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表达HIV-I CN54株gagpol基因重组痘苗病毒疫苗株的构建
被引量:
2
1
作者
戴凯凡
刘颖
+5 位作者
周小云
王芙
段丹丽
吴岚
赵斌
邵一鸣
《中国病毒学》
CSCD
2003年第5期441-445,共5页
为研制不带筛选标记的HIV活载体疫苗,首先构建含有neo基因和lacZ基因双重筛选标记的pVI75转移质粒,并将HIV-Ⅰ中国主要流行株B’/C重组株CN54 gagpol基因置于pVI75的启动子pE/L下,构建重组质粒pVI75-Gagpol。重组质粒与痘苗病毒天坛株...
为研制不带筛选标记的HIV活载体疫苗,首先构建含有neo基因和lacZ基因双重筛选标记的pVI75转移质粒,并将HIV-Ⅰ中国主要流行株B’/C重组株CN54 gagpol基因置于pVI75的启动子pE/L下,构建重组质粒pVI75-Gagpol。重组质粒与痘苗病毒天坛株共转染鸡胚细胞。前三轮通过G418加压,噬斑纯化,得到既含目的基因又含筛选标记的蓝色重组痘苗病毒;后三轮在无G418选择压力下,筛选只含目的基因而缺失了筛选标记的白色重组痘苗病毒。结果表明筛选到了一株重组病毒,经PCR和Dot blot检测确认该株重组痘苗病毒的neo基因和lacZ基因已丢失;PCR鉴定表明目的基因已插入重组痘苗病毒中;抗体染色和Western blot结果证实该重组病毒能很好地表达目的蛋白。
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关键词
gagpol基因
重组痘苗病毒
疫苗株
人免疫缺陷病毒
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职称材料
题名
表达HIV-I CN54株gagpol基因重组痘苗病毒疫苗株的构建
被引量:
2
1
作者
戴凯凡
刘颖
周小云
王芙
段丹丽
吴岚
赵斌
邵一鸣
机构
中国艾滋病预防和控制中心
华中农业大学生命科学技术学院农业微生物国家重点实验室
出处
《中国病毒学》
CSCD
2003年第5期441-445,共5页
基金
国家863高新技术发展项目(2001AA21503)
文摘
为研制不带筛选标记的HIV活载体疫苗,首先构建含有neo基因和lacZ基因双重筛选标记的pVI75转移质粒,并将HIV-Ⅰ中国主要流行株B’/C重组株CN54 gagpol基因置于pVI75的启动子pE/L下,构建重组质粒pVI75-Gagpol。重组质粒与痘苗病毒天坛株共转染鸡胚细胞。前三轮通过G418加压,噬斑纯化,得到既含目的基因又含筛选标记的蓝色重组痘苗病毒;后三轮在无G418选择压力下,筛选只含目的基因而缺失了筛选标记的白色重组痘苗病毒。结果表明筛选到了一株重组病毒,经PCR和Dot blot检测确认该株重组痘苗病毒的neo基因和lacZ基因已丢失;PCR鉴定表明目的基因已插入重组痘苗病毒中;抗体染色和Western blot结果证实该重组病毒能很好地表达目的蛋白。
关键词
gagpol基因
重组痘苗病毒
疫苗株
人免疫缺陷病毒
Keywords
Human immunodeficiency virus I (HIV-I)
gagpol gene
Recombinant vaccinia virus
Vaccines
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
表达HIV-I CN54株gagpol基因重组痘苗病毒疫苗株的构建
戴凯凡
刘颖
周小云
王芙
段丹丽
吴岚
赵斌
邵一鸣
《中国病毒学》
CSCD
2003
2
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