更年健上调老年雌性大鼠下丘脑雌激素受体mRNA表达对P物质和β-内啡肽的影响

目的：探讨中药复方更年健上调老年雌性大鼠下丘脑雌激素受体（ ＥＲ）和 ＥＲ信使核糖核酸（ｍＲＮＡ）对Ｐ物质（ＳＰ）和β－内啡肽（β－ＥＰ）的影响。方法：建立自然衰老的雌性大鼠模型，用放射配体结合分析法检测 ＥＲ，用 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ分析 ＥＲｍＲＮＡ的改变，用放射免疫分析法检测 ＳＰ和β－ＥＰ含量。结果：老年雌性大鼠性减退期下丘脑 ＥＲ和 ＥＲｍＲＮＡ水平随血清Ｅ_２水平的下降较性成熟期显著下降，而更年健则使下降了的ＥＲ和ＥＲｍＲＮＡ水平明显提高，并通过上调下丘脑ＥＲｍＲＮＡ使ＳＰ明显下降，而β－ＥＰ则显著提高，与提高体内雌激素水平具有同样的效果。结论：更年健可增加ＲＲ在下丘脑的表达以增强雌激素的生物学效应，同时降低下丘脑 ＳＰ水平而提高 β－ＥＰ的含量。

反义寡核苷酸抑制肿瘤细胞表达VEGF的研究

研究用反义寡核苷酸（ＯＤＮ）抑制肿瘤细胞ＶＥＧＦ的表达，探讨发展新的抗肿瘤药物的可能性。方法Ｓ１８０细胞培养上清液有促进牛脐血管内皮细胞生长的作用。用ＶＥＧＦ的反义ＯＤＮｓ分别加入Ｓ１８０细胞培养液，检查各上清液刺激内皮细胞生长的受抑情况，即可了解ＯＤＮｓ抑制肿瘤细胞表达ＶＥＧＦ的情况。结果证明ＶＥＧＦ反义ＯＤＮｓ确有抑制ＶＥＧＦ表达的作用。结论反义ＶＥＧＦ的ＯＤＮｓ有望成为新一代的抗肿瘤药物。

“更年健”对老年雌性大鼠中缝背核5-羟色胺的影响

应用免疫组织化学和计算机图像分析技术,观察中药“更年健”对老龄雌性大鼠中缝背核5-HT的影响.结果表明:“更年健”和苯甲酸雌二醇用药后,中缝背核5-羟色胺含量明显增高,与用药前相比.相差显著(P<0.01).提示“更年健”能增强老年雌性大鼠中缝背核5-HT神经元活性.

RNA干扰介导的胶质瘤细胞IGF-1R基因下调诱导肿瘤细胞凋亡

目的应用RNA干扰(RNAi)技术介导胶质瘤C6细胞株胰岛素生长因子1受体(IGF1R)基因下调诱导C6细胞凋亡的研究。方法体外化学合成靶向IGF1R基因的小干扰RNA(siRNA),脂质体法将siRNA以不同浓度梯度转染C6细胞,设非特异的siRNA阳性对照组和未转染siRNA的阴性对照组:同时使用绿色荧光素标记的小干扰RNA(FITCsiRNA)转染细胞,荧光显微镜下观察siRNA转染效率;RT-PCR法半定量检测siRNA对IGF1R基因表达的抑制作用;流式细胞术检测siRNA诱导细胞凋亡作用。结果荧光显微镜下荧光素标记的siRNA转染组可见细胞质内清晰的绿色荧光,脂质体OligofectamineTM2000的转染效率接近100%;化学合成的siRNA明显抑制IGF1RmRNA的表达,各特异性siRNA不同浓度转染组IGF1RmRNA表达水平可下调约10%～80%,流式细胞术检测细胞凋亡率转染组为22.47%±3.15%,与阳性对照组2.3%±0.9%和阴性对照组1.14%±0.79%比较有明显提高,而阳性、阴性对照组相比无明显差异。结论化学合成的靶向IGF1R的siRNA可以明显下调IGF1R基因的表达,胶质瘤细胞凋亡率明显上升,为进一步进行胶质瘤的基因治疗研究奠定基础。

参附汤上调HL60细胞热休克蛋白和糖皮质激素受体mRNA表达及其对细胞存活的影响

目的 :探讨中药方剂参附汤对HL6 0细胞热休克反应时热休克蛋白信使核糖核酸 (heatshockproteinmRNA ,HSPmRNA)和糖皮质激素受体信使核糖核酸 (glucocorticoidreceptormRNA ,GRmRNA)表达及对细胞存活率的影响。方法 :建立细胞热休克模型 ,用动物血清学方法制备参附汤 (SFT)血清 ,用Northernblot分析HSPmRNA和GRmRNA的改变 ,用台盼蓝拒染法观察细胞存活率。结果 :HL6 0细胞热休克反应时GRmRNA明显减少 ,细胞存活率下降 ,HSPmRNA则增加 ;该细胞经SFT处理后在热休克反应时 ,GRmRNA表达增加 ,细胞存活率提高 ,HSPmRNA进一步增加。结论 :SFT可上调HL6 0细胞热休克反应时HSPmRNA和GRmRNA表达 ,提高糖皮质激素的生物学效应和抗细胞损伤能力 ,从而提高HL6 0细胞在热休克时的存活率 ,这可能是临床上SFT用于治疗失血性休克的机制之一。

抗HBV C区G_(11)饱和突变的发夹状核酶的体外制备

研究针对 HBV C区的 G1 1 位饱和突变的发夹状核酶的体外制备 ,通过计算机设计针对 HBV C区的发夹状核酶 ,合成 G1 1 位饱和突变的发夹状核酶基因片段 ,并把其克隆入自剪切核酶载体 p1.5的 3′- cis- Rz或 5′- cis- Rz之间。3 2 P标记 4种发夹状核酶的体外转录物 ,变性聚丙烯酰胺纯化回收获得 4种核酶。

雌二醇对老年雌性大鼠下丘脑雌激素受体表达和β-内啡肽的影响

探讨小剂量雌激素对老年雌性大鼠下丘脑雌激素受体（ER）表达及β-内啡肽肚（β-EP）的影响。建立自然衰老的18月龄雌性大鼠模型，用放射配体结合法检测ER，用Northernblot分析ERmRNA的改变，用放射免疫分析法检测β-EP含量。结果表明：雌激素对ER和ERmRNA呈显著的负向调节作用，ER表达被抑制；β-EP水平明显提高。雌激素的这些作用与其剂量之间并非简单的线性关系。提示：外源性雌激素对体内的神经内分泌平衡有多种影响，在进行雌激素替代治疗时应尽可能选择小剂量。

更年健对老年雌性大鼠下丘脑、垂体和卵巢雌激素受体mRNA的影响

目的:观察中药复方更年健对老年雌性大鼠下丘脑、垂体和卵巢雌激受体(ER)和 ER mRNA 的影响。方法:建立自然衰老的雌性大鼠模型,用放射配体结合分析法检测 ER,用 Norther blot 分析 ER mRNA 的改变。结果:雌性大鼠性减退期下丘脑,垂体和卵巢ER 和 ER mRNA 水平随血清雌二醇(E_2)水平的下降较性成熟期显著下降,而更年健则使下降了的 ER 和 ER mRNA 水平明显提高。结论:本结果提示更年健在临床上治疗更年期综合征的机理可能是在不改变 E_2水平的情况下,提高下丘脑、垂体和卵巢 ER 和 ER mRNA 水平,从而增强雌激素的生物学效应,改善临床症状和体征。

应用DIG标记探针杂交检测IBDV

本试验用地高辛（Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ，ＤＩＧ）标记的探针建立了核酸杂交检测传染性法氏囊病病毒（ＩＢ－ＤＶ）的方法，并在敏感性方面同琼脂扩散试验进行了比较。探针来源于ＩＢＤＶＳＴＣ－ｌｌ９和ＳＴＣ－２４３ｃＤＮＡ。杂交方法的敏感性试验表明，核酸杂交可以检测到０．１ｐｇ的ＩＢＤＶＲＮＡ；与多个毒株核酸的杂交则显示出标记的探针可以作为通用试剂用于ＩＢＤＶ早期感染的诊断；而同琼脂扩散试验的比较则说明，杂交方法比常规的免疫沉淀反应敏感１０４倍以上。除此之外，由于杂交方法特异以及非放射性探针操作方便，因而具有很大的应用前景。

阴阳平补中药对雄激素致不孕大鼠肝细胞膜胰岛素受体的影响

目的 :观察阴阳平补中药治疗前后雄激素致高胰岛素高雄激素不孕大鼠肝细胞膜胰岛素受体的变化。方法 :建立雄激素致高胰岛素高雄激素不孕大鼠模型 ,采用阴道涂片的方法观察阴阳平补中药对不孕大鼠的促排卵作用 ;采用放射配体结合分析方法检测肝细胞膜胰岛素受体的数目与亲和力。结果 :阴阳平补中药对雄激素致高胰岛素高雄激素不孕大鼠的促排卵率为 43 1 % ,而服药与未服药的不孕大鼠 ,其肝细胞膜胰岛素受体的数目及亲和力均与正常大鼠相似。结论 :阴阳平补中药对雄激素致高胰岛素高雄激素不孕大鼠的促排卵作用不是通过影响胰岛素受体的结合而实现。

MiR-181c对人脑胶质瘤细胞增殖及凋亡的作用

目的观察miR-181c对人脑胶质瘤细胞增殖及凋亡的影响,进一步探讨miR-181c的生物学功能。方法化学合成miR-181c,脂质体转染U251细胞。应用cck-8法和流式细胞术检测细胞的增殖和凋亡。结果miR-181c上调后对U251细胞具有抑制作用,且呈明显的剂量依赖性,而对照组无明显抑制作用。结论化学合成的miR-181c在人脑胶质瘤细胞增殖和凋亡过程中发挥重要作用,可能成为胶质瘤基因治疗的新靶点。