L6大鼠成肌细胞胰岛素信号传导通路中磷脂酰肌醇3激酶、蛋白激酶B和葡萄糖转运蛋白4的表达

背景:血管紧张素Ⅱ可损伤胰岛素信号中的下游信号分子引起胰岛素抵抗,但其机制不清。目的:观察血管紧张素Ⅱ对L6大鼠成肌细胞胰岛素信号传导通路中磷脂酰肌醇3激酶、蛋白激酶B和葡萄糖转运蛋白4的影响。方法:L6细胞培养及诱导分化肌管,根据干预措施不同实验分为对照组、胰岛素组、胰岛素+血管紧张素Ⅱ组及胰岛素+血管紧张素Ⅱ+H89组。采用RT-PCR检测4组磷脂酰肌醇3激酶、蛋白激酶B mRNA表达,免疫荧光检测胰岛素受体底物1、酪氨酸磷酸化胰岛素受体底物1、葡萄糖转运蛋白4表达。结果与结论:胰岛素组、胰岛素+血管紧张素Ⅱ组及胰岛素+血管紧张素Ⅱ+H89组的磷脂酰肌醇3激酶mRNA表达均较对照组显著升高(P<0.05)。各组间蛋白激酶B mRNA表达差异无显著性意义(P>0.05)。相比对照组,其余3组间胰岛素受体底物1、酪氨酸磷酸化胰岛素受体底物1和葡萄糖转运蛋白4(膜蛋白)表达均升高(P<0.05);胰岛素+血管紧张素Ⅱ+H89组酪氨酸磷酸化胰岛素受体底物1和葡萄糖转运蛋白4表达低于胰岛素组但高于胰岛素+血管紧张素Ⅱ组(P<0.05)。结果显示,血管紧张素Ⅱ在骨骼肌细胞中通过JAK2-PKA通路引起胰岛素下游信号传导受阻,葡萄糖转运蛋白4表达减少,葡萄糖转运障碍,进而导致胰岛素抵抗。

血管紧张素Ⅱ对L6大鼠成肌细胞胰岛素作用机制的研究

目的研究血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对L6大鼠成肌细胞的胰岛素信号传导的影响，探讨AngⅡ影响胰岛素信号传导通路的可能机制。方法培养及诱导分化IJ6细胞，根据AngⅡ或JAK2-PKA抑制剂H89干预的不同，将其分为4组：对照组、胰岛素组、胰岛素＋AngⅡ组及胰岛素＋AngⅡ＋H89组。采用RT-PCR方法检测IRS1、GLUT4mRNA的表达水平，Westernblot方法检测IRS1、ptyr_IRS1、总蛋白和膜蛋白中GLUT4的蛋白表达。结果RT—PCR检测4组间GLUT4mRNA表达差异无统计学意义（P〉0．05），后3组间IRSImRNA表达差异无统计学意义（P〉0．05），但均较对照组增加（P〈0．05）。Westernblot检测后3组IRS1、ptyr_IRS1、膜蛋白中GLUT4表达均较对照组升高（P〈0．05），而3组间IRSl表达差异无统计学意义（P〉0．05），4组间GLUT4表达差异无统计学意义（P〉0．05），胰岛素＋Angll＋H89组ptyr_IRSI、GLUT4较胰岛素＋AngⅡ组表达增加（P〈0．05），较胰岛素组表达减少（P〈0．05）。结论AngⅡ在骨骼肌细胞中通过JAK2-PKA通路抑制IRS1的酪氨酸磷酸化，抑制GLUT4由胞浆转移至胞膜，进而导皲哺岛素括精．

氯沙坦通过增加葡萄糖转运蛋白4膜转位改善2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗

目的研究2型糖尿病（T2DM）sD大鼠血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂（ARB）是否改善胰岛素抵抗及对IRSl磷酸化、P13K途径中Akt磷酸化及GLUT4转位的影响。方法42只sD大鼠分别给予高脂高糖饮食／链脲佐菌素（STZ）或普通饮食喂养，当空腹血糖（FPG）〉／7．8mmol／L且伴有胰岛素抵抗者为成模T2DM大鼠20只，正常组20只；分为正常不干预组（A组）、正常干预组（B组）、T2DM不干预组（C组）及T2DM干预组（D组），每组10只。B组及D组给予氯沙坦（4mg·k～·d“），干预6周后计算胰岛素敏感指数（ISI），取腓肠肌备用。通过免疫组织化学（IHC）及Westernbloting检测IRSl／P＇yr_IRSl、Akt／Pser473-Akt及GLUT4蛋白表达。结果（1）成功制备了T2DM大鼠模型。IHC结果示C、D组较A、B组P”-IRSl、P-Akt蛋白表达减少；Westernbloting结果示Ptyr。-IRSl、GLUT4膜蛋白表达减少（P〈0．05）。（2）氯沙坦干预后，D组FBG（mmol／L）、FINS（p^U／M1）（18．8±4．1，27±5）较c组（19．74-3．7，27±6）降低，IsI升高（D组一6．18±0．08，C组一6．18±0．08，P〈0．05）；IHC示Ptyr-IRSl蛋白表达升高（P〈0．05）；Westernbloting示GLUT4膜蛋白、P-IRSl上升（P〈0．05），P-Akt蛋白的表达无差异（P〉0．05）。结论氯沙坦通过增加骨骼肌组织中GLUT4的转位而改善T2DM大鼠的胰岛素抵抗。