小鼠釉丛蛋白基因不同mRNA剪接体的克隆

目的 :克隆小鼠釉丛蛋白基因不同mRNA剪接体 ,分析小鼠釉丛蛋白的多态性。方法 :采用异硫酸氰胍一步法从新生小鼠磨牙牙胚组织中提取总RNA ,反转录成cDNA第一链 ,经PCR扩增出小鼠釉丛蛋白基因特异片段 ,插入pBS质粒 ,筛选阳性克隆 ,并经酶切和核苷酸序列分析鉴定阳性克隆。结果 :克隆T1序列与已发表的完整釉丛蛋白mRNA序列一致。克隆T2序列与完整釉丛蛋白mRNA序列比较 ,缺失序列的 84～15 8的 75个碱基片段。结论 :小鼠釉丛蛋白基因在转录mRNA时 ,可产生不同的剪接体。

小鼠成釉蛋白基因cDNA全序列的克隆

目的 筛选与小鼠牙胚发育相关的特异基因。方法 利用随机引物、反转录酶合成特异和非特异探针 ,采用差异显示方法筛选小鼠牙胚cDNA文库 ,挑选阳性克隆并测序。结果 得到 6个阳性克隆 ,经测序证实其中 1个克隆序列与大鼠成釉蛋白序列高度同源 :其中用pTriplEX 3′引物测得的 5 2 6个碱基序列与大鼠成釉蛋白基因 5′端的 32 5 80序列有 4 97个碱基一致 ,5′引物测得的 5 6 7个碱基序列与大鼠成釉蛋白基因 3′端的 12 85 185 4序列有 5 33个碱基一致。结论 筛选到小鼠釉基质特异蛋白———成釉蛋白基因的cDNA全序列。