盐酸去氢骆驼蓬碱对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡及自噬的影响

目的探讨盐酸去氢骆驼蓬碱(HMH)对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡及自噬的影响。方法①SH-SY5Y细胞分别加入HMH 10,20,40,80和160μmol·L^(-1)或DMSO(细胞对照组)孵育24 h,通过MTT实验检测SH-SY5Y细胞存活率;Hoechst33342/PI染色法观察细胞凋亡;Western印迹法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、胱天蛋白酶3、活化的胱天蛋白酶3及自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3B-Ⅱ(LC3B-Ⅱ)和P62的表达。②SH-SY5Y细胞分别加入HMH(2和4μmol·L-1)或DMSO孵育14 d,检测SH-SY5Y细胞克隆形成率。③HMH 40μmol·L^(-1)单独或与3-甲基腺嘌呤(3-MA)5 mmol·L^(-1)同时加入SH-SY5Y细胞,分别培养4或24 h后,Western印迹法检测LC3B-Ⅱ蛋白的表达。④将SH-SY5Y细胞分别加入HMH 40μmol·L^(-1)或溶剂孵育24 h后,Western印迹法检测蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和p-mTOR的表达。结果①与细胞对照组相比,药物作用24 h后HMH 20~160μmol·L^(-1)组细胞存活率降低(P<0.01),凋亡细胞增多,LC3B-Ⅱ蛋白的相对表达量及Bax/Bcl-2的比值增加(P<0.05,P<0.01),P62蛋白的相对表达量减少(P<0.01)。HMH 40~160μmol·L^(-1)组活化的胱天蛋白酶3/胱天蛋白酶3的比值增加(P<0.05)。②与细胞对照组相比,药物作用14 d后,HMH 2和4μmol·L^(-1)组细胞克隆形成率降低(P<0.01)。③HMH与3-MA同时孵育24 h后,细胞LC3B-Ⅱ的相对表达量比HMH 40μmol·L^(-1)单独处理组降低(P<0.05)。④与细胞对照组相比,HMH 40μmol·L^(-1)组Akt和mTOR的磷酸化水平均降低(P<0.05)。结论HMH通过抑制Akt/mTOR通路抑制人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖,诱导凋亡与自噬。