体外诊断试剂标准物质国内外现状

概述临床检验量值溯源体系和体外诊断试剂标准物质的国内外现状,分别叙述了血脂、酶学、血液学、分子生物学、免疫学、微生物学等方面的检测标准化。阐明加强体外诊断试剂标准物质建设的蘑要意义,不仅有利于诊断结果的准确一致,而且是做好体外诊断试剂技术监督的有力保证。

c-myc反义RNA对人肝癌细胞系HepG2的体外抑制作用

目的:探讨c-myc反义RNA对人肝癌细胞系HepG2的抑制作用。方法:用四元复合体基因转移系统将重组c-myc反义RNA表达载体pcDNA3.1-as-c-myc体外瞬时转染HepG2受体细胞,3d后流式细胞仪检测肝癌细胞内靶基因表达、细胞凋亡率并分析细胞周期。c-myc反义RNA转染人肝癌细胞HepG2,筛选稳定表达转染质粒的细胞(HepG2/as-c-myc)接种96孔板,绘制生长曲线。结果:c-myc反义RNA可显著降低细胞c-myc蛋白的表达水平,使细胞生长停滞于G0/G1期。稳定表达反义RNA的细胞生长速度与亲本细胞相比明显减慢,有显著性差异。结论:c-myc反义RNA可有效降低人肝癌细胞系HepG2的c-myc蛋白的表达,出现G0/G1期停滞,抑制肝癌细胞的生长增殖。

基因分型质控品在评价PCR-杂交法人乳头瘤病毒基因分型检测试剂中的应用

目的:使用人乳头瘤病毒L1基因分型质控品对PCR-杂交法人乳头瘤病毒基因分型检测试剂盒进行评价。方法:采用建立的HPV基因分型质控品,以质控品盘包含的30种型别的质粒DNA为样本,按照各个试剂盒要求进行扩增、杂交、检测。结果:检测HPV基因分型质控品盘30种不同型别HPV质粒,试剂A检测30种型别检测结果全部符合;试剂B检测有28种型别检测结果符合,2种型别不符合,HPV26和68型漏检;试剂C检测有28种型别检测结果符合,2种型别不符合,HPV44和68型漏检;试剂D检测有27种型别检测结果符合,3种型别不符合,HPV26,44和73型漏检;4家公司的试剂盒基本能正确区分质控品中HPV基因型,但有部分的HPV基因型有漏检现象。结论:包含30种不同型别的HPV基因分型质控品能可靠评价4家公司的HPV分型试剂盒(PCR-杂交法);试剂盒的研发应在通过质控盘的考核情况下加大临床样本的验证,同时也应大力开展HPV分子流行病学的研究,为试剂盒的研发储备基础资料。

Toll样受体与短小棒状杆菌

Toll样受体是一类重要的模式识别受体,特异地识别病原相关分子模式,在固有免疫应答中和获得性免疫应答中发挥重要的作用。我们讨论了配体和信号传导途径。TLR2和TLR9在短小棒状杆菌的免疫调节中发挥着重要的作用。

人乳头瘤病毒基因分型质控品的建立

目的 建立HPV基因分型质控品.方法 收集宫颈脱落细胞标本300份,通过表面等离子谐振法和测序法检测标本型别,根据GenBank中参考序列设计各型别L1基因扩增引物,通过PCR扩增、连接转化构建包含不同型别L1基因重组质粒,通过30个重组质粒PCR鉴定和序列测定,并将测定序列用BLAST软件进行比对.结果 收集的标本包含了HPV 6、16、18等30种不同型别HPV感染.PCR扩增片段大小和设计引物扩增片段长度相符,除了HPV CP8304外,其余型别均在1 500～2 000 bp之间.重组质粒PCR鉴定与目的 片段相符,测序结果 与GenBank中的参考序列一致性在99%以上,在碱基数为1 500 bp的比对序列中不一致碱基数为11个.结论 建立了30种不同型别HPV L1基因分型质控品,覆盖了所有最常见型别,涵盖了14种高危型、3种中危型和13种低危型.

NCPP对小鼠巨噬细胞的免疫调节作用

目的:探讨无细胞短小棒状杆菌纳米级制剂(NCPP)对小鼠巨噬细胞的影响。方法:采用纳米技术制备NCPP。将NCPP与短小棒状杆菌分别注射小鼠腹腔,10 d后,处死小鼠,收集腹腔液体,分离培养巨噬细胞。采用流式细胞术和ELISA法,检测巨噬细胞分泌的肿瘤坏死因子(TNF-α)和干扰素(IFN-γ)。结果:流式结果显示,NCPP组小鼠腹腔巨噬细胞分泌的肿瘤坏死因子(TNF-α)明显低于短小棒状杆菌组(P<0.05)。ELISA结果显示,NCPP组小鼠腹腔巨噬细胞分泌的肿瘤坏死因子(TNF-α)明显低于短小棒状杆菌组(P<0.01),分泌的干扰素(IFN-γ)水平明显高于短小棒状杆菌组(P<0.01)。结论:NCPP对巨噬细胞具有免疫调节作用。NCPP可以刺激巨噬细胞产生TNF-α和IFN-γ。TNF-α水平比较低,可能是NCPP副作用较少的原因之一。

反向杂交法检测HPV基因分型质控品

目的:反向杂交法检测HPV基因分型质控品。方法:采用我室建立的HPV基因分型质控品,以单一型质粒DNA和混合质粒DNA为模板扩增,将扩增好的PCR产物进行导流杂交。结果:以单一型质粒DNA为模板扩增时,HPV基因分型结果正确的亚型有18种,该方法的试剂盒对HPV39,52,53亚型的质粒DNA有漏检。以相同百分比的混合质粒DNA为模板扩增时,试剂盒对HPV35,39,42,68亚型的质粒DNA有漏检;以不同百分比的混合质粒DNA为模板扩增时,试剂盒对混合质粒中百分比低(5%或者2%)的质粒DNA存在着漏检现象。结论:建立的HPV基因分型质控品能够对反向杂交法的试剂盒性能指标进行有效评价,能够满足国内诊断试剂质量监督管理的需要。