CCR5拮抗剂新药理作用及机制研究进展

C-C趋化因子受体5(C-C chemokine receptor 5,CCR5)是G蛋白偶联受体家族成员,在多种细胞表面表达,CCR5与其特异性配体结合而发挥生物学作用。随着对CCR5蛋白的深入研究发现,CCR5作为辅助受体不仅介导HIV的感染过程,还参与许多疾病的病理过程。因此,CCR5拮抗剂非抗HIV药理作用不断被发现,其抗肿瘤、抗炎、抗排异等活性作用的研究逐渐增多,拓宽了其临床适应症。本文简要综述了CCR5拮抗剂的新发现药理作用及机制研究进展,以期为CCR5拮抗剂的进一步研究和开发提供参考。

艾滋病HAART治疗的不良反应及机制研究进展

高效抗逆转录病毒疗法(Highly active antiretroviral treatment,HAART)是目前临床上最基本的艾滋病治疗方法,能有效降低患者病毒载量,延缓AIDS进程,显著延长患者寿命。随着制药成本的下降及我国"四免一关怀"政策的实施,绝大多数艾滋病患者能及时获得有效的HAART治疗。然而,在长期用药过程中,HAART药物所致的不良反应也引起医护人员及患者的广泛关注。所有抗逆转录病毒药物均能在患者体内引起药物相关的毒副反应,包括皮疹、胃肠道反应、肝毒性、肾毒性、骨髓抑制、代谢紊乱及神经系统毒性等。部分严重不良反应可导致HAART治疗的中断,甚至出现机体生理功能的严重损伤,严重影响艾滋病患者预后。本文综述了艾滋病HAART治疗中出现的不良反应及其发生机制。

阿兹夫定体外抗登革病毒活性研究

本文通过检测化合物对登革Ⅱ型重组病毒(DENV-ⅡLuc+)表达海肾荧光素酶活性的影响,进行化合物筛选,发现阿兹夫定(azvudine,FNC)、盐酸阿兹夫定(hydrochloride salt of azvudine,FNC-HCl)和三磷酸酯阿兹夫定(triphosphate azvudine,FNC-TP)能够抑制DENV-ⅡLuc+的复制,并研究其体外抗登革病毒(dengue virus,DENV)活性。首先通过噬斑法检测FNC、FNC-HCl和FNC-TP对DENV的抑制活性;并通过蛋白印迹实验检测3种化合物对DENV-Ⅱ囊膜蛋白E(envelope protein E)表达的影响,最后通过实时定量PCR检测化合物对DENV-Ⅱ病毒RNA的抑制作用。结果显示,FNC、FNC-HCl和FNC-TP抑制DENV复制的半数有效浓度(EC50)在0.54~25.42μmol·L^(-1)之间,阳性药物利巴韦林抑制DENV-Ⅱ的EC50为40.78±1.02μmol·L^(-1)。蛋白印迹实验及定量结果显示,3种化合物均能抑制DENV-Ⅱ囊膜蛋白E的表达,并且显著地抑制DENV-Ⅱ病毒RNA的复制。通过MTT法检测发现FNC、FNC-HCl和FNC-TP的细胞毒性很小,半数细胞毒性浓度(CC50)均大于3 000.00μmol·L^(-1)。本研究表明FNC、FNC-HCl和FNC-TP在细胞水平、蛋白水平及RNA水平均能抑制DENV的复制,且抑制作用优于利巴韦林,有望成为抗登革病毒的候选药物。

富马酸替诺福韦二吡呋酯体外抗寨卡病毒活性研究

富马酸替诺福韦二吡呋酯(tenofovir disoproxil fumarate, TDF)是一种核苷类似物(nucleoside analogues),已广泛用于临床治疗人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus, HIV)和乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染。本研究旨在探讨TDF是否具有体外抗寨卡病毒(Zika virus, ZIKV)活性。首先通过噬斑抑制实验在细胞水平检测TDF是否具有抑制ZIKV作用,随后通过实时荧光定量PCR (real-time quantitative PCR)实验和蛋白质印迹(Western blot)实验分别在RNA水平和蛋白水平进一步验证TDF的抗ZIKV活性,最后通过MTT实验检测TDF的细胞毒性。结果发现, TDF不仅可降低ZIKV感染细胞后噬斑形成,还可抑制ZIKV RNA复制和ZIKV NS2B蛋白的表达,其对ZIKV的半数有效浓度(50%effective concentration, EC50)为14.96~27.47μmol·L-1。阳性药物利巴韦林抑制ZIKV的EC50为56.01±12.16μmol·L-1。MTT检测结果表明, TDF和利巴韦林的细胞毒性很小,半数细胞毒浓度(50%cytotoxic concentration, CC50)均大于500μmol·L-1。通过CC50/EC50计算出TDF的治疗指数(therapeutic index, TI)大于18.20,高于阳性对照药利巴韦林。本研究表明, TDF在细胞、RNA及蛋白水平均具有很好的体外抗ZIKV活性,有望成为抗ZIKV治疗的候选药物。

氯喹联合用药体外抗HIV-1作用研究

本文评价氯喹与已上市抗HIV药物联合使用的体外抗HIV-1作用和抑制TLR7激动剂引起的浆细胞样树突状细胞(plasmacytoid dendritic cells,p DC)活化及Ⅰ型干扰素分泌上调的作用。采用MTT法检测氯喹对C8166、TZM-bl、PBMC细胞的毒性。采用荧光素酶活性检测方法、ELISA检测p24抗原测定氯喹分别与雷特格韦(rategrivir,RAL)、恩夫韦肽(enfuvirtide,T-20)、茚地那韦(indinavir,IDV)和依法韦仑(efavirenz,EFV)联合用药抗HIV-1_(ⅢB)、HIV-1_(KM018)活性。流式细胞术检测氯喹分别与RAL、IDV联合使用对细胞p DC活化水平的影响。定量PCR检测氯喹分别与RAL、IDV联合使用对细胞内IFN-α、IFN-βm RNA水平上调的影响。结果表明,氯喹对C8166、TZM-bl和PBMC细胞表现出较低的细胞毒性,半数细胞毒浓度(median cytotoxic concentration,CC_(50))分别为85.02±0.28、73.67±5.10和91.84±4.10μmol·L^(-1)。氯喹分别与RAL、T-20、IDV、EFV联合用药呈中度协同、强协同、相加、中度拮抗效果。氯喹分别与RAL、IDV的联合使用相比于氯喹单药使用对p DC活化水平和IFN-α、IFN-βm RNA表达水平的下调作用无统计学差异。本研究发现氯喹与不同类型的已上市抗HIV药物联合使用呈现不同程度的协同、拮抗或相加抗HIV-1作用。氯喹分别与RAL、IDV联合使用不影响氯喹对TLR7激动剂引起的p DC活化和Ⅰ型干扰素分泌上调的抑制作用。本研究希望能够给氯喹应用于抗HIV治疗提供参考,促进氯喹更广泛地应用于临床研究和治疗中。

葡萄糖代谢异常导致SIVmac239感染北平顶猴急性期体重变化

目的探讨艾滋病急性期炎症因子、脂类代谢及葡萄糖代谢对体重的影响。方法检测SIVmac239感染北平顶猴急性期炎症因子(TNF-α、IL-6)、脂类代谢(胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇)及葡萄糖代谢参数(胰岛素、胰岛素抵抗指数),比较体重增加组和体重减少组SIV感染北平顶猴之间的差异,运用Pearson相关分析探讨胰岛素抵抗与血浆病毒载量的相关性。结果在SIVmac239感染北平顶猴急性期,炎症因子和血脂四项在体重增加组与体重减少组之间无明显差异;体重增加组胰岛素水平明显下降,体重减少组胰岛素水平明显升高,并出现胰岛素抵抗表现;Pearson分析显示,感染后第5周及第11周胰岛素抵抗指数变化与血浆病毒载量呈正相关。结论 SIVmac239感染急性期,葡萄糖代谢异常可能是导致北平顶猴体重变化的主要原因。

抗登革病毒化合物及作用机制研究进展

登革病毒感染引起登革热,是一种蚊媒传播病毒,给人类的生命健康造成了严重的威胁。目前尚无有效的抗登革病毒药物和疫苗用于临床治疗和预防。因此,研究对病毒生命周期中起关键作用的蛋白及宿主受体,设计出抗登革病毒靶标的抑制剂,从而选择性地抑制病毒的感染复制具有重要意义。本文就目前在研的抗登革病毒化合物及作用机制进行综述。

地塞米松刺激HepG_2细胞内源性NTCP表达及在抗HBV药物筛选中的应用

目的观察地塞米松处理人肝癌细胞HepG_2对细胞内源性NTCP mRNA的表达影响,以及刺激后该体系在抗HBV药物筛选中的应用。方法采用不同浓度地塞米松刺激HepG_2细胞,处理后不同时间提取HepG_2细胞中总RNA,实时荧光定量PCR检测NTCP mRNA表达量,确定刺激NTCP mRNA表达最佳浓度及时间。采用最佳浓度和时间刺激HepG_2细胞,洗去培养基中残留地塞米松,实时荧光定量PCR检测NTCP mRNA表达变化。用HepG_2.2.15细胞培养上清浓缩HBV感染地塞米松刺激后的HepG_2细胞,ELISA检测细胞培养上清中HBs Ag。最后,采用阳性药物验证该体系的有效性、可行性。结果 0.5μm地塞米松刺激HepG_2细胞24h时NTCP mRNA表达量最高。撤去地塞米松后96h内,HepG_2细胞中内源性NTCP mRNA的表达有一定程度的下降并维持在一定水平。HBV感染地塞米松刺激后的HepG_2细胞后,在培养上清中能够检测到乙肝表面抗原。在该体系中,阿德福韦酯抗HBV活性的EC50为0.26μm,环孢菌素A的EC_(50)为0.19μm。结论地塞米松能够上调HepG_2细胞内源性NTCP mRNA的表达,能够更有效地介导HBV感染,且可以应用于抗HBV药物筛选。

环索奈德体外抑制寨卡病毒复制

寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)是一种新发蚊媒传播病毒,与胎儿严重先天性小脑畸形和成人格林-巴利综合征相关,至今尚无批准用于治疗ZIKV感染的药物或预防性疫苗。本文通过噬斑和细胞毒性实验发现环索奈德(ciclesonide)体外具有较好的抗ZIKV活性,其对ZIKV亚洲株SZ01和非洲株MR766的半数有效浓度(50%effective concentration,EC50)分别为(0.40±0.22)和(1.59±1.08)μmol·L^(-1),对Vero细胞的半数致死浓度(50%cytotoxic concentration,CC50)为(64.70±7.33)μmol·L^(-1);病毒产量降低实验和蛋白印迹实验显示环索奈德能够抑制ZIKV复制。此外,环索奈德还能够抑制A549细胞中ZIKV的复制;分时给药实验结果表明环索奈德主要作用于ZIKV RNA的合成阶段;进一步研究显示环索奈德还可抑制ZIKV的内化。本研究结果表明环索奈德是一种潜在的抗ZIKV药物。

FDA已批准上市药物托伐普坦可在体内外抑制寨卡病毒感染

寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)是黄病毒属中一个被忽视的病毒。近年来,由于其与小头畸形和其他先天性缺陷疾病的关系,引起了全球的广泛关注。目前,仍没有抗ZIKV的疫苗或治疗方法批准上市。我们通过噬斑实验及MTT实验筛选鉴定出一种FDA已批准上市药物--托伐普坦,具有抗亚洲谱系寨卡病毒活性且细胞毒性很低。病毒产量降低实验和蛋白印迹实验也进一步证实了托伐普坦的抗寨卡病毒活性。分时给药实验表明托伐普坦在细胞感染ZIKV后6到14 h发挥抗ZIKV活性,即作用于ZIKV生命周期的进入后阶段。此外,托伐普坦对非洲普系寨卡病毒也具有抑制作用,表明托伐普坦的抗ZIKV活性并不是毒株依赖性的。值得注意的是,托伐普坦还可降低ZIKV感染小鼠的死亡率。因此,托伐普坦是一个潜在的抗ZIKV治疗药物,值得进一步研究。