临床药学微生物学与免疫学实验教学改革探索

实验课教学是药学微生物学与免疫学教学过程中的重要环节,在培养学生学习能力、实践能力和创新能力中发挥着关键作用。从更新教学手段、综合教学模式、改变评估体系、重视教学反馈等途径阐述一些体会。

西红花酸胶囊微生物限度检查方法学验证研究

目的:建立西红花酸胶囊微生物限度检查方法。方法:按2005年版中国药典,用大肠埃希菌、枯草芽胞杆菌、金葡菌、黑曲霉和白色念珠菌对3批次西红花酸胶囊进行微生物限度检查方法学验证试验。结果:采用常规法,仅有枯草芽胞杆菌试验组平均回收率为59%,其余各菌株试验组回收率均大于70%;采用培养基稀释法,所有验证菌试验组回收率均大于70%;控制菌检查试验组采用常规法,检出了大肠埃希菌。结论:本项研究提供了一个适用于西红花酸胶囊微生物限度检查的方法。

酶法合成L-丝氨酸及反应液中氨基酸的分离

含 gly A的基因工程菌所表达的 SHMT可催化甲醛和甘氨酸特异地合成 L-丝氨酸。对酶法合成的部分条件进行了优化 ,并根据甲醛滴定的原理 ,确定了通过检测 p H变化控制甲醛流加速度的方案 ,最终的反应液中 L-丝氨酸浓度达 0 .2 mol/L。反应结束后的酶反应液中同时含有甘氨酸和丝氨酸 ,利用国产 71 7树脂获得较为理想的分离效果 ,丝氨酸的收率达 77% 。

发酵液中重组水蛭素的分离纯化

目的 :建立毕赤酵母 (pichia)高密度表达的重组水蛭素 (recombinanthirudin 2 ,rHV2 )分离纯化工艺。方法 :高密度培养重组毕赤酵母并诱导表达水蛭素至胞外 ,发酵液经超滤、透析、离子交换层析 ,分离纯化rHV2 目的蛋白 ;采用SDS PAGE和抗凝血酶活力分别检测目的蛋白纯度和活性。结果 :纯化样品经SDS PAGE电泳检测为单一条带 ,重组水蛭素比活性为 6 0 0 0ATU/mg ,纯化收率达 38 6 %。结论 :超滤、透析和离子交换层析可用于发酵液中大规模分离纯化重组水蛭素。

口服罗红霉素颗粒剂的相对生物利用度

以藤黄八叠球菌 2 80 0 1为试验菌 ,用微生物琼脂扩散法测定血清中罗红霉素浓度 ,最低检测浓度为 0 .2 5μg/ ml,线性范围 0 .2 5～ 1 0 .0 0 μg/ ml。 8名健康志愿者 ,随机口服单剂量(30 0 mg)罗红霉素片 (罗力得 )和罗红霉素颗粒剂 ,用面积法估算的罗红霉素颗粒剂的相对生物利用度为 93± 1 3% ,经统计分析 。

SHMT酶促反应液中L-丝氨酸分离和有关组分分析

目的 :研究酶促反应液中L 丝氨酸的分离和反应液中甲醛、丝氨酸浓度的测定。方法 :采用 732树脂、71 7树脂离子交换柱层析从酶促反应液中分离甘氨酸、L 丝氨酸 ;采用铬变酸比色法测定甲醛和丝氨酸浓度。结果 :两种树脂柱层析均可不同程度地分离两种氨基酸 ,但 71 7树脂柱的分离效果更好 ,丝氨酸的收率可达 77%。结论 :利用 71 7树脂柱层析可从SHMT酶促反应液中成功地分离 L 丝氨 酸 ;铬变酸比色法可用于测定酶反应液中甲醛浓度。

蛙皮活性提取物的抗炎作用和体外抗菌活性研究

从美国沼泽绿蛙的皮中分离、提取得到蛙皮活性提取物，体外抗菌试验表明，该活性提取物对金黄色葡萄球菌等有抑制作用。另外，小鼠分别ｐｏ０．２２ｇ／ｋｇ和０．４５ｇ／ｋｇ活性提取物，能明显降低致炎剂导致的小鼠耳肿胀率，分别比空白组降低１８．３％和３１．６％；能明显抑制小鼠血管通透性，Ａ５９０ｎｍ吸收值分别比空白组降低２３．４％和２４．３％。

产气肠杆菌突变株EAM-Z1的培养和核苷磷酸化酶活力的研究

目的 :大规模培养具有高活力核苷磷酸化酶的产气肠杆菌突变株 (E .aerogenesEAM Z1) ,利用静息细胞酶法合成抗肿瘤核苷药物中间体 5 氟尿苷 (FUR)。方法 :补料分批培养产气肠杆菌 ,发酵过程流加葡萄糖、控制发酵液的pH和pO2 ,摇瓶培养基中加入底物胞苷诱导核苷磷酸化酶 ,通过酶法合成FUR时菌体对底物尿苷的转化率来研究菌体的核苷磷酸化酶活力。结果 :葡萄糖既可满足产气肠杆菌碳源的需要 ,又能维持培养液的pH ,培养 2 4h发酵液菌体湿重为 19 1g/L ,以尿苷 (UR)和 5 氟尿嘧啶 (FU)为底物 ,产气肠杆菌游离湿菌体对UR的酶转化率为 5 6 7% ;摇瓶培养基中加入 3 0g/L胞苷诱导核苷磷酸化酶 ,静息细胞的酶转化率提高了10 2 % ;酶反应间隙流加底物UR浓度达 30mmol/L时 ,产物FUR的浓度最高 ,进一步增加底物浓度则抑制产物的合成。结论 :通过大规模培养可获得产高活力核苷磷酸化酶的产气肠杆菌 ,其静息细胞可用于抗肿瘤核苷药物中间体FUR的制备。

氟罗沙星注射液的体内外抗菌活性研究

采用体外抗菌活性和体内保护作用等试验确定氟罗沙星注射液对临床分离的革兰氏阳性和阴性菌的抗菌活性。氟罗沙星注射液对本试验中的大多数革兰氏阳性和阴性菌均具有良好的抗菌活性；对革兰氏阴性菌和葡萄球菌的抗菌活性强于链球菌。接种量从１０３增加到１０７ＣＦＵ／点时，该药物对试验菌的ＭＩＣ值变化不大；但培养基ｐＨ值为酸性时（ｐＨ＝５），药物对试验菌的抗菌活性明显降低４～３２倍。体内保护试验表明：氟罗沙星注射液对大肠杆菌感染的小鼠有良好的保护作用；氟罗沙星注射液对四株试验菌的体内抗菌活性与对照药物乳酸环丙沙星注射液相近。

关联度分析法优化克拉维酸发酵培养基

文章应用关联度分析方法 ,对克拉维酸发酵培养基中 4种主要成分进行研究 ,结果显示克拉维酸发酵时适当增加黄豆粉和甘油的量 ,减少麦芽汁和蛋白胨的用量可提高效价 ,降低成本。

头孢他啶/他唑巴坦复方对产β-内酰胺酶耐药菌株的增效作用研究

通过对不同配比的头孢他啶 /他唑巴坦体外抗菌活性测定 ,筛选产 β 内酰胺酶抗药菌株 ,提取其胞内物质 ,经Nitrocefin法鉴定确含 β 内酰胺酶的菌株 ,用以水解复方的各种配方 ,采用生物法测定复方各种配方的抑酶保护率。体外抗菌活性及抑酶保护率的测定结果均表明 ,头孢他啶 /他唑巴坦复方各配比均具有抑酶增效作用 。

肝舒Ⅰ号对鸭乙型肝炎病毒的作用

以鸭乙型肝炎病毒感染鸭为实验模型对肝舒Ⅰ号进行了抗病毒试验，肝舒Ⅰ号剂量为５ｇ／ｋｇ·ｄ时抗病毒效果与阳性对照药物无环鸟苷基本相当。将转阴鸭连续喂养３个月后，不出现＂反跳＂现象，优于无环鸟苷。

牛初乳复合细胞营养因子(CHF)的体内、外抗菌作用研究

牛初乳复合细胞营养因子（ＣＨＦ）对伤寒杆菌、大肠杆菌、白色葡萄球菌、变形杆菌、绿脓杆菌、福氏痢疾杆菌６种肠道常见致病菌均有一定的正常凝集效价，其中对大肠杆菌和绿脓杆菌的凝集效价与人γ－球蛋白相同。体外试验表明ＣＨＦ对白色葡萄球菌和福氏痢疾杆菌有一定的抑菌作用，且这种抑菌作用不依赖补体的参与。ＣＨＦ可促进小鼠体内抗绿脓杆菌的免疫保护作用，当绿脓杆菌的攻击量达２．８×ＬＤ５０时，就有非常显著的作用，且强度与人γ－球蛋白相似。

赤霉素产生菌的诱变育种

使用紫外线(UV)、^(60)Co(5.16 C/kg·min,4 h)和DES(0.5%,5 min)连续处理赤霉素产生菌,获得几株高产菌株,达到了比较满意的诱变效果。由此推知,^(60)Co和DES可能是对赤霉菌较合适的诱变剂。

瘰疬宁胶囊剂对豚鼠结核病的治疗作用

用人型结核杆菌Ｈ３７ＲＶ标准株皮下感染豚鼠，造成豚鼠结核病模型。瘰疬宁胶囊剂能使结核病豚鼠体重降低百分率明显减小；高、中两个剂量组豚鼠颈部肿大的淋巴结数目明显少于阴性对照组；该药还可减轻其脾、肺、肝的病变程度（肉眼观察）和脾、肺、肝、淋巴结的重量指数；病理检查发现，该药可使脾、肺、肝、淋巴结的干酪性坏死发生率显著降低；并能减少脾、肺、肝及淋巴结结核杆菌培养的活菌单位数目。

虫草多糖对庆大霉素诱发的急性肾衰的预防作用

目的:探讨虫草多糖对庆大霉素诱发的急性肾衰的防治作用。方法:将实验动物分为阳性地塞米松磷酸钠组,虫草多糖高、中、低剂量组以及正常对照组、模型组;采用腹腔注射庆大霉素的方法复制大鼠急性肾衰(ARF)模型,造模过程中预防给药。观察大鼠的血液生化指标、肾功能、肾病理、肾指数等指标的变化。结果:预防给药后,阳性对照组和虫草多糖3个剂量组大鼠的血清尿素氮、肌酐的含量,以及尿蛋白和尿量降低,与模型组比较有显著差异(P<0.01或P<0.05),高剂量和中剂量虫草多糖的作用优于阳性对照组。病理切片可见阳性对照组和虫草多糖高剂量组大鼠肾脏病理损伤明显好转,优于中、低剂量组。结论:虫草多糖能够预防大鼠庆大霉素诱发的急性肾衰,改善肾功能。

化学酶法制备D-苯甘氨酸

对化学酶法制备 D-苯甘氨酸工艺进行了研究。利用荧光假单胞菌 980 6作为酶源 ,将 DL-苯海因生物转化为 N-氨基甲酰 -D-苯甘氨酸 ,后者与亚硝酸钠反应生成 D-苯甘氨酸 ,收率为 4 7.5%

桔青霉对头孢呋辛酯的代谢转化

利用微生物转化的方法 ,选取桔青霉 (Penicilliumcitrinum)为转化菌株 ,对头孢呋辛酯转化产率等方面进行了研究。采用枯草芽孢杆菌 [CMCC(B) 63 50 1]作为检测菌株检测转化产物 ,结果表明 ,桔青霉能产生稳定的具抗菌活性的转化产物 ,且重现性好 ,转化产物的平均产率 71.9%。