实验动物树鼩和人类疾病的树鼩模型研究概述

动物模型在生物医学领域(如回答人体各种重大生物学问题、解析人类疾病机理和新药研发等方面)已经做出了不可替代的巨大贡献。转化医学存在的问题使得树鼩(Tupaia belangeri chinensis)实验动物重新得到重视;人类疾病的树鼩模型也再次受到越来越多的关注。该文综述了国内外特别是近年来我国树鼩研究进展,包括树鼩基础生物学及动物模型方面取得的成绩,并分析了该领域目前存在的困难和问题,探讨了未来的一些研究方向。

昆明城郊中国树鼩群体线粒体DNA遗传多样性(英文)

由于树鼩是灵长类动物的近亲,且具有体型小、繁殖周期短、饲养管理成本低等优点,长期以来被认为有望替代灵长类动物用于人类疾病的动物模型研究。然而,目前对树鼩的群体遗传结构还知之甚少,这极大地限制了其在疾病动物模型研究的应用,也是其品系资源创制的瓶颈。本研究通过分析80只采自于云南省昆明周边地区的野生树鼩(Tupaia belangeri chinensis)线粒体DNA(mtDNA)多态性,结合国外报道的2个树鼩(Tupaia belangeri)序列比较后发现,在604bp的mtDNA控制区片段中共检测到29个核苷酸替代变异,这些变异共界定了13种单倍型,表现较高的群体遗传多样度。另外,昆明地区的树鼩与国外报道的2个树鼩间存在较大的遗传分化,mtDNA控制区单倍型之间的核苷酸替换数大于18个,远高于昆明地区树鼩群体内部不同单倍型之间的差异。选择含有代表性的mtDNA控制区单倍型的17个昆明地区树鼩个体进一步测定了细胞色素b基因片段(1134bp),结合前人报道的数据分析,结果进一步支持mtDNA控制区数据反映的遗传格局及揭示的昆明地区树鼩与国外报道树鼩之间的明显差异。本研究结果提示,昆明地区树鼩与国外树鼩之间存在较大遗传差异,在将树鼩用于人类疾病动物模型研究中要注意这些遗传差别。昆明城郊的树鼩群体具有较高的遗传多样度,在开展近交系建立等工作时须考虑选取群体内部具有代表性的mtDNA世系。

真菌性角膜炎角膜组织NOD1、NF-κBp65表达的变化以及炎症细胞浸润情况

目的探讨真菌性角膜炎角膜组织NOD1、NF-κBp65的表达变化以及炎症细胞浸润情况。方法取清洁级树鼩25只分成3组,实验组10只,空白对照组10只,正常对照组5只,均取右眼为实验眼。将茄病镰刀菌接种到沙氏葡萄糖琼脂培养基中培养,收集真菌孢子混悬液。实验组用胰岛素针头(29G)在实验眼角膜上皮细胞层做“#”形划痕,结膜囊滴真菌孢子混悬液5μL;空白对照组实验眼结膜囊滴生理盐水5μL,其余步骤同实验组;正常对照组不做任何处理。采用Western blot检测蛋白表达,HE染色观察炎症细胞浸润情况,免疫组织化学染色检测蛋白阳性表达情况。结果Western blot检测结果显示:实验组角膜组织中NOD1及NF-κBp65的蛋白相对表达量均明显升高,与正常对照组及空白对照组相比,差异均有统计学意义(均为P<0.05);正常对照组角膜组织中NOD1及NF-κBp65的蛋白相对表达量与空白对照组相比,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。免疫组织化学染色结果显示:正常对照组及空白对照组角膜上皮细胞胞浆均未见NOD1蛋白表达,实验组NOD1蛋白表达于角膜上皮细胞胞浆,表达强度与时间呈正相关;正常对照组及空白对照组角膜基质层及角膜内皮细胞层均未见NF-κBp65蛋白表达,实验组NF-κBp65蛋白表达于角膜基质层的中性粒细胞及角膜内皮细胞,表达强度与时间呈正相关。HE染色结果显示:正常对照组角膜各层组织结构正常,未见炎症细胞浸润;实验组造模后第1天,角膜水肿,上皮细胞层缺失,基质层见大量炎症细胞浸润,以中性粒细胞为主;造模后第3天,角膜高度水肿,组织形态消失,炎症细胞浸润数量明显多于第1天,同样以中性粒细胞为主。结论NOD1与NF-κBp65在树鼩镰刀菌性角膜炎角膜组织表达升高,NOD1/NF-κB信号通路在真菌性角膜炎促炎反应中发挥重要作用。

人工繁育仔树鼩睁眼时间的影响因素

为了探究树鼩人工繁育技术并为相关研究提供数据参考,本试验对2019年1月—2021年6月间收集的共352份全人工繁育的仔树鼩数据进行统计,采用SPSS 20.0软件单因素方差分析4个不同遗传背景树鼩家族仔树鼩睁眼时间的差异,采用t检验分别研究有无初乳、不同性别和有无腹泻对仔树鼩睁眼时间的影响,对幼仔出生重、睁眼重与睁眼时间进行Spearman相关分析和回归分析,计算回归系数(b值)、95%置信区间(95%CI)和P值。结果显示,家族Ⅱ与家族Ⅳ仔树鼩睁眼时间差异极显著(P<0.01),家族Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ仔树鼩睁眼时间差异极显著(P<0.01);无初乳个体睁眼时间极显著早于有初乳个体(P<0.01);雌性睁眼时间显著早于雄性(P<0.05);腹泻和未腹泻仔树鼩睁眼时间无显著差异(P>0.05);幼仔出生重与睁眼时间无相关性(r=-0.024,P>0.05);出生重与睁眼重呈正相关(r=0.410,P<0.01),回归分析显示[b=2.340,95%CI(1.798~2.882),P<0.01];睁眼时间与睁眼重呈正相关(r=0.484,P<0.01),回归分析显示[b=0.155,95%CI(0.129~0.180),P<0.01]。结果表明,在人工繁育条件下,仔树鼩睁眼时间受遗传调控影响,雌性、无初乳个体会更早睁眼,体重发育较轻个体可能较早睁眼,短期腹泻不影响幼仔睁眼时间。

猕猴全结肠内镜检查方法与观察

腹泻是猕猴常见肠道症状,相关肠道病变资料多源于猕猴尸检,尚无成功肠镜检查报告。本文旨在建立猕猴全结肠内镜检查方法及获得猕猴全结肠内镜图像。8只猕猴无〉2月的慢性腹泻史,管喂芒硝后,结肠清洁度符合内镜观察需求。采用电子消化内镜对猕猴全结肠进行观察,操作时间约10~20 min/只。4只动物结肠无明显异常病变,仅部分结构与人类有轻微差异。在4只〈1 d轻泻的猕猴中,内镜观察到结肠小片糜烂及溃疡,其中1只存在明显狭窄。术中及术后1周均无动物死亡。本文建立的猕猴全结肠内镜检查安全有效,对及时诊治猕猴结肠炎、评估药物干预疗效及提供优质实验动物具有重要意义。

猕猴养殖场寄生虫病综合防治措施

猕猴养殖对人类科学研究具有重要的影响作用。本文从介绍猕猴感染寄生虫的基本情况入手,说明加强猕猴养殖场寄生虫病综合防治具有非常重要的意义。

光照强度在树鼩繁殖中的进一步探索

目的:进一步探索人工饲养条件下光照强度对树鼩繁殖的影响,以及树鼩种质资源的保护。方法:于配套窗户设整体照明(强度控制在900lx以内)饲养间内应用昆明动物研究所实验动物中心自制3层笼具,各层笼子之间存在光照强度的浮动(已获专利,专利号:ZL 2013 202642719)对24只雄性、48只雌性树鼩进行饲养配对,观察各层笼子树鼩的怀孕率、产仔情况、产仔数、离乳成活率、二胎数等。结果:各层笼子树鼩的繁殖性能存在着一定的差异。结论:光照强度对树鼩繁殖有一定的影响。

新引进树鼩饲养管理方法

目的:为满足科研工作者需求及探索新引进树鼩饲养管理要点标准操作方法,为在人工饲养条件下提高树鼩饲养成活率,降低因环境、饮食、人为干扰、疾病等变化造成的死亡。方法:依据中心多年来所摸索成熟完善的饲养管理技术。结果:新引进第1批次105只树鼩饲养成活率98.06%,第2批次95只树鼩饲养成活率98.94%。结论:人工饲养管理条件下中心所提供的饲养笼子、饲喂方法、室内环境控制以及过渡期维生素、微量元素、辅食的添加是合理可行的。

树鼩妊娠后期剖腹取胎术

树鼩（Tupaia belangeri chinensis,tree shrew）,攀鼩目（Scandentia）树鼩科（Tupaiidae）,是一种外形酷似松鼠的哺乳动物,其解剖学与生物学特性较其他除灵长类外的实验动物更接近人类被称之为灵长类的近亲,且因繁殖快和体型小而易控制,管理方便和成本低廉易于饲养管理而被广泛应用于医学生物学研究,特别是人类疾病动物模型的建立。

眼镜王蛇毒单克隆抗体的制备

目的:应用眼镜王蛇毒基因疫苗,免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体(mAb)。方法:应用眼镜王蛇Oh-3基因真核表达质粒pIRES-Oh3,佐以脂质体制成基因疫苗,免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与同源Sp2/0骨髓瘤细胞进行融合,经间接ELISA筛选,有限稀释法克隆,制备mAb。结果:获得了2株分泌抗眼镜王蛇毒mAb的杂交瘤细胞株(F5、F11),细胞培养上清液的抗体效价分别为3.2×10-1、6.4×10-1,腹水抗体效价分别为1.28×10-4、2.56×10-4。结论:成功地制备了2株眼镜王蛇毒mAb。

猕猴结肠镜检查前的肠道准备

猕猴是非常重要且珍贵的实验动物。不处死猕猴为前提,以反复多次对猕猴进行全结肠肠道检查及研究为目的,建立猕猴全结肠内镜检查前的肠道准备方法尤为重要。本研究补充此方法目前尚无报道的空白。30只猕猴,结肠镜检查前3 h分多次予以芒硝溶液管喂。通过肠镜观察肠道清洁情况,其中3只猕猴肠道准备为Ⅲ级,其余猕猴肠道准备均为Ⅰ~Ⅱ级。所有猕猴在洗肠过程中,无严重脱水、休克、死亡等并发症发生,肠道准备为Ⅰ~Ⅱ级猕猴顺利完成全结肠内镜检查。

猕猴菌痢的防治措施

细菌性痢疾是猕猴养殖过程中最为常见的急性传染性病之一,具有较短的潜伏期,危害性较大,稍有不慎可以导致猕猴死亡。本文从猕猴菌痢基本情况入手,接着介绍了猕猴菌痢发病临床现象,接着提出猕猴菌痢治疗措施,以及一些常用的预防措施。

探析猕猴脱毛症的成因与防治

猕猴在我国科学研究方面有着重要的作用,猕猴的脱毛现象的产生,对于猕猴的身体健康和科研效果有着一定程度的影响。所以,对于患病的猕猴,应予以高度的重视,对其进行及时检查和治疗。本文以维生素C和生物素为主要的试验元素,通过对比试验分析导致猕猴脱毛症产生的原因,并提出防治措施。

全人工哺育恒河猴幼仔的新方法

婴恒河猴是国家珍稀野生动物，随着自然环境遭到破坏和非法捕猎，猕猴在自然界中的数量已经骤减。昆明动物研究所经过30多年的人工驯养实践，恒河猴的人工驯养技术已比较成熟，以前刚出生母猴因不照顾新生婴猴，致使全人工饲养成活率较低，经过多年来对全人工哺育婴猴方法的不断改进、探索，最近3年通过使用婴儿培养箱哺育新生婴猴，取得有效进展，新生婴猴的成活率明显提高。

剖腹产术对猕猴繁殖性能的影响

为了探讨圈养环境下驯化饲养的猕猴进行剖腹产后对其繁殖性能的影响,笔者严格依照人医剖腹产标准操作规程进行手术操作。2年后此猕猴再次受孕生产,说明剖腹产对猕猴的繁殖性能没有影响。