetramer可以敏感地检测出特异性CTLs。ELISPOT和ICCS则是研究CTLs功能的重要手段。联合使用三种方法可以更准确地评价HIV-1感染者体内CTLs的特征及其临床意义。
关键词
艾滋病病毒
细胞毒性T淋巴细胞
四聚体
酶联免疫斑点法
细胞内细胞因子染色
Keywords
HIV- 1/AIDS
CTLs
Tetramer
ELISPOT
ICCS
分类号
R512.91 [医药卫生—内科学]
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职称材料
题名
腺病毒介导的低氧诱导因子-1α基因对大鼠缺血再灌注后脑梗死体积影响的初步观察
被引量:
2
2
作者
陶陶
陈莉芬
胡长林
唐宏
机构
重庆医科大学附属第二医院神经内科
中国科学院微生物研究所分子免疫中心
出处
《复旦学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第5期594-596,F0003,共4页
基金
重庆市教委资助项目(渝科教2002-18号)
文摘
目的探讨腺病毒介导的低氧诱导因子1α(HIF1α)基因对大鼠缺血再灌注后脑梗死体积的影响。方法构建HIF1α基因的重组腺病毒(AdvHIF1α),建立大鼠大脑中动脉阻塞性脑缺血(MCAO)模型:①将携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的重组腺病毒(Adv)于MCAO后立即注射入缺血侧脑室,观察其在脑内的表达部位和持续时间;②动物被随机分为4组:假手术(sham)组、缺血再灌注(IR)组、AdvHIF1α组、Adv组,除sham组外,其余3组均于MCAO后立即在缺血侧脑室分别注射磷酸盐缓冲液、AdvHIF1α基因和Adv,治疗72h,取大脑,平均切成6片,用2,3,5三苯基氯化四氮唑染色,以观察AdvHIF1α对大鼠脑梗死体积的影响。结果注射Adv后,GFP仅在大鼠双侧侧脑室壁和脑室内的脉络丛及室管膜上皮细胞表达,持续2周左右;AdvHIF1α能明显缩小脑梗死体积,分别与IR组和Adv组相比有显著性差异(P<0.05)。结论AdvHIF1α能显著缩小大鼠缺血再灌注的脑梗死体积,提示其具有治疗缺血性卒中的作用。
关键词
低氧诱导因子-1Α
局灶性脑缺血
重组腺病毒
Keywords
hypoxia inducible factor-1α
focal cerebral ischemia
recombinant adenovirus
分类号
R743.33 [医药卫生—神经病学与精神病学]
下载PDF
职称材料
题名
EHEC0157:H7紧密黏附素及突变体与受体Tir的结合特性研究
3
作者
易勇
肖敏
罗萍
樊峥
贾莉萍
魏平
陈兴明
李丹
刘春雷
高峰
王贵华
司少艳
毛旭虎
邹全明
敬华
机构
解放军第
第三军医大学检验系临床
微生物
及
免疫
学教研室
中国科学院微生物研究所分子免疫中心
出处
《中华微生物学和免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第6期525-531,共7页
基金
首都医学发展科研基金(2009-3068)
国家自然科学基金(30770514)
文摘
目的表达纯化肠出血性大肠杆菌(EHEC)0157:H7的紧密黏附素(intimin)及突变体intiminN916Y,并构建其转位紧密黏附素受体(translocatedint intin receptor,Tir)结合片段(intiminbinding domain,Tir-IBD),通过BIACore技术检测紧密黏附素及突变体intiminN916Y与Tit.IBD蛋白质相互作用特性的变化,探索特定氨基酸的突变对其黏附结合功能的影响。方法设计引物采用PCR法自EHEC0157:H7基因组扩增Tir—IBD的编码基因tir-~d,TA克隆后构建原核表达质粒pET-21a(+)-tir—ibd,经测序鉴定后转化最coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,PAGE检测。目的蛋白经Ni.NTA亲和纯化后,再用阴离子交换柱ResourceQ和分子筛柱Superdex200进行纯化。同时按包涵体复性后纯化的方案制备紧密黏附素及突变体intiminNgl6Y,将所得高纯度目的蛋白Tir-IBD适当稀释后耦联BIACore3000配套的NTA芯片,在25℃和37℃条件下分别以紧密黏附素及突变体intim.inN916Y作为流动相进行BIACore检测。结果EHEC0157:H7基因组扩增出了约270bp的目的片段;原核表达质粒pET-21a(+)-tir-ibd经酶切及测序鉴定与设计序列一致。转化EcoliBL21(DE3)后IPTG诱导目的蛋白表达率约15%;PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量(肘,)约10x103,破菌后电泳证实目的蛋白为可溶表达。Ni-NTA亲和纯化和阴离子交换纯化效果明显,高纯度的Tir-IBD蛋白耦联NTA芯片,在25℃和37℃条件下对紧密黏附素及突变体intiminN916Y与'Fir.IBD相互作用的BIACore检测结果显示,intiminN916Y特定氨基酸的突变对其结合能力有明显影响并呈温度依赖性。结论EHEC0157:H7的紧密黏附素、突变体intiminN916Y及Tir-IBD经基因克隆后获得了较好的表达,纯化后获得高纯度的目的蛋白。在此基础上建立了蛋白相互作用的BIACore检测体系,证明intiminN916Y特定氨基酸的突变对其结合能力有明显影响并呈温度依赖性。
关键词
EHEC0157:H7
蛋白质相互作用
紧密黏附素
imiminNgl6Y
Tir—IBD
Keywords
EHEC O157 : H7
Protein-protein interaction
Intimin
IntiminN916Y
Tir-IBD
分类号
R392.1 [医药卫生—免疫学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
应用四聚体酶联免疫斑点法和细胞内细胞因子染色法检测HIV-1感染者体内特异性细胞毒性T淋巴细胞的研究
褚福亮
徐东平
金磊
高福
王福生
《中国艾滋病性病》
CAS
2007
0
下载PDF
职称材料
2
腺病毒介导的低氧诱导因子-1α基因对大鼠缺血再灌注后脑梗死体积影响的初步观察
陶陶
陈莉芬
胡长林
唐宏
《复旦学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2005
2
下载PDF
职称材料
3
EHEC0157:H7紧密黏附素及突变体与受体Tir的结合特性研究
易勇
肖敏
罗萍
樊峥
贾莉萍
魏平
陈兴明
李丹
刘春雷
高峰
王贵华
司少艳
毛旭虎
邹全明
敬华
《中华微生物学和免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012
0
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