一种用昆虫病毒研发高效安全的新型生物农药正在全面推广--中国科学院广谱高效昆虫杆状病毒杀虫剂的研制和应用

传统观点认为,一种昆虫病毒只能防控一种害虫,广谱甘蓝夜蛾核型多角体病毒(Mb MNPV)杀虫剂的开发改变了这一传统观念。该体病毒杀虫剂可防治32种以上鳞翅目害虫,尤其对我国重要抗性农业害虫小菜蛾、地老虎、甜菜夜蛾、棉铃虫、烟青虫、甘蓝夜蛾、粘虫等有很好的防控效果。中国科学院武汉病毒研究所研制出一种广谱昆虫杆状病毒生物杀虫剂,并已建成全球最大的千吨级昆虫病毒杀虫剂生产线,年产制剂超过600吨。在全国21个省(市、区)大面积推广应用,控制抗性小菜蛾、棉铃虫、甜菜夜蛾等重要农业害虫,年应用面积超过600万亩,已成为目前国内外年产量和年应用面积最大的昆虫病毒生物杀虫剂。

一种吡唑并吡啶酮类衍生物对新型冠状病毒SARS-CoV-2的抑制作用研究

目的探究3-(4-氯苯基)-1,4-二苯基-1,4,5,7-四氢-6H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮(以下简称为J1)体外抑制新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的作用及潜在作用机制。方法采用MTT法评价化合物J1对Vero-E6、ACE2/293T和HRT18细胞的毒性。利用感染性SARS-CoV-2和人冠状病毒OC43(HCoV-OC43)检测化合物J1的抗冠状病毒活性。采用SARS-CoV-2假病毒体外细胞感染模型和时间点加药实验检测J1抑制SARS-CoV-2病毒感染靶细胞的作用阶段。通过S蛋白介导的细胞融合抑制实验检测J1是否通过阻止病毒膜融合而抑制SARS-CoV-2的进入。采用SPR实验和分子对接技术阐明J1与SARS-CoV-2 S蛋白的作用。结果J1对Vero-E6、ACE2/293T和HRT18细胞的毒性较小,半数细胞毒性浓度CC50均大于100μmol·L^(-1)。J1能显著抑制SARS-CoV-2原始株和Delta变异株的活性,半数有效浓度EC50分别为607μmol·L^(-1)和221μmol·L^(-1)。此外,J1可抑制HCoV-OC43病毒的感染,显著减少NP蛋白和mRNA的表达。分子对接结果显示,J1通过氢键作用和疏水作用力与SARS-CoV-2 S蛋白活性位点稳定结合。机制研究结果表明,J1可抑制SARS-CoV-2病毒进入靶细胞,半数抑制浓度IC50为157μmol·L^(-1)。J1浓度依赖性抑制SARS-CoV-2 S蛋白介导的细胞-细胞膜融合,SPR实验证实J1与S蛋白具有较强结合能力。结论吡唑并吡啶酮类衍生物J1通过靶向S蛋白抑制SARS-CoV-2进入靶细胞。

人干扰素α1b体外抗呼吸道病毒的药效学研究

目的:评价人干扰素(interferon,IFN)α1b体外广谱抗呼吸道病毒的药效。方法:采用CPE(细胞病变)法检测IFNα1b和阳性对照药对MDCK、U937、LLC-MK2、Hep-2、Vero E6、BHK-21、RD、A549细胞的毒性;采用神经氨酸酶活性检测法检测IFNα1b对流感病毒株CIV-H1N1/CNIC-1909(H1N1)、A/kansas/14/2017(NYMCX-327)(H3N2)和B/Maryland/15/2016(NYMCBX-69A)的抑制效果;采用ELISA试剂盒检测法检测IFNα1b对A型流感病毒株(H1N1,A/PuertoRico/8/1934)及引起的炎症因子的抑制效果;采用间接免疫荧光检测法(IFA)检测IFNα1b对呼吸道合胞病毒(RSV A2)的抑制效果以及对人副流感病毒(HPIV3)的抑制效果;采用CPE法检测IFNα1b对登革2型(DENV-2)病毒的抑制效果、检测IFNα1b对EV71病毒的抑制效果、检测IFNα1b对人类腺病毒3型病毒株(AdV3)和人类腺病毒5型病毒株(AdV5)的抑制效果。采用空斑法检测IFNα1b对人类1型单纯疱疹病毒(HSV-1)的抑制效果。结果:IFNα1b对MDCK细胞的CC 50值为479572 U·mL^(-1),抑制H1N1的EC 50为4265 U·mL^(-1),选择指数(SI)为112.44,抑制H3N2的EC 50为101950 U·mL^(-1),SI为4.70,抑制B型流感病毒的EC 50为18240 U·mL^(-1),SI为18.50;IFNα1b对U937细胞的CC 50值为大于100000 U·mL^(-1),抑制H1N1病毒的EC 50为37897 U·mL^(-1),SI为大于2.64,抑制炎症因子IP-10的EC 50为大于100000 U·mL^(-1),抑制炎症因子IL-8的EC 50为大于100000 U·mL^(-1);IFNα1b和对LLC-MK2细胞的CC 50值为大于10000 U·mL^(-1),抑制HPIV3病毒的EC 50为3.92 U·mL^(-1);IFNα1b对Hep 2细胞的CC 50值为大于100000 U·mL^(-1),抑制RSV病毒的EC 50为1661 U·mL^(-1),SI为大于60.2;IFNα1b对Vero E6细胞的CC 50值为大于500 U·mL^(-1);IFNα1b对BHK-21细胞的CC 50值为大于100 U·mL^(-1),抑制DENV-2病毒的EC 50为0.90 U·mL^(-1),SI为大于111.11;IFNα1b对RD细胞的CC 50值为大于100000 U·mL^(-1),抑制EV71病毒的EC 50为大于100000 U·mL^(-1);IFNα1b对A549细胞的CC 50值为大于100000 U·mL^(-1),抑制AdV3病毒的EC 50为100000 U·mL^(-1),抑制AdV5病毒的EC 50为100000 U·mL^(-1);IFNα1b对Vero细胞的CC 50值为大于100000 U·mL^(-1),抑制HSV-1病毒的EC 50为6898 U·mL^(-1),SI为大于14.5。结论:在体外细胞水平上,IFNα1b对A型流感病毒H1N1和H3N2、B型流感病毒、RSV病毒、DENV-2病毒、HPIV3病毒、HSV-1病毒均具有抑制作用,对EV71病毒、AdV3病毒和AdV5病毒无抑制作用,IFNα1b有望成为预防和治疗上呼吸道病毒感染的临床药物。

中国对虾一种球状病毒的分离提纯及其核酸蛋白特性的研究

从感染致病的中国对虾（Ｐｅｎａｅｕｓｃｈｉｎｅｓｉｓ）中分离到一种球状病毒，其育径约为２０±４ｎｍ。进行人工感染实验，对虾死亡率为６６％；用脱氧核糖核酸酶（ＤＮａｓｅ），核糖核酸酶（ＲＮａｓｅ）及二苯胺染色法对病毒核酸进行处理，证明该病毒核酸为脱氧核糖核酸，用Ｓｌ核酸酶（Ｓｌｎｕｃｌｅａｓｃ）对该核酸进一步消化处理，进一步证实该病毒含单链ＤＮＡ。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果显示，该病毒含４条结构多肽，其分子量分别为８６ｋＤ，７９ｋＤ，７０ｋＤ及２５．５ｋＤ。根据上述特性分析，该病毒可能属于细小病毒科（ｐａｒ－ｖｏｖｉｒｉｄａｅ），故暂定名为中国对虾细小病毒（ＰｅｎａｅｕｓｃｈｉｎｅｓｉｓＰａｒｖｏｖｉｒｕｓ简称ＰｃＰＶ）。

浅析科学事业单位基本建设经费管理——以中央财政科教基础设施项目为例

研究从中央财政科教基础设施项目视角展开,在深入了解科学事业单位基本建设经费管理重要性的基础上,明确科学事业单位基本建设项目经费管理的目标。结合对科学事业单位基本建设经费管理现状的了解,分析其存在的问题,并就如何提高经费管理的科学性提出针对性建议,为充分发挥已有经费优势、促进科学事业单位基本建设工作顺利推进提供借鉴。

中国棉铃虫单粒包埋核多角体病毒(HaSNPV)HindⅢ-Ⅰ片段的序列分析与基因排列研究

对中国棉铃虫单粒包埋核多角体病毒 (HaSNPV)基因组中的HindⅢ Ⅰ片段的序列进行分析 ,该片段全长75 0 1nt,包括 10个开放阅读框 :AcMNPVORF111的同源基因 (Ac111) ,晚期表达因子 2 (lef 2 )基因 ,病毒核壳结构蛋白 p2 4基因、gp16 基因、多角体包膜蛋白 (polyhedronenvelopeprotein ,pep)基因、AcMNPVORF6 3的同源基因(Ac6 3) ,38 7kD基因 ,晚期表达因子 1(lef 1) 基因 ,及两个特有基因HaSNPV orf5 91和HaSNPV orf435。基因组的排列比较分析发现与AcMNPV有较大区别。

人鼻粘膜类器官冠状病毒感染模型可用于抗病毒药物的筛选和评价

目的利用人鼻粘膜类器官建立冠状病毒(CoV)感染模型,并用于药物抗病毒作用体外评价,探讨人类鼻粘膜类器官病毒感染模型用于病毒研究和抗病毒药物开发的可行性。方法使用人源鼻粘膜类器官,测试其对SARS-CoV-2和HCoV-OC43假病毒的易感性。在P3实验室中,评估鼻粘膜类器官对SARS-CoV-2原始株及4种变异株的感染情况,优化感染条件。通过荧光定量PCR检测不同时间点培养基中病毒含量,并利用免疫荧光法定位新冠病毒衣壳蛋白,以确定病毒感染细胞的类型。在优化后的鼻粘膜病毒感染模型中,分析已知具有抑制新冠病毒作用的化合物,如卡莫司他和佛手柑素,单因素方差分析推断其在类器官中的抑制效果并预测其机制。结果通过培养体系和感染条件的优化,使用SARS-CoV-2不同亚型感染鼻粘膜类器官,结果显示,2~24 h受感染鼻粘膜类器官上清液中的病毒载量明显增加,鼻粘膜类器官可被SARS-CoV-2,HCoV-OC43假病毒感染(P<0.001)。真病毒感染实验证实,SARS-CoV-2原始株及4种变异株,均能稳定感染鼻粘膜类器官,证实病毒感染模型的建立。卡莫司他和佛手柑素,在鼻粘膜类器官中均剂量依赖性抗病毒作用(P<0.0001)。结论人鼻粘膜类器官能够作为新冠病毒感染模型,用于抗病毒药物筛选和评价,特别是经鼻腔给药方式的提供了理想的体外研究模型。

五株鼠痘病毒的分离及生物学特性分析

目的:通过对5例疑似感染鼠痘病毒的实验小鼠脑组织进行病毒分离培养、分子生物学鉴定和形态学研究,进一步深入探索鼠痘病毒的生长特性与形态学特征。方法:从感染的鼠脑组织中分离鼠痘病毒,针对鼠痘病毒基因设计特异性引物,建立一种实时荧光定量PCR检测方法,对病毒进行检测鉴定;利用非洲绿猴胚胎肾细胞(Marc145细胞),通过电镜切片观察和生长曲线测定,考察病毒的形态特征和感染特征。结果:成功分离得到5株鼠痘病毒,病毒感染Marc145细胞后发生相应病变效应,在感染后0~72 h病毒滴度逐渐升高并在72 h达到最高值,随后滴度逐渐降低,但在感染96 h仍然保持较高病毒滴度;5株鼠痘病毒毒株在整体的生长特性与形态学方面具有相似性。结论:研究结果为深入探究鼠痘病毒的生命周期、感染机制、病毒结构和宿主免疫反应等病毒学基础提供了基础。

冷等离子体处理玉米醇溶蛋白-原花青素复合纳米颗粒的制备、表征与性能研究

采用不同载气的冷等离子体处理玉米醇溶蛋白(zein)后包封原花青素(PC),制备复合纳米颗粒,并对其进行表征和性能研究。结果表明,经冷等离子体处理后的玉米醇溶蛋白纳米颗粒的粒径和多分散系数PDI无显著变化,而Zeta电位的绝对值显著降低;以O_(2)+Ar为载气的冷等离子体处理的复合纳米颗粒PZOA的包封率达到90.59%,显著高于以NH_(3)为载气的冷等离子体处理的复合纳米颗粒PZN(62.66%);圆二色谱分析表明,包封PC后的复合纳米颗粒的二级结构发生了变化,表明PC的加入影响了玉米醇溶蛋白的结构特征;包封PC后的复合纳米颗粒的抗氧化活性显著提高,自由基清除率由未包封的54.43%~56.03%上升至88.41%~90.29%。

草鱼出血病病毒武汉南湖株的精细结构与基因组及多肽的研究

对草鱼出血病病毒(Grass carp hemorrhage virus,GCHV)武汉南湖株的精细结构的研究表明,该病毒具廿面体对称结构,由双层衣壳组成,直径为72nm。外层衣壳上的子粒为中空型,分为五邻体和六邻体。五邻体直径11nm,中心孔径6nm。六邻体直径12.6nm,中心孔径7.5nm。内层衣壳直径50nm,其上附着有长7.5nm、内径6.4nm、外径10.7nm的圆柱形钉状物.病毒基因组为dsRNA分段基因组,由11个片段组成,分为4组,分子量分别是:2.75×10~?d、2.40×10~?d、2.34×10~?d、1.35×10~?d、1.32×10~?d、1.26×10~?d、0.93×10~?d、0.81×10~?d、0.71×10~?d、0.58×10~?d、0.56×10~?d。病毒多肽组份有11个。分别是VP130(VP表示病毒多肽。130为分子量,即130×10~3d,下同)、VP120、VP113、VP107、VP75、VP65、VP60、VP52、VP42,VP39和VP31,其中VP130、VP120、VP60、VP39和VP31为多肽的主要组份。病毒的内层衣壳具有6个多肽组份,分别是VP130、VP120、VP113、VP107、VP75、和VP39,主要组份是VP130、VP120和VP39.外层衣壳所特有的多肽是VP65、VP60、VP52、VP42和VP31.我们认为草鱼出血病病毒武汉南湖株是呼肠孤病毒科的一员。

罗氏沼虾苗种肌肉白浊病诺达病毒的分离和特性研究

本实验在以往罗氏沼虾(Macrobrachiumrosenbergii)苗种肌肉白浊病病毒致病性的基础上对病毒特性进行深入研究。病虾除菌过滤液以1:50和1:250浸泡感染可复制出典型的症状,病毒对氯仿抵抗;用PEG法浓缩病毒后,35000r/min超速离心部分纯化病毒,在电镜下可观察到大量直径24nm的球形病毒颗粒,无囊膜,此外还观察到大小为14nm的病毒粒子;采用Trizol试剂对病毒进行了核酸提取,电泳结果发现有4条核酸条带,分别为3.0kb、1.3kb、0.8kb、0.75kb,对RNA核酸酶、S1核酸酶敏感,对DNA酶抵抗,为单链RNA病毒。用罗氏沼虾诺达病毒核酸探针进行分子杂交,探针可与提纯核酸及病虾样品匀浆液反应,Southern杂交表明3.0kb、1.3kb条带分别属于诺达病毒的RNA1和RNA2。对不同的发病样品进行了核酸电泳,4个典型症状的样品均存在诺达病毒条带,2个样品还存在小病毒核酸。上述结果表明,诺达病毒是引起罗氏沼虾苗种肌肉白浊病的主要病原。14nm小病毒与罗氏沼虾肌肉白浊病中的关系有待进一步的研究。

藻类病毒研究40年

综述了藻类病毒研究40年来的重要发现。前期研究着重于病毒的分离和生物学特性,20世纪80年代后一度研究陷于停顿,90年代发现蓝藻病毒在海洋中的重大生态意义后,近年来又掀起藻类病毒研究的热潮.我国在藻类病毒方面的探索研究还只是刚刚起步,由于水体的丰富多样,以及"水华"和"赤潮"的严重爆发,我国研究藻类病毒的前景十分广阔.

中国对虾病虾体内同工酶表型变化的初步研究

应用对流免疫电泳及核酸探针检测技术筛选感染病毒的中国对虾（Ｐｅｎａｅｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）病虾，采用不连续的聚丙烯酰胺凝胶电泳研究病虾体内同工酶的表型变化。用分光光度仪对电泳带扫描分析表明，病虾体内４种同工酶—酯酶（ＥＳＴ）、苹果酸脱氢酶（ＭＤＨ）、谷草转氨酶（ＧＯＴ）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）的表型与健康虾比较存在显著差异。其中，ＭＤＨ、ＥＳＴ、ＧＯＴ的变化分别反映病虾体内糖类、脂类、氨基酸等３大物质代谢明显紊乱，ＳＯＤ活性下降，显示病虾免疫防御机能明显衰退。对虾体内同工酶表型变化规律稳定，重复性好。

昆虫质多角体病毒研究的若干新进展

质多角体病毒隶属呼肠孤病毒科质多角体病毒属 ,病毒粒子为二十面体球形颗粒 ,具有 3～ 5种结构蛋白 ,基因组由10或 11个节段双链RNA构成。按病毒基因组RNA片段在聚丙烯酰胺或琼脂糖凝胶中电泳图谱的差异 ,将质多角体病毒分为 15个电泳型。随着RNA病毒序列测定策略的逐步成熟与完善 ,质多角体病毒的序列测定方面取得一定的进展 ,家蚕质多角体病毒 1的两个毒株 (H株和I株 ) ,舞毒蛾质多角体病毒 1和 14 ,及粉纹夜蛾质多角体病毒 15的基因组全序列得到了测定 ,但质多角体病毒的进化与起源的研究因缺乏足够的遗传信息仍受到限制。

水体中诺瓦克病毒RT-PCR检测研究

诺瓦克病毒是公认的食源性或水源性非细菌性胃肠炎的主要致病因子之一。建立诺瓦克病毒的RT-PCR检测方法,验证其特异性及灵敏度,并在实验室人工污染水样,进行模拟水样的检测,验证RT-PCR检测方法的实用性。所用引物为RNA多聚酶区的JV12/JV13,多次反复实验,均可产生327bp预期大小的特异条带,并通过杂交进一步证实了其特异性和正确性;在临床粪样中,可达到的最高检测限为50pg/mL。在共42份模拟样品的检测中,经过播毒、富集和浓缩,38份均可检出诺瓦克病毒。其中4份池塘水未检出。在模拟水样中的检测灵敏度为200pg/mL。实验中所建立的试验条件和体系可用于实际水样中诺瓦克病毒的筛选,对水质控制起到了很好的监控作用。

中国对虾非包涵体杆状病毒在体内的感染与发生

在感染发病成虾的肝胰腺和中肠上皮细胞的胞核内，出现大量病毒发生基质，核衣壳，套膜和完全的病毒粒子。病毒粒子为短杆状，两端呈钝园形，平均大小约为２５０－３００×ｌ１０ｎｍ，在核内无包涵体形成。在胞质内发现伴随病毒拉子并具有双层膜的蛋白质结构，这种结构建议称为该病毒的“封入体”。同时，我们认为这种无包涵体的杆状病毒，有可能应归属于杆状病毒科的第三个亚组。

原位杂交研究对虾白斑杆状病毒在虾体内感染过程

应用地高辛标记的对虾白斑杆状病毒 (whitespotsyndromebaculovirus,WSSV)核酸探针 ,与人工感染后不同时间采集的对虾组织样品进行原位杂交 ,以动态研究病毒从侵染至对虾发病死亡的过程。将典型感染WSSV的病虾组织投喂健康对虾 ,结果显示 :WSSV首先通过侵染消化道上皮进入虾体内增殖 ,此后随着细胞裂解、病毒粒子释放 ,游离的病毒粒子伴随血淋巴循环进而侵染其它靶组织 ,直至对虾发病死亡。

中国棉铃虫核型多角体病毒几丁质酶基因的定位与克隆

以α３２ＰｄＡＴＰ标记含ＣｆＭＮＰＶ几丁质酶基因的重组质粒为探针，在６８℃条件下对棉铃虫单粒包埋核型多角体病毒（ＨａＳＮＰＶ）进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交，将ＨａＳＮＰＶ的几丁质酶基因分别定位在ＢａｍＨＩＥ、ＢｇｌⅡＥ、ＥｃｏＲＩＧ、ＨｉｎｄⅢＦ、ＸｂａＩＨ、ＢａｍＨＩ＋ＨｉｎｄＩＩＭ和ＢａｍＨＩ＋ＸｂａＩＨ，并以ｐＴＺ１９Ｒ为载体获得了ＸｂａＩＨ片段克隆。

鸡减蛋综合症（EDS_（76））病毒的研究Ⅱ．GC^2株蛋白性质的研究

ＧＣ２株提纯后经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析得到１３条多肽，分子量范围从１１２０００～１８０００道尔顿，ＧＣ２株抗原与标准株比较为同一抗原性．

产蛋减少综合症病毒的研究Ⅰ．GC_2株的提纯及形态观察

本文通过差速离心，连续蔗糖梯度离心分离纯化了ＥＤＳ_（７６）病毒ＧＣ_２株，提纯的病毒经电镜观察测定该病毒直径范围为６０～７５ｎｍ，平均直径为７１ｎｍ，病毒为二十面体球形对称结构。