白喉毒素无毒变异体CRM_(197)的表达及其载体作用

目的表达白喉毒素无毒变异体CRM197,并考察其载体作用。方法利用基因工程技术在大肠杆菌BL21(DE3)中表达CRM197,用金属镍离子亲和层析纯化;以重组CRM197为蛋白载体,在EDAC的作用下,与活化的A群脑膜炎球菌荚膜多糖(GAMP)结合,制备GAMP-rCRM197结合物,免疫BALB/c小鼠,间接ELISA法测定血清中A群脑膜炎球菌多糖特异性IgG抗体,并分析其免疫原性。结果重组CRM197在大肠杆菌中主要以包涵体形式表达,表达量占菌体总蛋白的25%左右;Western blot证明重组CRM197具有良好的反应原性;各针接种后,结合物诱生的多糖特异性IgG水平均显著高于GAMP组和GAMP+rCRM197混合物组,具有较强的免疫原性;多次接种产生了免疫增强效应,重组CRM197具有载体蛋白的作用。结论已在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达了重组CRM197,以纯化的重组CRM197作为载体制备的GAMP-rCRM197结合物具有良好的免疫原性,为以重组CRM197为蛋白载体制备其他结合疫苗奠定了实验基础。

64株大肠埃希菌对氨基糖苷类抗生素的耐药表型与钝化酶基因型的分析

目的调查2004年北京地区临床收集的耐庆大霉素大肠埃希菌对氨基糖苷类抗生素的敏感性和氨基糖苷类钝化酶基因的流行状况。方法采用微量肉汤稀释法检测64株大肠埃希菌对16种氨基糖苷类抗生素的最低抑菌浓度(MIC)值;利用巢式PCR方法对其可能含有的7种氨基糖苷类钝化酶基因进行检测和确证。结果临床大肠埃希菌的耐药表型较为复杂,与钝化酶基因表达有关。测试菌株中存在aac(3)-Ⅱc、aac(6′)-Ⅰb、ant(2″)-Ⅰa和ant(3″)-Ⅰa4种耐药基因,aac(3)-Ⅱc和aac(6′)-Ⅰb是主要的产酶基因。约40%的耐药菌中存在2种或2种以上的钝化酶基因。结论产生氨基糖苷类钝化酶是临床分离的大肠埃希菌对氨基糖苷类抗生素主要的耐药机制。采用巢式PCR方法检测耐药基因,特别是在缺少阳性对照菌株的情况下,可以保障检测结果的特异性和准确性。临床菌的耐药表型和钝化酶基因关系较为复杂,这可能与耐药菌中尚存在其他耐药基因有关。

血清抗b型流感嗜血杆菌磷酸多聚核糖基核糖醇抗体杀菌活性体外检测方法的建立

目的 建立免疫血清中抗b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)磷酸多聚核糖基核糖醇(Polyri-bosylribitol phosphate,PRP)抗体体外血清杀菌试验(Serum bacterialcid assay,SBA)方法。方法通过对补体和指示菌株的筛选,建立体外测定血清中抗Hib-PRP抗体杀菌试验方法,并对实验体系的耐变性、特异性及精密性进行验证。结果指示菌Hib-EAGAN株与Hib阳性血清显示出良好的杀菌特异性,其平均非特异性杀菌率为0;Pel-Freez公司提供的4批补体中,批号为17830的补体具有良好的杀菌稳定性和特异性;经验证,建立的Hib-SBA体系具有良好的耐变性和特异性,其精密性CV值在16%～28%之间。结论成功建立了血清抗Hib-PRP抗体杀菌活性体外检测方法,该方法具有检测样本量大、省时、易标准化等优点。

A+C群脑膜炎球菌多糖疫苗大规模接种后的速发型接种反应观察

目的观察A+C群脑膜炎球菌多糖疫苗大规模接种后的速发接种反应。方法以A+C群脑膜炎球菌多糖疫苗为观察组,伤寒Vi多糖疫苗为对照组,按组群随机分层配对的原则,将观察现场分为108个组群,观察组和对照组各分配54个组群进行接种。建立接种反应监测系统,按统一表格和方法对两组的速发接种反应进行监测。结果两组共接种34 543人,其中A+C群脑膜炎球菌多糖疫苗接种18 167人,伤寒Vi多糖疫苗接种16 376人。A+C群脑膜炎球菌多糖疫苗速发接种反应率为0.44‰;伤寒Vi多糖疫苗速发接种反应率为0.79‰,二者差异无统计学意义;速发接种反应均出现在接种后15 min内,最早的出现在接种后5 min,速发接种反应中有2例为异常反应,但未出现严重反应。结论A+C群脑膜炎球菌多糖疫苗速发接种反应发生率低,预后良好。

国产b型流感嗜血杆菌结合疫苗PRP-TT加强免疫效果评价

目的评价国产b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)结合疫苗PRP-TT的加强免疫效果。方法分别用安儿宝和呵儿贝两种Hib结合疫苗,对在广西柳州市常住儿童进行3、4、5月龄3针免疫,1年后,进行第4剂加强免疫。分别于3针免疫1年后和加强免疫1个月后采血,分离血清,采用ELISA和体外杀菌实验(Serum bactericidal assay,SBA)分别检测免疫前后血清IgG抗体浓度和加强免疫后SBA抗体滴度。结果安儿宝和呵儿贝疫苗3针免疫1年后,血清IgG抗体几何平均数浓度(Geometric mean concentrations,GMCs)分别为3.17μg/ml和3.00μg/ml,二者差异无统计学意义(P>0.05);其中,IgG抗体浓度在1.00μg/ml以上的血清所占的比例分别为79%(62/78)和76%(115/152),二者差异无统计学意义(P>0.05)。加强免疫后1个月,两种疫苗免疫血清中IgG抗体GMCs分别为71.33μg/ml和65.35μg/ml,二者差异无统计学意义(P>0.05);IgG抗体浓度均能100%达1.00μg/ml以上。两种疫苗加强免疫后的血清IgG抗体浓度与各自加强免疫前比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。加强免疫后,两种疫苗免疫血清的SBA抗体滴度分别为5 263和4 637,二者差异无统计学意义(P>0.05)。两种疫苗免疫后血清IgG抗体浓度和SBA抗体滴度均具有相关性(r值分别为0.696和0.689,P<0.05)。结论 3针免疫1年后,两种疫苗免疫血清中IgG抗体仍保持较高的水平,第4剂加强免疫后,抗体水平迅速显著升高,100%达1.00μg/ml以上,且具有有效的体外杀菌功能。

肺炎球菌疫苗的研究进展

肺炎链球菌（即肺炎球菌）导致的疾病在世界各地都是严重的公共健康问题,包括肺炎、脑膜炎、发热性菌血症、中耳炎、鼻窦炎、气管炎等感染.体内外研究显示,肺炎球菌多糖疫苗对成年人肺炎球菌引发的疾病能起到积极的预防作用,但由于多糖疫苗无法刺激产生持续的抗体应答,所以不适用于2岁以下的婴幼儿;而将荚膜多糖与载体蛋白耦联的结合型肺炎球菌疫苗对2岁以下的婴幼儿或免疫缺陷的人群起到积极的保护作用,扩大了使用范围,提高了保护力.本文阐述了预防肺炎球菌疾病疫苗的研究进展,从全菌体疫苗、以菌体荚膜多糖为成分的多糖疫苗直到多糖结合疫苗的发展过程.同时总结了目前国内外结合疫苗的研究现状,认为应将开发安全、有效、价格合理、对肺炎球菌性疾病保护范围广的肺炎球菌疫苗作为高度优先的研究项目.