环氧化酶Ⅱ抑制剂体外筛选模型的研究

目的 建立环氧化酶Ⅱ活性的检测模型 ,提供环氧化酶Ⅱ抑制剂的筛选模型及非甾体类抗炎药 (nonsteoroidalanti in flammatorydrug ,NSAID)筛选的方法。 方法 利用NIH 3T3细胞在血清存在情况下能诱导生成环氧化酶Ⅱ的特性 ,通过加入底物花生四烯酸 ,检测终产物前列腺素E2 (PGE2 )含量的变化 ,判断化合物对环氧化酶Ⅱ的作用。以rofecoxib(罗非昔布 )为阳性药来判断该模型能否用于环氧化酶Ⅱ活性的检测。结果 Rofecoxib能明显的抑制环氧化酶Ⅱ的活性。

环氧化酶Ⅱ基因克隆及表达

利用RT-PCR技术从NIH 3T3细胞中克隆出环氧化酶ⅡcDNA,全长1815bp,测序分析表明与文献报道已知相符,构建真核表达载体。用阳离子脂质体介导转染的方法转染至宿主细胞HEK293细胞中,G418筛选出稳定转染的细胞克隆。加入底物花生四烯酸,通过测定PGE2含量的变化判断酶活,结果表明重组质粒能够表达环氧化酶。