雷公藤甲素对人肝细胞L-02氧化损伤的初步研究

目的研究雷公藤甲素对正常人肝细胞株L-02细胞凋亡和活性氧生成的影响。方法体外培养L-02细胞,MTT法检测雷公藤甲素对L-02细胞的毒性作用,H2DCFH-DA探针流式细胞仪检测细胞中ROS生成量,并测定细胞SOD活性、MDA含量及LDH释放量的变化。结果雷公藤甲素诱导L-02细胞中ROS生成,且随时间的延长而增多,至12h时达峰值(P<0.01);同时,雷公藤甲素也能诱导细胞中MDA含量及LDH释放量的增加,诱导SOD活性的降低。结论雷公藤甲素体外诱导人正常肝细胞L-02细胞凋亡可能与其促进活性氧生成有关。

3 123例可疑医疗器械不良事件统计分析

目的:对3 123例医疗器械不良事件报告进行分析,为加强医疗器械不良事件监测工作提供建议。方法:采用回顾性研究方法,对湖南省2007年收集的医疗器械不良事件报告及其质量进行综合分析。结果:我省医疗器械不良事件主要来源于医疗机构及其它使用单位,宫内节育器、外科缝线和金属接骨板等不良事件发生比例较高;医疗器械不良事件上报数量地区间存在不平衡。结论:应进一步加强医疗器械不良事件监测工作的宣传培训,提高监测质量,为保障公众用械安全服务。

清开灵不同制剂的高效液相指纹特征比较

目的比较清开灵不同制剂的高效液相色谱指纹图谱。方法选择NUDEOSIL-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相(A)甲醇-(B)0.5%醋酸梯度洗脱,运行时间65 min,检测波长255 nm,测定清开灵注射液的指纹图谱。结果以黄芩苷作为参照峰,得出各色谱峰的相对保留时间和相对峰面积。结论清开灵不同制剂的指纹图谱相差较大,提示不同的生产工艺可能对其成分及含量有较大的影响。

新型20(S)-O-取代苯甲酸-7-苯甲酰基喜树碱酯的合成及其抗肿瘤活性

以20(S)-喜树碱为起始原料,对其进行结构修饰,在7-位导入苯甲酰基,在20-位羟基上导入取代苯甲酰基,设计并合成了11个新的20(S)-O-取代苯甲酸-7-苯甲酰基喜树碱酯化合物(4a^4k),其结构经1H NMR,IR,,MS(ESI)和元素分析表征。采用MTT法初步考察了目标化合物4a^4j对人胃癌细胞(BGC-823)、人乳腺癌细胞(MDA-MB-231)、人肺腺癌细胞(H460)及人肝癌细胞(Bel-7404)的体外抑制活性。结果表明:化合物4a、4g和4h具有一定的体外抑瘤活性。在药物浓度为10μmol·L^(-1)时,4a对MDA-MB-231细胞和H460细胞的抑制率分别为50.42%和54.40%,4g对MDA-MB-231细胞的抑制率为69.91%,4h对H460细胞抑制率为52.34%。

湖南省药品不良反应监测工作的实践与思考

通过对湖南省药品不良反应监测中心开展药品不良反应监测工作实践及现状进行梳理,提出工作发展的新思路,以期为国内药品不良反应监测工作提供借鉴。

2,4-二甲氧基苯乙胺类α_1-肾上腺素受体拮抗剂的合成、生物活性研究

目的设计合成苯乙胺类α1-肾上腺素受体(α1-AR)拮抗剂,并研究它们对大鼠肛尾肌收缩功能的影响。方法以DDPH为先导化合物设计合成了11个新化合物,以2,6-二甲基苯酚为原料经多步反应得中间体卤代苯氧丙酮,再经还原胺化得目标物。运用大鼠肛尾肌收缩功能实验测定目标物的拮抗活性。结果共合成了11个目的物,其结构经IR、HRMS1、H-NMR确证。结论生物活性测试显示大部分目标化合物均具有一定的α1-AR拮抗活性,化合物Ⅲk拮抗作用和DDPH接近。

20(S)-O-取代苯甲酸-7-乙基喜树碱酯类化合物的合成及其抗肿瘤活性

在AcOH/98%H2SO4体系中,喜树碱和正丙醛经烷基化反应制得7-乙基喜树碱(2);以1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐为脱水剂,4-二甲氨基吡啶为催化剂,2与取代苯甲酸直接酯化合成了一系列新型的20(S)-O-取代苯甲酸-7-乙基喜树碱酯类化合物(4a～4k),其结构经1H NMR,IR和MS表征。采用MTT法初步考察了4a～4k对人肺癌细胞(LLC-E9FP),人肺腺癌细胞(95D),人胃癌细胞(BGC-803),人胃癌细胞(HGC-27)和人肝癌细胞(7721)的抑制活性。结果表明,4b和4e对LLC-E9FP具有明显强于喜树碱的抑制活性;4h～4k对HGC-27,95D,7721也有明显的抑制活性。

不同厂家清开灵注射液指纹图谱研究

目的:比较不同厂家清开灵注射液的HPLC指纹图谱。方法:选择NUDEOSIL-C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相(A)甲醇—(B)0.5%醋酸梯度洗脱,运行时间65min,检测波长255nm,测定清开灵注射液的指纹图谱。结果:标示出清开灵注射液17个共有峰,以黄芩苷作为参照峰,得出共有峰的相对保留时间和相对峰面积,用中药指纹图谱相似度计算软件计算得出其相似度在0.9以上。结论:不同厂家清开灵注射液的指纹图谱基本一致,可以利用指纹图谱对其进行质量控制。

清开灵注射液指纹图谱的HPLC研究

目的:建立清开灵注射液的HPLC指纹图谱。方法:选择NUDEOSIL-C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相(A)甲醇-(B)0.5%醋酸梯度洗脱,运行时间65min,检测波长255nm,测定清开灵注射液的指纹图谱。结果:标示出清开灵注射液17个共有峰,以黄芩苷作为参照峰,得出共有峰的相对保留时间和相对峰面积,其非共有峰面积未超过总峰面积的10%。结论:方法准确、重复性好,为清开灵注射液的指纹图谱质量控制提供了依据。

皮肤5-羟色胺能系统及其病理作用

5-羟色胺(5-hydroxtrytamine,也叫血清素,简称5-HT)是在中枢和外周神经系统广泛存在的作为神经递质的胺类。5-羟色胺及其代谢产物构成的5-羟色胺系统在皮肤中广泛分布并在其生理调节中起到多种重要作用,其非正常改变可能参与多种皮肤病的发生及进展。本文就5-羟色胺及其重要代谢产物和5-HT受体做一综述,简要介绍皮肤中5-羟色胺能系统及其病理生理作用,为皮肤疾病的治疗尤其是中医中药疗法在此方面的深入应用做出探索。

反相高效液相色谱法测定清开灵注射液中2组分的含量

目的：建立以反相高效液相色谱法同时测定清开灵注射液中黄芩苷、栀子苷含量的方法。方法：色谱柱为Diamonsil^TM C18（250mm×4．6mm，μm），流动相为乙腈-20mmol·L^-3磷酸二氢钠溶液（20：80），流速为1．0mL·min^-1,检测波长为238nm。结果：黄芩苷在1～50μg·mL^-1浓度范围内线性良好（r=0．9995），平均回收率为100．75％（RSD=1．75％）；栀子苷在0.1～10μg·mL^-1浓度范围内线性良好（r=0．9997），平均回收率为100．63％（RSD=1．35％）。结论：本方法快速、简便、准确、灵敏度高，可用于清开灵注射液的质量控制。

雷公藤甲素在大鼠肝微粒体中代谢及酶促反应动力学研究

目的:研究雷公藤甲素在大鼠肝微粒体中代谢及酶促反应动力学。方法:将雷公藤甲素与5种不同诱导剂(地塞米松(DEX)、苯巴比妥(PB)、β-萘黄酮(β-NF)、吡啶(PD))诱导的大鼠肝微粒体进行体外共孵育;并与8种选择性CYP酶抑制剂(酮康唑、醋竹桃霉素、磺胺苯吡唑、二乙基二硫代氨基甲酸酯(盐)、奎尼丁、呋拉茶碱、毛果芸香碱、奥芬那君)在空白肝微粒体中共孵育。采用液相色谱-质谱联用技术测定孵育后剩余雷公藤甲素的含量。结果:酮康唑和醋竹桃霉素能明显抑制雷公藤甲素的代谢;磺胺苯吡唑和奥芬那君对其代谢也有一定抑制作用,但不及酮康唑和醋竹桃霉素。结论:雷公藤甲素在大鼠肝微粒体中代谢主要由CYP3A介导,其次由CYP2C和CYP2B介导。

雷公藤甲素单次及多次给药对大鼠肝药酶活性的影响

目的:研究雷公藤甲素对大鼠肝药酶活性的影响。方法:对SD大鼠以雷公藤甲素(150、300、450μg·kg-1)灌胃给药,每天1次,给药1d或14d,分别测定细胞色素P450、细胞色素b5含量及红霉素N-去甲基酶(ERD)、二甲基亚硝胺脱甲基酶(NDMA)、甲氧基异唑脱甲基酶(MROD)、乙氧基异唑脱乙基酶(EROD)和戊氧基异唑脱烷基酶(PROD)活性;CYP3A和CYP2E1蛋白含量采用Westernblotting法分析。结果:单次灌胃雷公藤甲素对肝药酶活性及CYP2E1、CYP3A蛋白表达基本无影响;多次给予雷公藤甲素(450μg·kg-1,14d)能诱导NDMA活性,抑制ERD活性,轻度升高CYP2E1蛋白表达,显著降低CYP3A蛋白表达。结论:长期较高剂量给予雷公藤甲素能抑制CYP3A活性,轻度诱导CYP2E1活性。

雷公藤甲素诱导肝细胞L-02凋亡的机制

目的:探讨雷公藤甲素对人正常肝细胞L-02细胞的凋亡诱导作用及细胞线粒体呼吸链复合体抑制剂对细胞凋亡的影响。方法:采用Annexin V-FITC/PI双染色法检测雷公藤甲素对L-02细胞的凋亡作用,JC-1染色观察细胞线粒体膜电位的变化,线粒体呼吸链复合体抑制剂对细胞活性氧释放及细胞凋亡的影响。结果:流式细胞仪检测结果显示,雷公藤甲素对细胞增殖的抑制作用与浓度、时间呈正相关;JC-1染色可见经雷公藤甲素作用的细胞线粒体膜电位降低;加入细胞线粒体呼吸链抑制剂后,与单用雷公藤甲素组比较,雷公藤甲素+rotenone组细胞活性氧释放水平显著降低(P<0.05),同时抑制剂合用组细胞凋亡百分率显著降低(P<0.05)。结论:雷公藤甲素体外可诱导L-02细胞凋亡,机制可能是与公藤甲素上调经线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅲ产生的活性氧有关。

雷公藤甲素诱导肝细胞L-02凋亡的作用机制研究

目的:研究雷公藤甲素诱导肝细胞L-02凋亡的作用机制。方法:体外培养L-02细胞,MTT法检测雷公藤甲素对L-02细胞的毒性作用,Hoechst33258染色观察凋亡细胞核形态的改变,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Westernblot法检测人抗兔p53、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)与线粒体、胞浆中细胞色素C(Cyt-c)的表达。结果:不同浓度雷公藤甲素(60、120、180nmol/L)与同样浓度(120nmol/L)不同作用时间(12、24、48h)作用L-02细胞,雷公藤甲素对细胞的抑制作用与浓度或时间呈正相关;Hoechst33258染色可见细胞出现典型的凋亡细胞形态学改变;Westernblot法显示120nmol/L雷公藤甲素作用后,细胞p53、Bax与胞浆中Cyt-c表达显著增强(P<0.05),而Bcl-2与线粒体中Cyt-c表达显著减弱(P<0.05)。结论:雷公藤甲素体外可诱导L-02细胞凋亡,其作用机制可能与Bcl-2与线粒体中Cyt-c表达下调和p53、Bax与胞浆中Cyt-c表达上调有关。

雷公藤甲素对人肝细胞L-02肝药酶活性的影响

目的:研究雷公藤甲素对正常人肝细胞株L-02细胞的损伤作用及其对肝CYP3A及CYP2E1蛋白表达量的影响。方法:体外培养L-02细胞,MTT法检测雷公藤甲素对L-02细胞的损伤,试剂盒测定培养基上清液中AST、ALT及AKP活性,Western-blot测定细胞中CYP3A及CYP2E1蛋白的含量。结果:雷公藤甲素对L-02细胞有损伤作用,且随雷公藤甲素浓度的增加或孵育时间的延长,其损伤作用增强,同时,培养基中AST、ALT及AKP的活性增强;雷公藤甲素诱导细胞中CYP3A蛋白表达减弱,CYP2E1蛋白表达增强。结论:雷公藤甲素体外对人正常肝细胞L-02细胞有损伤作用,且能影响肝CYP450酶系的表达。

雷公藤甲素对人肝细胞L-02钙离子及P38MAPK磷酸化的影响

目的:研究雷公藤甲素对正常人肝细胞株L-02细胞凋亡诱导的作用及对细胞内钙离子及p38MAPK磷酸化的影响。方法:体外培养L-02细胞,Fluo-3AM标记与PI法观察雷公藤甲素对细胞的损伤作用,并测定雷公藤甲素作用下L-02细胞内钙离子浓度及Phospho-p38与Total-p38的含量。结果:雷公藤甲素体外诱导L-02细胞损伤,随着孵育时间的延长,细胞内钙离子浓度升高,至9h时达峰值(P<0.01),12h时有所下降(P<0.05);同时,雷公藤甲素促进细胞中P38MAPK的磷酸化(P<0.01),但对Total-p38无影响。结论:细胞内钙离子的释放及p38MAPK的磷酸化可能参与了雷公藤甲素引起的L-02细胞毒性。

雷公藤甲素对Caspase诱导人肝细胞L-02凋亡机制的研究

目的:研究雷公藤甲素诱导正常人肝细胞株L-02细胞凋亡的机制。方法:体外培养L-02细胞。MTT法检测雷公藤甲素的细胞毒性作用;Annexin V-FITC/PI双染法检测雷公藤甲素对L-02细胞的凋亡诱导作用;测定细胞基质中半胱天冬氨酸酶(Caspase)8、Caspase9与Caspase3活性的变化及加入Caspase抑制剂Z-DEVD-FMK后对细胞凋亡的影响。结果:雷公藤甲素能显著诱导L-02细胞的凋亡,其作用呈明显的量效关系与时间依赖性;120nmol·L-1雷公藤甲素作用L-02细胞24h使Caspase3的活性显著增强;加入Z-DEVD-FMK后,能有效抑制雷公藤甲素诱导的细胞凋亡。结论:雷公藤甲素体外诱导正常人肝细胞株L-02细胞凋亡可能与上调Caspase3、9的活性有关。

槲皮素对高糖诱导的原代小胶质细胞炎性反应的抑制作用

目的:研究槲皮素对高糖诱导的小胶质细胞炎性反应的改善作用。方法:将体外培养的原代大鼠小胶质细胞分成对照组、高糖组、槲皮素低、中、高(3,10,30μmol·L-1)剂量组。采用ELISA测定培养液上清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α),白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β);采用RT-PCR测定TNF-α、IL-1β、诱导型一氧化氮合成酶(inducible nitric oxide syntheses,iNOS)mRNA表达;采用western blot检测Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)蛋白表达。结果:槲皮素显著地抑制了高糖诱导小胶质细胞中TNF-α、IL-1β、iNOS mRNA的表达,并显著得降低了TNF-α、IL-1β的释放,同时降低了TLR4的表达。结论:槲皮素可通过抑制高糖对小胶质细胞的激活,具有较好的中枢抗炎作用。