一种用昆虫病毒研发高效安全的新型生物农药正在全面推广--中国科学院广谱高效昆虫杆状病毒杀虫剂的研制和应用

传统观点认为,一种昆虫病毒只能防控一种害虫,广谱甘蓝夜蛾核型多角体病毒(Mb MNPV)杀虫剂的开发改变了这一传统观念。该体病毒杀虫剂可防治32种以上鳞翅目害虫,尤其对我国重要抗性农业害虫小菜蛾、地老虎、甜菜夜蛾、棉铃虫、烟青虫、甘蓝夜蛾、粘虫等有很好的防控效果。中国科学院武汉病毒研究所研制出一种广谱昆虫杆状病毒生物杀虫剂,并已建成全球最大的千吨级昆虫病毒杀虫剂生产线,年产制剂超过600吨。在全国21个省(市、区)大面积推广应用,控制抗性小菜蛾、棉铃虫、甜菜夜蛾等重要农业害虫,年应用面积超过600万亩,已成为目前国内外年产量和年应用面积最大的昆虫病毒生物杀虫剂。

藻类病毒研究40年

综述了藻类病毒研究40年来的重要发现。前期研究着重于病毒的分离和生物学特性,20世纪80年代后一度研究陷于停顿,90年代发现蓝藻病毒在海洋中的重大生态意义后,近年来又掀起藻类病毒研究的热潮.我国在藻类病毒方面的探索研究还只是刚刚起步,由于水体的丰富多样,以及"水华"和"赤潮"的严重爆发,我国研究藻类病毒的前景十分广阔.

从武汉印染厂废水淤泥中分离出的趋磁细菌的生长与磁小体形成过程

对从武汉印染厂污泥中分离出的趋磁细菌YN-1,分别进行了5 d,10 d,20 d,25 d和30 d的纯培养与透射电镜的观察,并对30 d释放出的磁小体进行了能谱分析.结果表明:培养5 d的趋磁细菌,其体内的细胞质相对均匀,可见到铁质在细胞内输送的痕迹.随后细胞质变为不均匀,菌体内泡状物和磁小体增多;20 d后菌体膜出现自溶,可见磁小体从破裂的菌膜排出体外的现象,25 d后可见到具有鞭毛、细胞质分布均匀的“营养体”.培养30 d,菌膜基本自溶,除见有营养体外,残存大量的细胞膜碎片和磁小体,对它们的能谱分析显示,磁小体的主要无机成分为Fe.由此判断,25 d可能为该菌在培养条件下的趋磁细菌生长与磁小体形成周期.

文山松毛虫质型多角体病毒形态结构及理化性质的研究

对文山松毛虫质型多角体病毒的形态结构及理化特性进行了研究,多角体大部分为六边形,少数为四边形及近园形,其大小在0.47～2.45μ之间,平均为1.1μ。病毒粒子呈球形,无囊膜,致密的核芯区由一层外壳包裹,直径为60nm。病毒粒子表面有12个刺突,放大图象可见其亚单位排列。多角体蛋白的主要成分为一种,分子量为26200道尔顿,多角体蛋白氨基酸组成中不含半胱氨酸;其碱性氨基酸与酸性氨基酸之比为1:2.16。病毒粒子结构蛋白含五条多肽组分。用SDS-热酚法提取所得核酸,其热变性紫外吸收OD260值增加51.6％。抗核酸酶S1。Tm值为86℃。在1％琼脂糖凝胶电泳中可分为9个片段,而在5％PAGE中,则可分为10个片段。各片段大小在0.66×106～2.85×106道尔顿之间,总分子量为15.35×106。电镜分析研究显示了CPV RNA在0.4μ、0.8μ和1.2μ处有三个分布峰。

水体病毒钙离子絮凝浓缩新方法研究

研究建立了一种从水体中浓缩病毒的新方法,即钙离子絮凝-柠檬酸缓冲液洗溶法,该方法的要点是先用一定量的钙离子溶液和钙离子絮凝剂絮凝水体中的病毒,再用pH5.0的0.3mol/L的柠檬酸缓冲液洗溶,然后再进一步超滤浓缩。此法可方便地将水体中的病毒浓缩10000倍以上。应用该法分别对人工播种于饮用水中的f2噬菌体和脊髓灰质炎疫苗病毒(PV1)进行了浓缩,结果发现f2噬菌体的平均回收率达96%,而PV1的回收率为100%,均显著高于阳电膜过滤法(P<0.05)。该方法快速、简便、有效。

甜菜夜蛾增殖马尾松毛虫质型多角体病毒研究

以甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)作为替代宿主增殖马尾松毛虫质型多角体病毒(DpCPV)的研究结果表明,DpCPV在甜菜夜蛾体内连续传代3次后得到的DpCPV-Se3与DpCPV具有相同的电泳图谱;多角体和病毒粒子在电镜下观察,未发现形态上的明显变化.生测结果表明,DpCPV-Se3与DpCPV回接松毛虫试验,其半数致死浓度分别为0.92×103 PIB/mL和1.44×103PIB/mL,二者毒力差异不显著.以甜菜夜蛾增殖DpCPV,多角体产量达到2.34×108PIB/头.用DpCPV-Se3和DpCPV的S7和S10片段分别进行同源性序列分析,结果没有明显变化.认为利用甜菜夜蛾增殖DpCPV用于生物防治具有可行性.

草鱼出血病病毒对其它鱼的感染性研究

用草鱼出血病病鱼分离出的草鱼出血病病毒(Grass carp hemorrhage virus,GCHV)感染其它常见鱼并用ELISA方法检查感染鱼组织提取液,结果表明:青鱼、鲢鱼、布氏鳌条对GCHV抗体呈阳性反应;鲤鱼、鳙鱼、鲫鱼、团头鲂、泥鳅则呈阴性反应。综合感染鱼发病症状及死亡特征,初步认为:青鱼对GCHV是易感的,GCHV能在鲢鱼、布氏蟹条体内增值,但毒力较低,鳙鱼、鲫鱼、团头鲂、鲤鱼、泥鳅能抗GCHV感染。

两种病毒侵染中国对虾后细胞超微病理学变化与免疫标记

应用电子显微技术研究人工感染的中国对虾病毒病原及其宿主细胞超微病理学变化。结果显示病虾体内存在球状与杆状两种病毒病原，有时在同一病虾组织的同一细胞中可见两种病毒同时侵染现象，该现象提示存在复合感染的可能。利用胶体金免疫标记技术对感染病虾细胞质中出现的球状病毒作定位标记，初步结果表明已分离提纯的球状病毒与感染病虾细胞质中观察到的病毒粒子性质基本相同。病毒侵染后，细胞内主要的细胞器如线粒体、内质网、核糖体均发生了显著变化；侵染后期，可见溶酶体及多种膜性结构大量增生、细胞核被一些微管样结构包裹等特殊变化的发生。

兔出血症病毒体外复制的研究

在几种动物细胞上,采用同步感染的方法研究了兔出血症病毒(RHDV)的复制特性。病毒感染细胞后(PI)48—72小时可观察到明显的细胞病变,血凝效价可增高5—10倍。病毒对细胞传代代数不同,敏感性也不同。在兔婴肾(RK)和兔婴肺(RL)细胞上以4—8代最为敏感。采用免疫荧光染色法,经病毒感染48—72小时的细胞中可观察到特异性荧光。细胞增殖的病毒经PEG-DS浓缩,Sepharose 4B柱层析提纯后,在电镜下可观察到完整的病毒粒子,将此病毒回接健康实验兔可致100％死亡。免疫双扩散和免疫电泳试验表明,细胞增殖的病毒抗原与来自病兔肝的RHDV抗血清之间产生明显的沉淀带。SDS-PAGE分析病毒获得四条多肽,其分子量大小与病兔肝组织提取的病毒蛋白多肽分子量相比略有差异。

兔病毒性出血症疫苗毒株的保存及免疫效力研究

采用1985年本实验室分离鉴定的一株RHDV（武汉分离株），制备RHDV灭活疫苗和RHDV-抗血清治疗剂，推广应用12年均获得较好的防治效果。长期保存，反复活化的RHDV肝组织血凝效价在1：640-1：2560;疫苗保护率约99％;RHDV-抗血清治愈率80％。结果显示该株RHDV的免疫原性稳定，同时亦表明近12年在武汉周边地区RHDV的抗原性变异不大。此研究可为RHDV流行病学研究和防治提供具有应用价值的试验依据。

四株草鱼呼肠孤病毒毒株的细胞感染特性比较研究

本文首次对低温保存的三株草鱼呼肠孤病毒GCRV873 、GCRV875、GCRV876与新分离的GCRV991毒株进行了细胞培养与病毒感染特性等比较研究。结果表明 ,GCRV873 、GCRV875、GCRV876在 - 30℃保存 10年后仍然具有一定的感染性 ,其滴度均在 10 2 TCID50 /mL以上 ,略低于从病鱼组织分离的GCRV991毒株的滴价。经传代培养后 ,四株GCRV的毒力逐渐升高 ,并趋于稳定 ;当感染复数 (MOI)为 0 .0 5PFU/cell时 ,测定四株GCRV的滴度均高于 10 8TCID50 /mL ,但略有差异。GCRV873 的滴度最高 ,可达到 6 .4× 10 11TCID50 /mL。连续传代的GCRV毒株在不同温度 (2 8℃、31℃、34℃、37℃、41℃ )条件下 ,均可感染CIK细胞 ;在 2 8℃时 ,感染效价最高 ,随着温度的升高 。

重组杆状病毒杀虫剂的研究进展

本文从基因缺失、基因插入、改变宿主范围 3个方面系统的介绍了杆状病毒杀虫剂的研究进展。

裂解气相色谱法和聚类分析在病毒识别中的应用研究

应用裂解气相色谱法和系统聚类分析对56株不同地方分离株昆虫病毒（其中NPV29株，CPV11株，GV16株）进行了识别分析．利用欧氏距离系数的8种系统聚类算法所得聚类树状图谱，结果表明，通过裂解指纹图特征峰的分析，可明显地区分NPV、CPV、GV彼此间的差异和相同亚群的不同分离株间的异同．用聚类分析进一步证明裂解气相色谱法对昆虫病毒识别的可行性，从而为病毒的分类鉴定提供了准确、快速、重复性好的一种现代分析方法。

草鱼呼肠孤病毒在CIK细胞中复制及形态发生的研究

以草鱼呼肠孤病毒 (GCRV)感染的草鱼肾细胞系 (CIK)为模型 ,进行了草鱼呼肠孤病毒在细胞内的形态发生的研究。当病毒以感染复数为 5～ 10PFU/CELL感染CIK细胞时 ,在病毒感染细胞 4h以内的切片中 ,可观察到脱去部分外层衣壳的不完整病毒颗粒。感染细胞 8h ,可观察到浆胞内病毒发生基质 ,其内含有大量的直径约 5 0nm的亚病毒颗粒 ,无外层蛋白结构。感染 12～ 16h后 ,这些亚病毒颗粒装配上外层蛋白结构 ,形成直径为 72nm左右的成熟的病毒粒子。病毒感染细胞 8h后 ,开始出现典型的病毒包含体 ,16～ 2 0h小时病毒包含体裂解 ,继而释放出有感染性的子代病毒颗粒。

狂犬病毒灭活前后形态结构的研究

狂犬病是严重危害人畜的一种传染病,公元前3000年,前摩西法典Tierkel就谈到犬咬伤人引起人死亡.公元前500年德漠克利特和公元前322年阿里多德认识到狂犬病是犬和其它动物的一种传染病.Johnson引证了1271年西欧发生狼狂犬病、以及1803—1925年在同一地区狐中发生7次动物间的大流行.1919年Semple指出了用化学药物灭活狂犬病毒而不破坏其抗原性,此后灭活病毒苗广泛应用于人体,至今已70多年.但是,灭活前后狂犬病毒的形态结构,是否能如其抗原性一样不受影响,至今国内外尚未见有报道.作者研究了狂犬病毒用化学药物灭活前后的形态,结构的变化,现报道如下.

鳜鱼病毒病原及细胞感染特性的研究

在患暴发流行性发病鳜鱼的脾、肾、肝、鳃组织细胞的超薄切片中观察到直径为 12 0 150nm的二十面体病毒粒子 ,其截面呈六角形 ,有囊膜。将病鱼内脏与 10倍体积的PBS缓冲液制成组织匀浆液 ,过滤除菌后感染对数生长期的草鱼肾细胞。结果表明 ,该感染液在 2 8℃条件下 ,培养 36 4 8h ,生长旺盛的草鱼肾细胞开始出现CPE ,5 7d感染的单层细胞逐渐脱落死亡。该细胞病毒悬液具有感染性 ,可持续稳定地进行传代培养。感染细胞的病毒培养液 ,经差异离心纯化 ,负染制片 ,电镜下观察到大量的病毒粒子 ,对照培养物中未发现任何病毒颗粒。

中国棉铃虫单粒包埋核型多角体病毒多角体蛋白基因的序列分析

以AcMNPV的多角体蛋白基因为探针，定位了中国棉铃虫单粒包理核型多角体病毒（HaSNPV）的多用体蛋白基因。序列测定表明，HaSNPV的多角体蛋白基因编码区为738个核苷酸，编码246个氨基酸，预计蛋白质分子量为29kDa。同源性分析表明，HaSNPV与美洲棉铃虫单粒包理核型多角体病毒（HzSNPV）具有最高的同源性，在整个阅读框架中只有4个碱基的差异，其中第179位碱基的变化导致唯一的氨基酸变化，这种变化并未导致其二级结构的改变。此外，两种病毒该基因的启动子结构也完全一样。HaSNPV与其它的SNPV和MNPV的同源性明显要低。结果预示HaSNPV与HzSNPV可能为同种病毒的不同变种。