新基因ANGPTL4的克隆及其在血管新生中的功能研究

目的 克隆新基因ANGPTL4 ,并探讨其功能。方法 采用以细胞生长为基础的功能筛选方法筛选人胎盘cDNA文库 ,结合RACE PCR方法克隆到一个人全长新基因ANGPTL4 ,用RH PCR方法对其进行染色体定位 ;用原核表达系统对重组ANGPTL4进行蛋白表达 ;用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)试验、原代猪主动脉内皮细胞 (PAEC)体外迁移试验、PAEC体外浸润试验、PAEC体外管状试验及小鼠体内栓子形成试验探讨了新基因ANGPTL4对体内外血管新生过程的影响。结果 获取的人全长基因ANGPTL4定位于染色体 19p13 3,其原核表达产物对PAEC的体外增殖没有明显作用 (P =0 0 5 04 ) ,但ANGPTL4的 2 μg/ml剂量组对PAEC的体外迁移和浸润均有明显的促进作用 (P <0 0 5 ) ,对其管状结构形成也有程度不同的促进作用 ;对小鼠体内血管新生有较明显的促进作用。

肝癌相关基因pp1158的表达及功能研究

目的 对pp115 8基因的蛋白表达和体内外功能进行研究。方法 用pET 32a融合表达载体在大肠杆菌BL2 1(DE3)对该基因进行表达 ,制备兔源性多克隆抗体 ;用体外细胞集落形成试验、裸鼠体内成瘤实验、免疫组化及蛋白印迹 ,检测该基因对肿瘤细胞生长的影响及表达差异 ;用Northernblot检测pp115 8在组织中的表达差异。结果 pp115 8对BEL 74 0 2肝癌细胞系的体外集落形成有明显抑制作用 ,抑制率为 5 8.3% (P <0 .0 1) ;对BEL 74 0 2细胞的成瘤有明显抑制作用 (P <0 .0 5 )。蛋白印迹结果显示 ,转染pCMV Script pp115 8的BEL 74 0 2细胞表达pp115 8蛋白。免疫组化结果显示 ,pp115 8基因在人组织中的表达为 :正常肝组织≥癌旁肝组织 >肝癌组织。Northernblot结果显示 ,pp115 8在人胎盘组织中高表达 ,在心、肝、骨骼肌、胰腺、肺等脏器中度表达 ,而在脑和肾组织中表达很低。结论 pp115 8为肝细胞性肝癌的候选抑瘤基因。