纳豆激酶的研究与应用

纳豆激酶是一种枯草芽孢杆菌产生的丝氨酸蛋白酶 ,具有强烈的纤溶活性 ,有望开发成为新型口服溶栓药。综述了纳豆激酶的生化特性、生物学活性、结构与功能及开发应用前景等。

碘解磷定对胆碱酯酶复活和抑制作用的研究

目的 研究碘解磷定对胆碱酯酶复活和抑制双向作用。方法 Hestrin法测定胆碱酯酶活性 ,离体实验和在体实验研究碘解磷定对未被和已被DDVP抑制的胆碱酯酶的作用和量效关系。结果 离体实验 1 0mmol·L-1以上浓度的碘解磷定对小鼠胆碱酯酶有抑制作用 ,且呈量效关系 ;对被敌敌畏抑制的小鼠胆碱酯酶有双向作用 ,该作用与碘解磷定的量和胆碱酯酶被抑制程度有关 ,胆碱酯酶抑制较重时 ,碘解磷定能使之复活 ,抑制较轻时则加重其抑制。在体实验仅当PAM剂量高达 30 0mg·kg-1(相当于 1 34LD50 )时才对小鼠血胆碱酯酶轻度抑制。对敌敌畏中毒小鼠 ,10～15 0mg·kg-1的DDVP中毒抑制的胆碱酯酶有复活作用且呈量效关系。结论 非致死量的碘解磷定对在体胆碱酯酶无抑制作用。

一种具有纤溶活性的蛋白酶的分离纯化及性质

目的分离纯化BacillussubtilisJin2 1发酵产生的具有纤溶活性的蛋白酶 ,并对其性质进行研究。方法通过硫酸铵分级盐析 ,SerineSepharose 2B和SephacrylS— 2 0 0色谱柱进行分离纯化 ,用SDS PAGE测定纯度 ,SDS PAGE和凝胶层析测定相对分子质量 ,纤维蛋白平板法测定酶活力。结果分离得到了电泳纯的酶 ,该酶的相对分子质量为 2 8kD ,等电点约为 8 6 ,最适 pH为 7 5 ,最适温度为 4 0℃ ,在 4 0℃以下较稳定 ,超过 5 0℃时酶活力开始下降 ;金属离子Mn2 + 对酶有明显的激活作用 ,而Zn2 + 对酶有抑制作用 ,二异丙基磷酰氟 (DFP)和苯甲基磺酰氟 (PMSF)完全抑制酶活性。结论该酶是一种丝氨酸蛋白酶 ,与纳豆激酶相似 。

亚甲蓝对结肠癌细胞系Lovo的杀伤和抑制作用

为探讨亚甲蓝对体外培养的人大肠癌细胞的抗肿瘤作用 ,采用直接杀伤实验、细胞生长抑制实验和细胞集落形成能力实验方法研究了亚甲蓝对体外培养的人大肠癌细胞系Lovo的作用 ,同时用透射电镜技术观察了该药对癌细胞的损伤部位 .结果显示 13 2 5 μmol/L亚甲蓝作用2 4h可杀死 79 4%的大肠癌细胞 ,5 3μmol/L亚甲蓝作用 2 4h可杀死全部大肠癌细胞 ,0 2 7μmol/L亚甲蓝即可明显抑制人结肠癌细胞的增殖 .透射电镜观察显示亚甲蓝损伤细胞的部位在线粒体 .研究结果表明 ,亚甲蓝对体外培养的人大肠癌细胞Lovo具有显著的杀伤和抑制作用 。

β-葡萄糖醛酸苷酶的表达与大肠癌病理学特性的关系

目的 :研究 β-葡萄糖醛酸苷酶与人大肠癌分化、侵袭和转移间的关系。 方法 :链酶卵白素 -过氧化物酶免疫组化法检测 β -葡萄糖醛酸苷酶在大肠癌组织中的表达。结果 :β -葡萄糖醛酸苷酶的增强表达与大肠癌Dukes分期的进展相关 (P <0 .0 5 ) ,随着侵袭深度的加深 ,癌组织中 β -葡萄糖醛酸苷酶的表达增强 (P <0 .0 5 )。该酶在低分化大肠癌中的表达强于高分化大肠癌 ,但无统计学意义。结论 :β -葡萄糖醛酸苷酶的表达与大肠癌的侵袭力成正相关 ,其免疫组化染色可能成为诊断大肠癌侵袭力的有用指标。

重组铜绿假单胞菌外毒素PE38KDEL的克隆、表达与活性检测

目的对铜绿假单胞菌外毒素A的编码序列进行改造,以获得相对分子质量小、活性强的重组毒素PE38KDEL。方法基于铜绿假单胞菌外毒素A的编码序列的高GC含量,通过PCR反应和酶切技术,构建重组毒素PE38KDEL基因,并于大肠杆菌表达,用Westernblot分析表达产物。为检测其生物活性,将其与靶向分子IL4突变体cpIL4(13D)融合,构建融合蛋白表达载体,并于大肠杆菌表达,表达产物经亲和色谱和阴离子交换色谱纯化后,用MTT法检测其对表达IL4受体的黑色素瘤细胞LiBr的细胞毒性。结果成功构建了PE38KDEL基因,并在大肠杆菌BL21(DE3)中得到了高效表达,表达量占细胞全蛋白的21%左右;构建了融合蛋白cpIL4(13D)PE38KDEL,并于大肠杆菌AD494(DE3)中得到高效表达,纯化后融合蛋白的纯度达95%以上,细胞毒实验证明其对黑色素瘤细胞LiBr具有良好的杀伤作用,这说明改造后的PE38KDEL是具有细胞毒效应的。结论重组毒素PE38KDEL的构建,为各种导向药物的构建奠定了基础。

增殖细胞核抗原在大肠癌中的表达意义

目的研究大肠癌组织中ＰＣＮＡ的表达意义．方法大肠癌组织６３例，其中结肠癌２３例，直肠癌４０例；男３３例，女３０例；年龄２６岁～７６岁．用抗人ＰＣＮＡ单克隆抗体和ＳＰ免疫组化技术半定量测定了ＰＣＮＡ在大肠癌组织中的表达，并分析了其与肿瘤分化、侵袭和淋巴结转移间的关系．结果高分化组ＰＣＮＡ阳性Ⅰ～Ⅳ级例数分别为１２，２，３，３，中分化组为８，７，４，２，低分化组为５，３，６，８．经Ｒａｄｉｔ统计学分析及显著性检验，低分化大肠癌中ＰＣＮＡ的表达显著高于高、中分化大肠癌（Ｐ＜００５，Ｐ＜００５）；其表达与肿瘤的侵袭和淋巴结转移无关（Ｐ＞００５，Ｐ＞００５）．结论ＰＣＮＡ的表达可反映大肠癌细胞的增殖活性，是大肠癌增殖生物学行为的有用指标．