利用五特征转基因小鼠获得的全人源抗VEGF单抗的抑制血管生成及抗肿瘤活性(英文)

为研究一种全人源抗VEGF单克隆抗体在体外和体内的抑制血管生成和抗肿瘤活性,利用细胞划痕实验检测抗体抑制人脐静脉内皮细胞(HUVEC)迁移的活性;MTT法检测抗体抑制分泌VEGF的肿瘤细胞增殖能力;Annexin V/PI双染检测抗体诱导肿瘤细胞凋亡活性;通过建立胃癌原位模型,静脉注射给予不同剂量的抗体,免疫组化方法检测抗体在体内的抑制血管生成和抗肿瘤活性。结果表明一定剂量的全人源抗VEGF抗体能够显著抑制HUVEC细胞的迁移,明显抑制4种分泌VEGF的肿瘤细胞增殖并显示了一定的诱导肿瘤细胞凋亡的能力。静脉注射一定剂量的抗体能够显著抑制胃癌原位肿瘤的生长和肿瘤血管生成。进而表明该全人源抗VEGF单克隆抗体能够在体外和体内都表现出显著的抑制血管生成和抗肿瘤活性。

全人源抗VEGF165单克隆抗体培养工艺的研究

为研究一种表达全人源抗VEGF165单克隆抗体（HVAB）的重组DG44细胞的培养工艺。在摇瓶培养阶段利用常见的流加和分阶段温度控制培养的方法,初步确定培养工艺。在生物反应器培养阶段,研究了不同pH范围对DG44细胞生长和单克隆抗体表达的影响。结果表明,通过补料可使HVAB表达量从101 mg/L提高到654 mg/L;通过在生长中期的适当降温,使细胞终活性保持在80%以上;pH控制范围6.4~7.4更适合DG44细胞的生长和HVAB表达。反应器中的抗体表达量为526 mg/L,与对照摇瓶相比降低了11%,为之后的中试研究奠定了工艺基础。

抗VEGFR-2全人源IgG1抗体的构建及其在CHO-k细胞中的表达

本文在实验室构建的单链抗体-Fc融合抗体[scFv(AK404R)-Fc]的基础上构建抗VEGFR-2全人源IgG1样全长抗体(Mab-04)。利用重叠PCR,获得Mab-04的轻链和重链的核酸序列后分别克隆到真核表达载体pcDNA3.1,获得重组质粒。脂质体法将重组质粒转染至CHO-k细胞,经Protein A柱纯化细胞培养上清液获得目的蛋白,利用Western blotting检测目的蛋白,ELISA检测Mab-04与抗原亲和力。测序表明重组质粒构建成功,Western blotting检测显示目的蛋白成功表达(1μg·mL-1),ELISA检测阐明该抗体能与抗原结合并呈浓度依赖性(IC50为50 nmol·L-1),表明Mab-04成功表达并正确装配,为进一步大量制备该抗体及其活性研究打下基础。