植物芪类植保素研究进展

评述了芪类植保素的研究状况 ,重点介绍了芪类化合物的分布、种类、理化特性、芪类植保素的生物合成、芪合酶基因及其表达调控、芪合酶蛋白、芪合酶基因转化植物及其抗病性等方面的研究进展 ,并讨论了存在的问题 。

植物抗渗透胁迫基因工程研究进展

植物抗渗透胁迫基因工程研究进展刘岩１彭学贤２谢友菊１戴景瑞１（中国农业大学植物科技学院北京１０００９４）（中国科学院微生物研究所植物生物技术开放实验室北京１０００８０）２土壤盐渍化是影响农业生产和生态环境的一个重要因素。据统计，全世界的盐土约占陆地面...

A组轮状病毒VP6与霍乱毒素B亚基融合蛋白在大肠杆菌中的表达及生物活性分析

利用霍乱毒素B亚基 (CholeratoxinBsubunit,CTB)的免疫载体作用 ,将轮状病毒相关抗原引入口服免疫体系 ,可激起有效的粘膜免疫反应 ,这里报道了CTB基因与A组轮状病毒地方株T114VP6全基因的融合 ,并在大肠杆菌BL2 1(DE3 )中进行了融合蛋白的表达。在IPTG诱导下得到分子量为 5 6kD的融合蛋白 ,表达量占菌体蛋白的15 %。分别用抗CT的抗体和抗A组轮状病毒的高价免疫血清进行WesternBlot检测 ,结果证明融合蛋白CTB VP6保留了天然霍乱毒素B亚基及轮状病毒VP6的抗原性。GM1 ELISA检测表明 ,复性后的融合蛋白具有与神经节苷脂GM1 结合的能力。

高度耐盐双价转基因烟草的研究

随着全球性人口的增长和土地退化的加剧,开发利用广阔盐碱地和干旱土地的需要日益迫切。植物生物技术的日臻完善,为培育高效耐盐植物迎来了一丝曙光。在高渗条件下,耐盐的微生物或植物细胞通过增加胞内一些相溶性溶质的浓度来维持渗透压的平衡。这些可溶性溶质包括无机离子、糖类、多元醇、氨基酸和生物碱等。通过基因工程手段,使细胞内积累脯氨酸、甜菜碱、甘露醇、海藻糖,能够不同程度地提高转基因烟草的耐盐性。多元醇含有多个羟基,亲水性能强。

毕赤酵母基因操作技术的改进及其在水蛭素表达中的应用

毕赤酵母是日益受到重视的基因工程受体菌 ,但是目前尚没有一种简便、高效的转化方法 ,也没有一种稳定、可靠的菌落PCR方法。本文通过在通常筛选重组子的MD培养基中增添 1mol/L山梨糖醇使毕赤酵母电穿孔转化效率提高 10倍以上。并比较系统地分析了其他影响电穿孔转化效率的因素 ,如毕赤酵母生长状况即OD60 0 ,不同的整合位点 (BglⅡ、SacⅠ、SalⅠ、StuⅠ ) ,及不同的毕赤酵母受体菌 (GS115和KM71)等。本文描述的转化方法所能达到的转化效率比目前大多数文献报道的效率要高 ,可使每微克质粒DNA产生的整合到受体菌染色体上的转化子述 2 80 0个 ;另外 ,我们经过一种冷热处理毕赤酵母菌落的方法使其细胞壁裂解 ,并改变通常PCR缓冲液的组成成分后 ,毕赤酵母菌落PCR方法几乎和大肠杆菌的操作一样简便可靠。借助本文所描述的电穿孔转化方法和菌落PCR方法 ,成功实现了水蛭素在毕赤酵母中的分泌表达 ,表达量为每毫升培养上清 2 0 μg ,其生物活性达每毫升培养上清 82个国际单位。

植物病毒协生作用及其分子机理

植物病毒协生作用分布广 ,是造成农作物减产的重要原因之一。抗病毒转基因植物中协生作用的出现 ,严重限制了基因工程植物的商品化生产。本文对植物病毒协生作用的类型和特点、协生作用中病毒与病毒、病毒与环境间的相互作用及其分子机制进行了阐述。

棉花微丝结合蛋白基因GhPFN1的表达及功能研究

Profilin是微丝骨架的超分子结构和功能的关键调节因子之一。以陆地棉(Gossypium hirsu-tum)棉纤维为材料,分离鉴定了profilin基因家族的一个成员——GhPFN1,同源性比较表明GhPFN1与已报道的其他植物的profilin有着较高的同源性,半定量RT-PCR分析结果显示GhPFN1基因主要在棉纤维细胞内表达,在纤维细胞的快速延伸阶段表达量最高,GhPFN1在裂殖酵母细胞中过量表达导致细胞长度和形态发生显著变化,这些结果暗示GhPFN1基因可能在纤维细胞的极性延伸中具有功能。

香蕉束顶病毒中国漳州分离物DNA4编码区的克隆及在大肠杆菌中的表达

利用 PCR方法克隆了香蕉束顶病毒中国漳州分离物 (Banana bunchy top virus Chinese Zhangzhou,BBTV-ZZ) DNA 4编码区 ,序列分析结果表明 ,该编码区由 3 5 1个核苷酸组成 ,推测其编码一个含 1 1 6个氨基酸的蛋白质 (M.W.1 4.5 ku)。将 BBTV DNA 4编码区克隆到原核表达载体 p TYB2上 ,构建了该基因的融合表达载体 p TYB-Β4。SDS-PAGE电泳分析表明 ,69ku的融合蛋白在大肠杆菌 ER2 5 66(DE3 )中正确表达。以含表达产物的凝胶为抗原 ,免疫家兔 ,制备了 BBTV DNA4编码蛋白的特异抗血清 ,Western blot显示 ,在Southern blot分析为阳性的转 BBTV DNA4编码区烟草中 ,1 4.5 ku的 BBTV DNA4编码区蛋白得到表达。这为进一步研究 BBTV DNA 4编码区蛋白在整个植株体内的功能奠定了基础。

烟草花药特异表达基因启动子的克隆及序列分析

通过PCR扩增,从烟草(Nicotiana tabacum cv.NC89)中克隆了花药绒毡层中特异表达基因的启动子,序列分析表明,该启动子含1303个核苷酸,与已报道的序列比较,核苷酸的同源性为99.4％。

雪花莲外源凝集素基因的克隆及序列分析

外源凝集素(lectin)是自然界中广泛分布的一组蛋白质,在多种生物中均有发现。外源凝集素为一类能特异地识别并可逆结合糖类复合物的糖基部分而不改变被识别糖基的共价结构的非免疫性蛋白。它对植物有很重要的生理作用。例如保护功能,在植物生长的各个阶段以不同的方式保护植物免于害虫的侵害;作为储藏蛋白,在植物发芽和幼苗生长阶段,裂解的外源凝集素为其提供氨基酸;外源凝集素还可能参与细胞间的识别,如在植物建立共生关系中,根部的外源凝集素可能是宿主特异性的重要决定因素。

马铃薯Y病毒HC-Pro中心区域在病毒协生作用中的主导地位

利用PCR方法获得了马铃薯病毒中国株系 (PVY C)HC Pro基因的 5个缺失突变体 ,构建了相应的植物表达载体。通过土壤农杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens)介导法转化了烟草品种K32 6 (Nicotinatabacumcv.K32 6 )。PCR和Southernblot分析证明了HC Pro基因及其缺失突变体已整合到烟草基因组中 ,Westernblot表明它们在转基因烟草中得到了表达。侵染性试验发现HC Pro中心区域介导转基因烟草中PVY C和黄瓜花叶病毒 (CMV)、PVY C和马铃薯X病毒 (PVX)之间的协生作用 ,从而明确了PVY CHC

竹节花黄斑驳病毒启动子在棉花维管组织中是一个强启动子

用竹节花黄斑驳病毒 (CommelinaYellowMottleVirus,CoYMV)启动子_gus嵌合基因和CaMV 35S_gus嵌合基因通过根癌土壤杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens (SmithetTownsend)Conn)LBA44 0 4介导分别转入棉花 (Gossypiumhir sutumL .cv .Jingmian 7,J7G) ,诱导再生了棉花转基因植株。GUS活性的组织化学定位检测表明 ,在 5 97bpCoYMV启动子的驱动下 ,gus基因在棉花植株的叶、叶柄、苞叶、茎、根、下胚轴的维管组织及花的大部分组织的维管束中高表达。在含有较多维管组织细胞的叶脉和根中 ,CoYMV启动子_gus的表达活性与CaMV 35S_gus相当或更高 ,但在维管组织细胞含量相对较少的叶片、子叶和下胚轴中 ,CoYMV启动子_gus的表达活性仅为CaMV 35S_gus的 1/3～ 1/5。转CaMV 35S_gus基因棉花植株的叶脉与叶片GUS活性比例为 0 .5 ,而转CoYMV启动子_gus基因棉花约为 2 .0。随着转基因棉花的生长发育 ,gus基因在叶维管束中的表达活性有增强的趋势。以上结果表明CoYMV启动子在转基因棉花中具有维管束特异性。

马铃薯Y病毒蚜传辅助因子促进马铃薯X病毒长距离运输(英文)

采用PCR和定点突变法 ,对马铃薯Y病毒中国株系 (ChinesestrainofpotatoYpotyvirus,PVY_C)蚜传辅助成分 (helpercomponentproteinase ,HC_Pro)基因中心区域的CCCT基序和PTK基序进行了定点改造 ,获得了 4种突变体。然后将突变体克隆到植物表达载体pBin438中 ,所得到的重组体通过根癌土壤杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens (SmithetTownsend)Conn)介导法转化了烟草 (NicotianatabacumL .cv .K32 6 )。Southernblotting和Westernblotting分析表明 4种突变体已经成功地整合到烟草的基因组中 ,并在蛋白水平上得到了表达。马铃薯X病毒 (potatoXpotexvirus,PVX)对转基因烟草的攻毒实验表明 ,4种突变体均使PVY_CHC_Pro严重丧失了促进PVX病毒粒子在寄主体内积累和提高PVX致病性的功能 ,说明CCCT、PTK基序为PVY_CHC_Pro介导PVX/PVY协生作用所必需。同时证明了HC_Pro具有增强PVX在寄主体内长距离运输的功能。

水稻黄矮病毒基因2的核苷酸序列

从水稻黄矮病毒（ＲＹＳＶ）基因组的ｃＤＮＡ文库中，获得了包含邻接核衣壳蛋白基因的基因２的克隆，并测定了其核苷酸序列。ＲＹＳＶ基因２的５′端起始序列推测为５′－ＡＡＣＡＣ－３′，该起始序列与ＲＹＳＶ其他基因及其他弹状病毒基因的５′端起始序列高度同源。通过测定感病水稻体内ＲＹＳＶ基因２的转录物的３′端序列，精确地定位了ＲＹＳＶ基因２的３′端终止位点。由此确定ＲＹＳＶ基因２全长１２１１个核苷酸，它含有４２个核苷酸的５′端非翻译区，９６９个核苷酸的蛋白质编码区（包括一个终止密码子）及２００个核苷酸的３′端非翻译区。ＲＹＳＶ基因２编码的蛋白质的氨基酸序列与其它弹状病毒基因２编码的磷酸化蛋白（ＶＳＶ的Ｐ蛋白，ＲＶ的Ｍ１蛋白和ＳＹＮＶ的Ｍ２蛋白）相比，缺乏广泛的同源性，但尚存在一个长约３０个氨基酸的序列保守区域。而且ＲＹＳＶ基因２编码的蛋白中含有７个可被ＣａｓｅｉｎｋｉｎａｓｅⅡ磷酸化的位点（Ｓ／Ｔ－Ｘ－Ｘ－Ｄ／Ｅ），有可能它也是一个磷酸化蛋白。因此推测ＲＹＳＶ基因２编码ＲＹＳＶＮＳ蛋白。

黄瓜花叶病毒山东株(CMV-SD)RNA2全长cDNA克隆的构建及全序列分析

分别利用５’ＲＡＣＥ和３’ＲＡＣＥ确定了ＣＭＶＳＤＲＮＡ２的５’和３’末端序列，在此基础上，利用ＲＴＰＣＲ得到了ＲＮＡ２的５’端一半的ｃＤＮＡ克隆ｐＣ２５和３’端一半的ｃＤＮＡ克隆ｐＣ２３，并通过拼接构建了ＲＮＡ２全长ｃＤＮＡ克隆ｐＣ２Ｆ。通过对ｐＣ２５和ｐＣ２３进行序列测定，得到了ＲＮＡ２的全序列。序列分析结果表明ＣＭＶＳＤＲＮＡ２由３０４８ｎｔ组成，其中存在２个部分重叠的阅读框ＯＲＦ１（７９～２６５２ｎｔ）和ＯＲＦ２（２４１４～２７４６ｎｔ），分别编码８５８ａａ的２ａ蛋白和１１１ａａ的２ｂ蛋白，并在２ａ蛋白的序列中发现了动植物病毒复制酶所特有的两个保守序列。该株系ＲＮＡ２核苷酸序列与分属ＣＭＶＩ亚组的Ｆｎｙ株系和ＩＩ亚组的Ｑ株系ＲＮＡ２的核苷酸序列同源性分别为９１７％和７５６％；２ａ蛋白的氨基酸序列同源性分别为９３８％和６７７％，２ｂ蛋白的氨基酸序列同源性分别为８３０％和５１３％。同源性比较的结果表明ＳＤ株系属于ＣＭＶＩ亚组。

黄瓜花叶病毒cDNA载体在烟草细胞中表达外源基因

为了探讨利用黄瓜花叶病毒 (CMV )构建表达载体的可行性 ,分离了山东株 (SD)CMVRNA 3的全长cDNA。测定其全序列后 ,采用定点突变的方法在衣壳蛋白 (CP)基因起始密码子处改造出一个NsiⅠ位点 ,可将外源基因引入NsiⅠ位点和CP基因终止密码子上游附近的XhoⅠ或SalⅠ位点而置换掉CP基因。分别用绿色荧光蛋白 (GFP)基因、β 葡糖醛酸酶 (GUS)基因以及小鼠二氢叶酸还原酶 (DHFR)基因 3种报告基因置换CP基因。将Fny株CMVRNA 1、RNA 2和SD CMV嵌合RNA 3的cDNA分别插入pCass载体的 35S启动子和终止子之间 ,将构建的置换型载体直接以质粒的方式转染烟草原生质体 ,表达了

3价转病毒外壳蛋白基因马铃薯的获得

马铃薯在全世界广泛种植,既是重要的粮食作物,又可作蔬菜,其世界年总产量仅次于小麦、水稻和玉米.马铃薯Y病毒(PVY)、马铃薯X病毒(PVX)和马铃薯卷叶病毒(PLRV)引起的病害是造成我国马铃薯退化的重要原因,严重危害马铃薯生产.尤其是2种甚至3种病毒混合侵染带来的损失远大于各病毒单独侵染.国外科学家的研究表明,表达病毒外壳蛋白(CP)基因的转基因马铃薯能显著延缓该病毒病害症状的发展并减轻其危害程度.美国已获得同时表达PVX和PVY CP基因的双价转基因马铃薯,其中1个转基因株系对这两种病毒的混合侵染表现高抗.国际上还未见转3基因抗病毒马铃薯的报道.