一种改良的对虾白斑综合征病毒的提纯技术

对虾白斑综合征病毒(White spot syndrome virus,WSSV)是对虾养殖业的主要病原,自1992年以来一直严重影响对虾的产量和质量,造成巨大的经济损失.

对虾白斑综合征病毒ORF220基因在昆虫细胞内的表达及其分布

对虾白斑综合征病毒厦门分离株 ORF220 编码真核生物 GP130 受体同源蛋白。将 ORF220 和绿色荧光蛋白编码基因融合在一起克隆到昆虫杆状病毒表达载体 pFastBacI,然后与 AcBacmid 共同转染 DH10B 细胞。用 PCR鉴定含有 ORF220 和 EGFP 基因的重组质粒,提取纯化重组质粒并转染昆虫细胞进行表达。结果发现,DNA 转染后 3-5d 可以在荧光显微镜下观察到绿色荧光,表明融合蛋白在昆虫系统内成功表达。用病毒上清液感染昆虫细胞进行时相观察,结果表明,ORF220 蛋白在昆虫细胞的细胞质和细胞核内呈随机分布,没有特异的细胞定位。

含外源类蜗牛毒素基因的AcMNPV的虫体感染性研究

类蜗牛毒素基因(conotoxinlike,ctl)是在一些杆状病毒基因组中存在的与蜗牛毒素类似的一类基因,其功能尚不清楚。本文利用苜蓿银纹夜蛾核多角病毒(AcMNPV)bacmid表达系统构建了含油桐尺蠖核多角体病毒(BusuNPV)ctl基因的重组病毒AcBac-ph-ctl。在细胞水平上对ctl基因的RT-PCR分析表明,该基因转录出mRNA。在甜菜夜蛾体内进行了生物活性测定,结果表明AcBac-ph-ctl与对照野生型AcMNPV的LC50,ST50无显著性差异,表明在此系统中,外源的CTL无杀虫增效性能。