吸附百白破乙肝(CHO)四联疫苗接种反应及血清学效果观察

目的 考察百日咳、白喉、破伤风、乙肝四联疫苗的接种反应及血清学效果。方法 选择足月分娩、母亲乙肝表面抗原阴性、身体健康的新生儿为接种对象。一期观察 6 0例 ,随机分为 3组 ,第 1组按 2、4、6月龄接种四联疫苗 ;第 2组按 3、4、5月龄接种四联疫苗 ;第 3组按 3、4、5月龄接种三联疫苗。二期观察 35 0人 ,随机分为3组 ,第 1组按 2、4、6月龄接种四联疫苗 ,118人 ;第 2组按 2、4、6月龄左臂接种乙肝疫苗 ,右臂接种三联疫苗 ,114人 ;第 3组按 0、1、6月龄接种乙肝疫苗 ,3、4、5月龄接种三联疫苗 ,118人。结果 一期观察 1组、2组和 3组体温弱反应分别为 5 0 %、10 %和 2 0 % ,无中强反应和局部反应。二期观察试验组体温弱反应为 4 2 4 % ,中反应 1 6 9% ,无强反应。局部弱反应为 0 85 % ,无中、强反应。血清学检测百日咳、白喉、破伤风、乙肝阳转率均大于 90 %。结论 吸附四联疫苗具有较好的安全性 ,采用 2、4、6月龄接种程序可有效诱导产生百日咳、白喉、破伤风。

中国人MBL基因编码区的克隆与原核表达

目的克隆中国人MBL基因编码区序列,并在原核细胞中表达。方法提取肝总RNA,RT-PCR扩增MBL编码区序列,并克隆到pGEM-T-easy载体上,再亚克隆到pET-30(a)上。诱导表达重组MBL,并通过SDS-PAGE检测表达情况,表达蛋白经初步纯化后,用ELISA及点杂交试验检测其免疫原性。结果克隆得到长747bp的MBL编码区序列,与GenBank中的MBL序列同源性在99%以上。重组MBL相对分子质量约为36000,以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白量的20%左右,表达蛋白经初步纯化,纯度可达95%以上。ELISA检测显示重组MBLA490值与阴性对照差异有显著意义(10倍以上),点杂交检测结果为阳性。结论已成功克隆中国人MBL基因的编码区序列,并在大肠杆菌中表达,表达产物与天然MBL具有相似的免疫原性。

蒙古族人MBL基因exonI 54位密码子点突变频率与其血浆含量的相关性

目的 :初步调查健康蒙古族人甘露 (聚 )糖结合凝集素 (MBL)基因 5 4位密码子点突变的情况 ,检测其血浆MBL的含量 ,探讨两者的相关性。方法 :根据MBL基因序列设计引物 ,建立MBL基因点突变的检测方法 (即PCR RFLP)。用MBLOligomerELISA试剂盒测定血浆MBL的浓度。结果 :建立了特异、敏感的检测MBL基因 5 4位密码子点突变的方法 ,测得健康蒙古族人该基因的突变频率为 0 .18;血浆MBL含量的平均值为(2 .5 3± 1.96 )mg/L ,两者呈负相关 (r=- 0 .6 4 1)。结论 :所建立的测定MBL基因 5 4位密码子点突变的PCR RFLP方法 ,特异性高、重复性好、较灵敏 (最低检出量为 16 0pgDNA) ,并证明该基因的突变频率与其血浆MBL的含量呈负相关。

汉回蒙古族人MBLExonⅠ52位基因频率检测及其意义

目的初步调查健康汉族人、蒙族人及回族人MBL52位密码子基因突变的情况。方法采用MBL52位密码子基因突变的序列特异性引物聚合酶链式反应即PCR-SSP检测方法。结果检测169例健康汉族人52位密码子的点突变情况,野生型为161例,占95.3%;突变杂合型为8例,占4.7%。基因频率分别为CGT为0.976;TGT为0.024。检测58例蒙族人,野生型为58例,占100%。基因频率CGT为1。检测100例回族人,野生型为100例,占100%。基因频率CGT为1。组间比较采用χ2检验,P<0.05;汉族与蒙族人比较,P>0.05,汉族与回族人比较,P<0.05。结论ExonⅠ52位密码子的点突变频率不高,汉族与蒙族人没有显著性差异,汉族与回族人有显著性差异。

冠心病患者甘露聚糖结合凝集素、超敏C-反应蛋白的变化及相关性分析

目的测定冠心病患者血浆MBL、Hs-CRP含量,分析这些因素的变化及相关性,探讨冠心病的可能致病机制。方法收集100例冠心病(CHD)病人和60例健康对照者抗凝血,用ELISA法检测血浆MBL含量;免疫比浊法测定Hs-CRP含量;对冠心病组血浆中Hs-CRP与MBL含量进行相关性分析。结果冠心病人血浆MBL含量的平均值(3900μg/L)高于健康对照组(2056μg/L),两者比较差别有统计学意义(P<0.01);冠心病人血浆Hs-CRP含量的平均值(10.257mg/L)高于健康对照组(1.488mg/L),两者比较差别有统计学意义(P<0.01);按Hs-CRP水平升高(>3mg/L)与否将冠心病人分为两组,Hs-CRP水平升高组和Hs-CRP水平正常组的血浆MBL均值(±SD)分别为(3723±2783)μg/L和(4258±3961)μg/L,经t检验两者无统计学差异(P>0.05);在100例冠心病样本中,Hs-CRP与MBL含量使用Pearson相关性分析,r=0.144,P=0.245,没有发现两者有相关关系。结论MBL和Hs-CRP两项指标在冠心病组较健康对照组均显著升高,提示他们参与了冠心病的发生、发展过程。虽然MBL和Hs-CRP在冠心病人显著升高,但是这两项指标之间不显示相关,提示它们可能以不同机制参与冠心病发生。

中国百日咳鲍特菌血清型及其相关基因分析

目的了解我国1955-2005年临床分离百日咳鲍特菌及疫苗株的血清型及其相关基因特征。方法应用抗菌毛蛋白2（fim2）和3（fim3）单克隆抗体凝集反应分析我国不同时期分离的80株百日咳鲍特菌株和3株疫苗株的血清型，并与相应的多克隆抗体方法进行比较分析；同时应用PCR方法扩增这些菌株fim2和fim3基因，并对这些PCR产物进行DNA测序分析。结果研究表明，与多克隆抗体分析结果相比较，单克隆抗体玻片凝集方法和微量凝集反应除一株临床分离株的血清型分析结果不同，其余菌株的结果均一致。研究菌株的血清型分析结果显示17株临床分离菌株和CS与P3S10疫苗株的血清型为fim2＆3型、48株菌为fim2型、15株分离菌株与18530疫苗株为fim3型。在我国扩大免疫规划前分离菌株的血清型以fim2型和fim2＆3型为主，随着大范围的百日咳疫苗接种，l临床分离菌株中fim3型血清型细菌所占的比例逐渐增多。分析菌株中fim2和fim3的基因型以fim2-1（92．5％）和fim3-A（95．0％）亚型为主；18530疫苗株基因型为fim2-2和fim3-A，而其他两株疫苗株的基因型均为fim2—1和fim3-A。在2000年以后，分离出现含有fim3-B和fim3-D亚型菌株，这些结果表明随着我国大范围百日咳疫苗免疫接种，百日咳分离菌株表达的血清型及其基因序列也出现适应性变异。结论本研究证实了抗fim2和fim3单克隆抗体在百日咳血清型分析的特异性和实用性。对我国不同时期分离菌株和疫苗株的血清型分析，为我国百日咳疫苗株的检定、流行病学和细菌进化的研究奠定了基础。

吸附全细胞百白破乙肝四联疫苗效果观察

目的 考察武汉生物制品研究所研制的全细胞百日咳、白喉、破伤风、乙肝联合疫苗的安全性和免疫原性 ,探讨联合疫苗的免疫程序。方法 进行 2期临床观察。将研究对象随机分为 3组 ,第 1组按照 2、4、6月龄接种吸附百白破乙肝 (CHO)联合疫苗 ;第 2组按照 3、4、5月龄接种吸附百白破乙肝 (CH0 )联合疫苗 ;第 3组按照 3、4、5月龄接种吸附百白破联合疫苗。 2期研究也随机分为 3组 ,第 1组按照 2、4、6月龄接种“百白破乙肝联合疫苗” ;第 2组按照 2、4、6月龄左侧上臂接种乙肝对照疫苗 ,右侧上臂接种百白破三联对照疫苗。结果 一期安全性试验观察对象 91名 ,其中接种四联疫苗的两组各有 1名体温有较弱升高 ,分别占接种例数的 3 3%。二期共接种 36 5例 ,完成全程免疫共 319例。其中四联疫苗 2 ,4 ,6月龄接种组有 4例出现副反应 ,发生率为 3 1%;按 2 ,4 ,6月龄左臂接种乙肝疫苗、右臂接种白百破三联疫苗组有 5例发生副反应 ,发生率 4 2 %;第 3组 0、1、6月龄接种乙肝对照疫苗 ,3、4、5月龄接种百白破三联对照疫苗 ,共有 14例发生副反应 ,发生率为 12 2 %。 1、2期临床观察均未发现严重副反应。接种四联疫苗后 ,接种对象血清白喉、破伤风、乙肝抗体阳转率均达 10 0 %,百日咳抗体阳转率大于 85 %。

黏膜佐剂mLT63及CpG-ODN鼻内免疫的佐剂作用

目的研究大肠杆菌不耐热肠毒素无毒突变体mLT63和CpG-ODN鼻内免疫对抗原的佐剂效应。方法选用破伤风类毒素(TT)和小牛血清白蛋白(BSA)为抗原,mLT63和CpG-ODN为佐剂,经鼻内免疫BALB/c小鼠。ELISA间接法检测免疫小鼠血清和肺、直肠及阴道组织萃取液的特异性抗TT、BSA的IgA、IgG水平。结果mLT63和CpG-ODN均能协助TT和BSA抗原在血清、肺、阴道、直肠组织中诱导出高滴度的IgG抗体。在血清中IgA抗体滴度均比较低,而TT-IgA在肺和阴道组织中滴度较高,BSA-IgA在肺组织中滴度较高。各佐剂组之间IgG和IgA抗体水平相比,差异均无显著意义。不同剂量的mLT63诱导的BSA-IgA抗体水平差异无显著意义。结论mLT63和CpG-ODN经鼻内免疫对TT和BSA抗原均有良好的佐剂作用。

肺炎衣原体CPn0308的基因克隆及其内源性蛋白定位的研究

目的克隆肺炎衣原体基因CPn0308,表达融合蛋白,并制备抗体对其表达的内源性蛋白进行初步定位。方法根据STD基因库提供的信息设计引物,聚合酶链反应(PCR)克隆目的基因,用BamHI/NotI对克隆的目的基因和pGEX-6P2载体进行酶切,T4连接酶连接后,重组质粒经42℃转化XL1-blue细菌;用PCR进行初步筛选,交叉PCR对提取质粒进一步确定,最后对插入片断进行序列分析;用IPTG诱导阳性克隆的细菌使其表达GST融合蛋白,纯化后免疫小鼠制备抗体,使用IFA对内源性蛋白进行定位分析。结果克隆出肺炎衣原体基因CPn0308,全长为366bp,编码121个氨基酸;并表达了融合蛋白GST-CPn0308,分子量约为39kD;制备了抗体,IFA实验发现该蛋白初步定位于肺炎衣原体包涵体膜蛋白上。结论成功克隆肺炎衣原体基因CPn0308,其内源性蛋白初步定位于肺炎衣原体包涵体膜上。

北方汉、回、蒙三民族健康人群MBL54,52,57位密码子基因多态性

目的初步调查我国北方地区健康汉、回、蒙族人群MBL基因ExonⅠ54,52,57位密码子点突变的情况。方法用PCR-RFLP方法检测MBL54,57位密码子基因点突变频率;用PCR-SSP方法检测MBL52位密码子基因点突变频率。结果测得MBL54位密码子基因突变频率:汉族0.20;回族0.15;蒙古族0.17。52位密码子基因突变频率:汉族0.03;回族0;蒙古族0。57位密码子基因突变频率:汉族0.10;回族0.03;蒙古族0。结论健康汉、回、蒙族人MBL基因54位密码子点突变频率差异无显著性(Х2=3.31,P>0.1);52位密码子点突变频率差异有显著性(Х2=12.37,P<0.005);57位密码子点突变频率差异有显著性(Х2=27.83,P<0.005)。

老年人MBL基因ExonⅠ点突变频率及其血浆含量变化的研究

目的探讨老年人甘露糖结合凝集素(MBL)基因ExonⅠ52、54和57位密码子点突变频率和血浆MBL含量变化。方法采用PCR-SSP法检测MBL基因ExonⅠ52位密码子点突变,PCR-RFLP法检测54和57位密码子点突变;ELISA法测定血浆MBL含量。结果老年组和中青年组52、54和57位密码子基因突变频率分别为0.6%和0.8%(确切概率P=0.801)(52位)、20.9%和16.4%(P=0.336)(54位)、0%和0%(57位)。血浆MBL含量老年组和中青年组分别为(2017±1804)μg/L和(2523±1955)μg/L(P=0.109)(野生型+突变型组);(2956±1701)μg/L和(3432±1687)μg/L(P=0.1775)(野生型组);(530±360)μg/L和(709±416)μg/L(P=0.3448)(突变型组)。结论MBL基因ExonⅠ52、54、57位密码子点突变频率和MBL血浆含量老年组和中青年组差别无统计学意义。

万古霉素和利奈唑胺对56株MRSA防耐药变异浓度的比较

目的比较万古霉素和利奈唑胺对临床分离耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)耐药突变株选择的能力。方法采用平板稀释法测定两种药物对56株临床分离MRSA的防耐药变异浓度(MPC)。结果利奈唑胺和万古霉素对临床56株MRSA的MPC_(90)分别为4μg/mL、20.5μg/mL;MPC_(90)/MIC_(90)分别为2、10.25μg/mL。结论利奈唑胺防MRSA菌株耐药突变的能力强于万古霉素。

急性下颌智牙冠周炎菌群结构变性梯度凝胶电泳分析

目的应用变性梯度凝胶电泳技术,分析急性下颌智牙冠周炎菌群结构。方法采集29例急性下颌智牙冠周炎盲袋内细菌标本,提取细菌总DNA,巢式聚合酶链反应扩增全部细菌16S rDNA基因V2-V3可变区。变性梯度凝胶电泳对PCR扩增产物进行分离。应用BioNumerics软件对DGGE图像资料进行聚类分析,对比不同类别样本中的临床资料、条带数量和条带模式。结果 29例急性下颌智牙冠周炎细菌16S rDNA基因条带数量和条带模式存在不同。通过聚类分析可将临床样本聚为2组,2组间临床资料的差异没有统计学意义;但条带数量和相似系数均不同,差异具有统计学意义。结论急性下颌智牙冠周炎临床状态基本相同,而菌群结构不同。DGGE技术和聚类分析可用于急性下颌智牙冠周炎细菌菌群结构的研究。

抗血清制品的病毒去除/灭活

抗血清制品是将不同免疫原免疫动物所得的血清或血浆经精制、纯化制备的免疫球蛋白或免疫球蛋白片段制剂。目前,抗血清产品主要用于狂犬病、破伤风、肉毒中毒、蛇毒中毒等的治疗和预防,在生物反恐及突发性传染性疾病的预防和治疗方面也具有不可替代的作用,所选用的动物也逐渐以马为主。

应用Vero细胞法测定重组减毒绿脓杆菌外毒素A的残余毒力

绿脓杆菌外毒素A(ETA)有ADP -核糖基转移酶的活性 ,在真核细胞中通过催化ADP -核糖基团从NAD+转移到EF 2 (延长因子 2 ) ,使蛋白质合成终止 ,致细胞死亡 ,其作用机制、机理与白喉毒素相同。本文应用Vero细胞法测定了绿脓杆菌外毒素A的毒性 ,发现Vero细胞对绿脓杆菌外毒素A的敏感度高达 3.0× 10 -5mg/ml,且精密度高 ,准确性好 ,是一种有效、可行的绿脓杆菌外毒素毒力的测定方法。对 3批经基因工程减毒后样品的残余毒力进行了测定 ,发现样品基本无细胞毒性 ,毒力比原毒素低 2× 10

促肝细胞生长物质对实验性肝损伤动物的肝脏修复作用

本实验测定了促肝细胞生长物质对CCl4 诱导的中毒性肝损伤及D 氨基半乳糖致急性肝衰竭的动物的恢复与治疗作用 ,发现促肝细胞生长物质能促进受损肝细胞的增长 ,迅速降低肝损伤后的ALT水平 ,降低肝衰竭动物的死亡率 ,对肝脏起很好的保护作用。并发现促肝细胞生长物质还能减少受损肝组织中的纤维细胞 ,防止肝硬化的形成。

汉族人MBL基因ExonI54位密码子点突变及其血浆含量相关性研究

目的 :建立检测MBL基因 5 4位密码子点突变的方法 ,初步调查健康汉族人MBL基因 5 4位密码子点突变的情况 ,检测其血浆MBL含量 ,找出二者的相关性。方法 :根据MBL基因序列设计引物建立MBL基因点突变检测方法即PCR -RFLP ;用MBLOligomerELISA试剂盒测定出血浆MBL的浓度。结果 :建立了特异敏感的检测MBL基因 5 4位密码子点突变的方法 ,测得健康汉族人基因突变频率为 0 .2 32 1 ;健康汉族人血浆MBL含量的平均值为1 999μg/L ,标准差为 1 5 0 5 ;健康汉族人血浆MBL含量与其编码基因Exon 1 5 4位密码子的点突变频率呈负相关 ,χ2 =4 8.1 0 7,P <0 .0 0 1 ;r =- 0 .6 2。结论 :所建立的MBL的PCR -RFLP测定点突变的方法 ,特异性高 ,重复性好 ,较为灵敏 (最低检出量为 1 6 0 pgDNA) ;初步测定了健康汉族人的基因突变频率及其血浆MBL含量 ,二者呈负相关。

北方回族人MBL54位密码子基因多态性及血浆含量相关性

目的:初步调查北方地区健康回族人群MBL基因ExonI54位密码子点突变的情况,检测其血浆MBL含量,探讨二者的相关性。方法:用PCR-RFLP方法检测MBL基因点突变频率;用MBL Oligomer ELISA试剂盒测定出血浆MBL的浓度。结果:测得健康回族人该基因突变频率为0.15;血浆MBL含量的平均值为3.40mg/L;二者呈负相关(r=-0.67)。结论:健康回族人MBL基因54位密码子点突变频率与其血浆含量呈负相关。

冠心病患者甘露聚糖结合凝集素、肺炎衣原体感染的变化及相关性分析

目的探讨冠心病(CHD)患者血浆甘露聚糖结合凝集素(MBL)含量及肺炎衣原体(Cpn)感染情况及冠心病的可能致病机制。方法采集100例CHD患者和60例健康对照者抗凝血,用ELISA法对血浆中MBL含量及肺炎衣原体(Cpn)IgG进行检测。结果CHD患者血浆MBL含量(3900μg/L)高于健康对照组(2056μg/L)(P<0.01);CHD患者血浆CpnIgG阳性率(51.00%)高于健康对照组(33.33%)(P<0.05);CHD中51例血浆CpnIgG阳性者MBL含量(3819μg/L)与49例血浆CpnIgG阴性者MBL含量(3984μg/L)比较,差别无统计学意义(P>0.05)。结论MBL和Cpn感染与CHD之间存在一定关系,可能参与了CHD的发生、发展过程。Cpn感染阳性和阴性组的MBL含量未显示统计学差异。

张家口地区汉族人MBL基因多态性及其血浆含量相关性分析

目的建立检测MBL基因ExonⅠ54位密码子点突变的方法,初步调查健康汉族人MBL基因54位密码子点突变的情况,检测其血浆含量,探讨两者的相关性。方法根据MBL基因序列设计引物,建立MBL基因点突变检测方法(即PCR-RFLP);用MBL Oligomer ELISA试剂盒测定其血浆浓度。结果建立特异、敏感的检测MBL基因54位密码子点突变的方法,测得基因突变频率为0·23;血浆MBL含量平均值(1·99±1·51)mg/L;两者呈负相关(r=-0·62)。结论所建立的测定MBL的PCR-RFLP方法,特异性高,重复性好,较为灵敏(最低检出量为160pg DNA);测定健康汉族人MBL基因点突变频率与其血浆含量,并证明两者呈负相关。