平衡冷冻后红细胞胞内未冻水的状态

基于Boyle Van tHoff关系设计了 2种独立的实验方案 ,研究了红细胞内束缚水的状态 .第一种方案使用电子粒子计数仪 (EPC)测定了室温下在不同浓度的NaCl溶液中取得渗透平衡的红细胞的体积 (V) ,其中包括红细胞的等渗体积V0 (与 0 .9%的NaCl溶液取得渗透平衡的红细胞体积 ) .第二种方案使用差示扫描量热仪(DSC)测定了不同压积比的红细胞悬液慢速冷冻的放热量 .通过理论模型计算 ,进一步得到红细胞的最终平衡体积 (Vf) .平衡冷冻的最终体积与细胞内非渗透性体积(Vb)存在差别 ,这一差别被认为是细胞内束缚水的体积 .实验结果表明 :(1)两种实验方法等效 ;(2 )平衡冷冻后胞内几乎没有自由水 ,亦即红细胞内束缚水只有一种状态 ,为结合水 .

平衡冷冻过程中细胞体积的确定

使用新型的电子粒子计数仪(EPC)(Electronic Particle Counter, MultisizerTM 3, Beckman Coulter Inc., USA)测定了人RBC(红细胞)在不同渗透压的NaCl溶液中的体积, 并使用冷冻过程细胞模型预测了RBC在生理盐水(0.9% NaCl溶液)中平衡冷冻的体积变化. 假定温度对RBC的体积的影响相对渗透压而言可以忽略, 则通过NaCl-H2O二元溶液的相图可获得不同温度下NaCl溶液的渗透压值(通过质量百分比浓度换算得到), 从而将计算的体积值与以上测量值相互验证.