论藏药“佐太(汞制剂)”的工艺发展历程及研究现状

佐太(汞制剂)是藏药类的珍宝,享誉“众药王”之称,具有治疗疾病、解毒、养生补养、增效等作用,以“佐太”为核心成分的珍宝类藏药复方在临床使用广泛。本文通过搜集与整理藏医药经典著作及近年来的研究文献,梳理了“佐太”炮制方法的发展历程及其现代应用研究进展。佐太炮制,主要有三个代表性的方法,分别为宇妥·元丹贡布(708-833年)所著《四部医典》中的水银炮制法、顿慢逊努嘉措(13世纪)所著《水银炮制经典》中的水银炮制法,以及新中国成立以来大力传授佐太炮制工艺的措如·才朗(1926-2004年)大师的水银炮制法。此外,研究人员从现代药物理化、药代动力学和毒理学等方面对“佐太”开展了大量研究。本文综述了藏医药经典古籍中佐太历代的炮制方法及现代药理毒理研究,为深入理解“佐太”的来龙去脉提供重要的参考价值。

藏药五脉绿绒蒿提取过程的在线近红外光谱质量控制研究

利用近红外光谱技术和自建的在线检测系统,实现了藏药五脉绿绒蒿提取过程中总黄酮含量的在线近红外光谱监测和提取终点的判定。以403个样品为建模集,分别获得了主成分回归(PCR)、偏最小二乘(PLS)、决策树(DT)、随机森林(RF)算法下的最佳光谱预处理方法和建模区间,以残差预测偏差(RPD)值为指标选择最佳建模方法。以62个样品为外部验证集,考察模型应用于总黄酮含量实时监测的可行性。此外,还探讨了利用模型预测值进行相对浓度变化率(RCCR)分析直接判定提取终点的可行性,并比较了标准偏差绝对距离法(ADSD)和移动窗口标准偏差法(MBSD)对提取终点判定的适用性。结果表明,在预处理方法为Constant+一阶导数+SG平滑、建模区间5300~9000 cm^(-1)条件下所建的总黄酮含量的PLS模型效果最好,其校正集和验证集的误差均方根均小于0.14、相关系数均大于0.97,RPD值为4.68。所建PLS模型对未知样品的平均预测率为79%,实际值与预测值的相关系数大于0.98,表明模型有较好的预测效果。外部验证集中RCCR法判定的预测提取终点和ADSD法判定的提取终点均与实际提取终点一致。所建模型性能较好,通过对未知样品进行准确快速的定量分析,实现了五脉绿绒蒿提取过程中总黄酮含量的实时监测,同时,以RCCR和ADSD作为提取终点的判定方法较为准确,可为藏药材提取过程在线近红外光谱分析技术的研究提供有益借鉴。

藏药麻花秦艽化学成分研究

目的：研究麻花秦艽的化学成分。方法：利用微孔树脂柱、硅胶柱、Sephadex LH-20凝胶柱和制备色谱等手段进行分离纯化,通过NMR、MS等波谱手段进行结构鉴定。结果：从麻花秦艽根中分离得到12个化合物,分别鉴定为：胡萝卜苷（1）、β-谷甾醇（2）、熊果酸（3）、獐牙菜苷（4）、獐牙菜苦苷（5）、龙胆苦苷（6）、6＇-O-乙酰基-龙胆苦苷（7）、6＇-O-β-D-吡喃葡萄糖基-獐牙菜苷（8）、原儿茶醛（9）、原儿茶酸（10）、没食子酸甲酯（11）、邻苯二甲酸二丁酯（12）。结论：其中,化合物8~12为首次从麻花秦艽中分离得到。

百日咳毒素联合卡介苗诱导CD-1小鼠抑郁症模型研究

为了构建具备良好的治疗性干预时间窗的新型抑郁症动物模型,本研究基于抑郁症发病的炎症假说,选用血脑屏障通透剂——百日咳毒素,联合低剂量免疫激活剂——卡介苗(牛结核分枝杆菌)对CD-1小鼠造模。实验发现,与单独低剂量卡介苗诱导相比,百日咳毒素联合低剂量卡介苗诱导可以增强小鼠的抑郁样行为,如行为绝望状态增加(悬尾实验中一动不动时间)、探索性行为降低(开场实验中的区域穿梭次数和抬头直立次数)、自发运动状态降低(开场实验总运动距离)等,促进小鼠中枢神经炎症和外周炎症(IL-1β、IL-6、IFN-γ等);同时,加剧脑中色氨酸-犬尿氨酸通路的激活,表现为其关键酶——吲哚胺2,3-双加氧酶1(IDO1)进一步显著升高。经口给予抗抑郁药丙咪嗪,可缓解百日咳毒素联合低剂量卡介苗诱导的小鼠抑郁样症状、炎症反应和激活的色氨酸-犬尿氨酸通路。另外,发现百日咳毒素联合低剂量卡介苗诱导的小鼠抑郁样症状可以从第7天至少持续到第28天。综上,本研究基于百日咳毒素和低剂量卡介苗构建的小鼠抑郁模型具有较好的表面效度、结构效度和预测效度,其长期持续性的抑郁表型可为抗抑郁疗法研究提供宝贵的治疗性干预时间窗。

经典藏药佐太对15种人源肿瘤细胞系的体外增殖抑制研究

为了探索经典藏药佐太对人源肿瘤细胞系的体外抑制作用,文章选用11种临床常见癌症(肝癌、乳腺癌、胃癌、肠癌、卵巢癌、宫颈癌、肺癌、胶质母细胞瘤、肾癌、皮肤癌、白血病)15种人源肿瘤细胞系,在体外测定培养基稀释后的佐太5种前处理液(DMSO悬液、未过膜人工胃液浸提液、过膜人工胃液浸提液、未过膜人工肠液浸提液和过膜人工肠液浸提液)对肿瘤细胞的增殖抑制率,计算半数抑制浓度(IC_(50))。实验发现培养基稀释的佐太DMSO悬液对肝癌细胞(BEL-7402和SMMC-7721)、乳腺癌细胞(MDA-MB-231和MCF-7)、胃癌细胞(MKN-45和SGC-7901)、结肠癌细胞HCT 116、卵巢癌细胞(HO-8910和SK-OV-3)、宫颈癌细胞Hela、肺癌细胞A549、脑星型胶质母细胞瘤U-87 MG、肾透明细胞腺癌细胞786-O、表皮癌细胞A-431和人原髓细胞白血病细胞HL-60的半数抑制浓度(IC_(50))范围为0.094~0.453 mg/mL,小于有效阈值0.5 mg/mL,即有效;其他4种佐太的浸提液尽管对某些肿瘤细胞增殖显示显著性抑制,但是未达到有效阈值。由此初步揭示了佐太5种前处理液对15种人源肿瘤细胞系抑制的差异,其中佐太DMSO悬液具有抗肿瘤潜能,为探索佐太体内抗癌活性提供了重要的体外实验数据支撑。

黑果枸杞果实中抗炎活性成分的筛选及作用机制研究

目的:对黑果枸杞果实中的抗炎活性成分进行筛选和评价,同时对其作用机制进行研究。方法:利用甲醇对黑果枸杞果实进行提取,并分别在微孔树脂(MCI)和大孔树脂柱上进一步分离。利用脂多糖诱导小鼠单核巨噬细胞RAW 264.7构建炎症模型,对获得的组分进行筛选和评价。采用MTT法检测细胞活力、比色法检测NO水平、ELISA法检测IL-6、IL-1β、TNF-α等炎症因子水平,Western blot检测COX-2、IκBα等蛋白及其磷酸化的表达水平。结果:初步筛选发现经MCI处理后的3个组分中,Fr1表现出较好的抑制NO生成的能力。对Fr1进一步分离获得Fr1-1和Fr1-2组分。Fr1-2在抑制NO生成、炎症因子水平等方面均优于Fr1。对其作用机制进一步研究发现Fr1-2能抑制COX-2、p-IκBα蛋白表达水平从而发挥抗炎作用。对Fr1-2活性部位中的主要成分进一步分离制备,发现其主要成分为5-羟甲基糠醛,5-羟甲基糠醛在所选浓度范围内对细胞活力无显著影响,且其可以抑制炎症模型NO生成,具有一定的抗炎作用。结论:黑果枸杞果实提取物具有一定的抗炎作用,其机制可能与抑制COX-2蛋白的表达、IκBα蛋白的磷酸化水平,从而降低炎症因子的表达有关,其作用的物质基础可能与5-羟甲基糠醛有关。

芫花素等黄酮类化合物对阿尔兹海默症的保护作用及其机制研究

阿尔兹海默症是一种与年龄相关的退行性疾病,以Aβ沉积形成斑块、Tau蛋白过度磷酸化形成神经纤维缠结为主要病理表现。黄酮类化合物是一种自然界广泛存在的次级代谢产物,具有神经保护作用。该研究以冈田酸(OA)诱导人神经母细胞瘤SH-SY5Y建立Tau蛋白过度磷酸化的AD体外细胞模型,基于该细胞模型对青藏高原特色植物中的黄酮类化合物进行体外抗AD活性的研究。利用Western blot检测Ser^(396)位点的磷酸化水平,评价黄酮类化合物对该模型的保护作用。并利用上述AD模型研究筛选得到的黄酮类化合物对线粒体功能(活性氧和膜电势)以及相关蛋白表达水平的影响。研究结果表明,筛选得到的有效化合物芫花素(T8)可通过降低Tau蛋白过度磷酸化、改善线粒体功能障碍和降低细胞内ROS等方面起到神经保护作用,对进一步开发预防或治疗AD药物研究提供实验依据。

31味中药和藏药水提物α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶抑制活性研究

以阿卡波糖为阳性对照,对31种中药和藏药材水提取物进行了α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶(酵母菌)、蔗糖酶和麦芽糖酶抑制活性筛选。研究发现,地骨皮和桑白皮水提物与市售药物伏格列波糖和米格列醇的酶抑制类型相同,对麦芽糖酶和蔗糖酶均具有较强抑制作用。南五味子和大花红景天与阿卡波糖的酶抑制类型相同,对淀粉酶和蔗糖酶具有较强的抑制作用。首次发现了白檀水提物对α-淀粉酶、蔗糖酶和麦芽糖酶均具有很强的抑制活性,绿萝花、当归、细叶小檗、南五味子、大花红景天、细果角茴香、诃子、白檀和唐古特白刺9种药材提取物具有很强的蔗糖酶抑制活性。本研究为上述几种中药和藏药材资源的进一步深入研究和开发利用提供了数据支持和科学依据。

青藏高原高寒灌丛生态系统草本层生物量分配格局

青藏高原高寒灌丛生态系统生物量分配的研究相对较少,尤其是其草本层。为了探究高寒灌丛生态系统草本层生物量分配特征及其影响因素,分析了青藏高原东北部灌丛生态系统的49个高寒灌丛样地的草本层地上与地下生物量特征及其气候因子之间的关系。结果表明1)草本层地上生物量与地下生物量分别为121.1,342.8 g/m2均大于高寒草地的地上生物量与地下生物量。2)草本层的根冠比为3.6低于高寒草地的根冠比。3)地上生物量与地下生物量之间呈现幂函数的关系y=8.0x0.83(R2=0.48,P<0.001)。4)根冠比与年均温度、年均降雨量之间没有显著的相关关系。

柴达木枸杞类胡萝卜素提取工艺优化及抗氧化活性研究

以柴达木枸杞子为材料,采用超声波辅助溶剂提取方法,在单因素实验的基础上,应用Box-Behnken Design对料液比、提取溶剂配比、提取时间进行优化,并通过DPPH自由基清除实验研究类胡萝卜素的抗氧化活性,同时测定不同产地、不同采摘期柴达木枸杞类胡萝卜素含量。通过响应面分析优化后,得出超声波辅助提取柴达木枸杞中类胡萝卜素的最佳工艺条件为:提取溶剂为石油醚∶无水乙醇(v/v=2.6∶1),料液比为1∶60(g/m L),提取时间41 min,提取次数1次,在此条件下,类胡萝卜素的含量可达321.52 mg/100 g。柴达木枸杞中类胡萝卜素DPPH自由基清除率IC50为34.09μg/m L,柴达木枸杞类胡萝卜素具有较好的抗氧化活性并且不同产地、不同采摘期柴达木枸杞类胡萝卜素含量均存在显著差异(p<0.05)。

黄绿蜜环菌菌种分离及人工培养研究

采用组织分离法从黄绿蜜环菌子实体的菌盖与菌柄结合处分离菌种,经多次纯化,获得纯化的黄绿蜜环菌菌株。以分离的黄绿蜜环菌母种为材料,通过单因素实验和正交实验,以菌落直径及菌丝体干重为指标,研究不同碳源、氮源、无机盐、维生素对菌丝体生长的影响。结果表明:黄绿蜜环菌菌丝最优化培养条件为马铃薯浸出液20%、黄豆芽浸提液10%、KH2PO40.3‰、VB1+VB21 mg/L(等比例),在此培养条件下,黄绿蜜环菌菌丝体干重可达6.5 mg/m L。

黄绿蜜环菌深层发酵工艺研究

以人工驯化的黄绿蜜环菌菌种为材料,在优化的培养基组成及培养温度下进行培养。通过单因素实验,考察不同的摇瓶装量、搅拌速度、发酵时间和接种量对黄绿蜜环菌菌丝体产量的影响,在此基础上通过正交设计确定最优深层发酵工艺参数,并通过小试和中试对其进行验证,黄绿蜜环菌最优化发酵工艺参数:摇瓶装量为150 m L/500 m L、搅拌速度为125 r/min、发酵时间为10 d、接种量为15%,此工艺可应用于工业化生产。

亚临界流体1,1,1,2-四氟乙烷(R134a)萃取黑果枸杞原花青素的工艺研究及不同产地含量测定

在1 L萃取釜中,对亚临界流体1,1,1,2-四氟乙烷(R134a)萃取黑果枸杞中原花青素的最佳工艺进行了研究。以原花青素的萃取率为指标,采用单因素试验和正交试验考察了萃取压力、萃取温度、萃取时间对萃取率的影响。影响黑果枸杞中原花青素提取率的各因素主次顺序为:萃取温度 >萃取压力 >萃取时间,在萃取压力1.2 MPa,萃取温度50℃,萃取时间90 min为最佳提取工艺条件下,黑果枸杞原花青素的萃取率最高。同时在该优化条件下采用香草醛–盐酸法测定了不同产地黑果枸杞中原花青素的含量。该方法易于操作、选择性好、萃取温度低、萃取效率高,适用于黑果枸杞中原花青素的提取。

不同产地烈香杜鹃的红外指纹图谱比较研究

烈香杜鹃为常用藏药,具有止咳、祛痰、平喘、清热解毒、健胃消肿之功效,藏医常用于治疗类风湿性关节炎,多数为野生药材;为有效鉴别烈香杜鹃的真伪、产地和品质差异,采用红外光谱法对13个不同产地的烈香杜鹃进行了红外光谱图的识别分析。红外光谱的扫描范围为4000~400cm^-1,实验发现其红外光谱相似;对红外吸收谱带归属进行判别分析,建立了烈香杜鹃红外指纹图谱,其特征吸收峰位于3404,2921,2852,1734,1625,1449,1374,1266,1060和534cm^-1等处;在1517,1316,1161,825,779和594cm^-1附近,峰数目、峰位置与峰强度有差异。计算共有峰率和变异峰率,建立共有峰率和变异峰率双指标序列,利用SPSS软件对其红外图谱数据进行聚类分析。双指标序列分析法与聚类分析法的分析原理与角度不同,分组结果基本一致,表明这两种方法可靠,可用于分析烈香杜鹃的产地与品质差异。双指标序列分析法比较结果显示,样品的共有峰率≥68.75,变异峰率≤27.27,分组结果表明,产地接近、气候条件与生长环境相似的烈香杜鹃之间共有峰率较高;而产地、气候条件与生长环境相差较大的烈香杜鹃之间变异峰率较高。聚类分析结果显示,当欧氏距离为15时,可聚为三大类,R2,R3和R4为一类,R7,R8,R10,R11和R12为一类,剩下的归为一类;当欧氏距离为20时,聚为两大类,R2,R3和R4为一类,剩下的归为一类;当欧式距离为25时,13个产地的烈香杜鹃聚为一类。将聚类分析结果与使用ArcGIS软件所做的烈香杜鹃采样点分布图结合起来分析,能直观地看出烈香杜鹃品质与其产地的关系。综合以上分析,建立的烈香杜鹃红外指纹图谱,结合双指标序列分析法和聚类分析法,可以为鉴别烈香杜鹃的真伪、产地和品质差异提供快速、有效的新方法。

基于数据挖掘的藏医药古籍文献中水银(佐太)解毒组方规律探讨

目的基于数据挖掘探讨藏医药古籍文献中含水银(佐太)解毒组方的用药规律。方法收集《四部医典》《月王药诊》《十万拳》《八支心要集》等22部藏医药古籍文献中的水银(佐太)解毒复方,建立药物、药性、五源、六味、三化味等数据库,使用R 4.2.2、IBM SPSS Modeler 18.0、Origion 2024等软件对水银(佐太)解毒复方药物类别、性味、五源等进行频次统计分析、Apriori关联规则分析、聚类分析,并结合藏医药理论对统计结果进行阐释。结果共收集整理含水银(佐太)解毒复方52首,涉及药物213味,药物使用总频次为1066次。组方涉及的药物以植物药为主“,寒”性药居多;药味以苦、甘、辛为主,五源中空、风和水居多;单味药物出现频次最高的为水银(佐太),其次为诃子、麝香、天竺黄、藏红花、肉豆蔻等;高频药物水银(佐太)、麝香、马钱子、甘青乌头、毛盔马先蒿、轮叶獐牙菜和白芥七味药均具有解毒作用,麝香还具有芳香开窍之功效,诃子能够调和药性和三因,对诸病有效,“六良药”天竺黄、藏红花、肉豆蔻、白豆蔻、丁香和草果能够调和气血,治疗五脏六腑疾病。关联规则分析显示支持度大于59.62的药对组合24对,三味药物组合9组,多为水银(佐太)、诃子、麝香和六良药的组合;对药物频次>10的药物进行聚类分析,得出7个聚类方,多具有清热解毒、调和五脏六腑的功效。结论水银(佐太)解毒组方药物多以植物药、寒性药物和苦味药物为主,符合清除毒热的藏医药解毒治法。其用药规律体现为使用诃子调和药性,用解毒药物来解毒,加芳香类药物迅速清除或排除毒素,用六良药来保护五脏六腑,药物合用共奏清热解毒、开窍通络、调和五脏六腑之功效。研究为藏药水银(佐太)解毒组方的用药规律提供了数据支撑。

基于德尔菲法的藏药“蒂达”药用资源和临床应用专家共识

目的:为促进藏药"蒂达"的药用资源开发和临床应用提供参考。方法:采用德尔菲法。查阅文献资料,确定咨询问题,采用线上函询和现场发放调查问卷两种方式向从事藏医药临床、科研、教学及生产的专家进行咨询,对目前"蒂达"药材资源及其使用中存在的分歧和问题进行评价,直至基本达成一致,最终确定藏药"蒂达"药用资源和临床应用专家共识条目。结果与结论:两轮函询共有33位专家参与。根据文献调研结果,第1轮设置函询指标16个;之后根据专家意见修改指标体系,第2轮设置函询指标18个。经过两轮函询,最终在藏药"蒂达"的基原名称、质量标准和临床应用等3方面的16个条目达成共识,2个关于"蒂达"的特征以及配伍用药的条目暂未达成共识。达成共识的16项内容涵盖了"蒂达"基原名称及地理信息的流变、"蒂达"药材的合理选药、"蒂达"临床用药有效性与安全性等主要内容。

藏药鲜卑花化学成分研究

目的对鲜卑花Sibiraea laevigata化学成分进行研究。方法利用硅胶柱色谱和中压制备等方法进行分离纯化,并经核磁共振、质谱等波谱手段确定化合物结构。结果从鲜卑花嫩叶和果序的乙醇提取物中分离得到12个化合物,分别鉴定为月桂酸甘油酯（1）、正壬烷（2）、3,4-二羟基反式肉桂酸乙酯（3）、异阿魏酸（4）、甲基阿魏酸（5）、对甲氧基桂皮酸（6）、ω-羟基-3-甲氧基-4-羟基苯乙酮（7）、3-羟基-1-（4-羟基-3,5-二甲氧基苯）-1-丙酮（8）、（＋）-松脂素（9）、bis（2-ethylhexyl）phthalate（10）、9α-hydroxymedioresinol（11）、C-veratroylglycol（12）。结论化合物1~12均为首次从鲜卑花中发现,化合物9~12为首次从鲜卑花属中得到。

HPLC同时测定沙棘中的6种色胺类生物碱

目的采用HPLC法同时测定6种沙棘中的色胺类生物碱。方法采用Xcharge-C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.15%三氟乙酸水溶液,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^(-1),检测波长280 nm,柱温30℃,进样量10μL。结果6种色胺类生物碱的线性范围分别为6.28~251.40、5.71~228.60、1.14~457.10、0.80~32.00、0.31~12.60、0.46~18.30μg·mL^(-1)(r^(2)>0.9993);其中,供试品中共检测到4种色胺类生物碱,分别是5-羟色胺、6-hydroxy-l-methyltetrahydro-β-carboline-1-carboxylic acid、shepherdine、L-色氨酸;平均加样回收率分别为93.63%、89.86%、91.58%、90.91%,RSD均<3.00%。结论所用方法简便、可靠、重复性好、结果准确。

中宁枸杞品种的近红外光谱快速鉴别

利用2种不同采集方式(光纤、积分球)进行近红外光谱采集,优化并建立了12种不同枸杞品种的品种判别模型,实现了对中宁枸杞品种的快速准确判别。在获取得到12种中宁枸杞品种的近红外光谱的基础上,比较不同采集方式下的光谱差异。分别建立了距离匹配(distance match,DM)、判别分析(discriminant analysis,DA)、支持向量机(support vector machine,SVM)等3个不同的品种判别模型。结果表明,以积分球采集方式下的谱图质量较好,在此采集方式下所建的DM、DA、SVM品种判别模型的识别率、预测率和准确率均达到100.00%;而用光纤所采集的谱图只有DA模型的识别率、预测率和准确率达到100.00%。积分球采集方式下所建判别方法可快速、高效地实现中宁枸杞品种判别,为生产实践的应用提供技术支撑。

柴达木枸杞中17种氨基酸的测定与分析

建立柱前衍生RP-HPLC法测定柴达木枸杞中17种氨基酸的含量,并分析不同产地、不同采摘期柴达木枸杞中氨基酸的含量。以2,4-二硝基氟苯为衍生试剂,色谱柱为Gemini-NX C18,流动相A:0.05 mol·L^(-1)的乙酸钠溶液(p H=6.4,含有1‰N,N-二甲基甲酰胺),流动相B:乙腈-水溶液(1∶1,v/v),采用梯度洗脱,检测波长360 nm。17种氨基酸的线性关系、精密度、稳定性、重复性良好,加样回收率为90.28%~102.85%(RSD为1.02%~4.76%);不同产地、不同采摘期的柴达木枸杞中氨基酸种类相同,但含量存在一定差异,产于德令哈的枸杞氨基酸平均含量最高,10月采摘的枸杞氨基酸总含量高于8月和9月,总量为6.217%~8.987%,必需氨基酸占总氨基酸比例为14.307%~19.572%,药用氨基酸占总氨基酸比例为63.632%~71.409%,增香氨基酸占总氨基酸比例为12.121%~17.356%。该方法简单、快捷,可测定柴达木枸杞中氨基酸的含量;不同产地、不同采摘期柴达木枸杞氨基酸含量的差异可能是由土壤环境、气象条件等因素所导致;在枸杞开发利用中可以根据不同的需求选择不同产地和采摘期的枸杞。