单链抗体JZC00联合2-脱氧葡萄糖的抗肿瘤活性

探讨单链抗体JZC00和糖酵解抑制剂2-脱氧葡萄糖(2-deoxyglucose,2-DG)的联合用药对小鼠非小细胞肺癌细胞LLC、小鼠乳腺癌细胞4T1的抗肿瘤作用。利用大肠埃希菌表达并纯化单链抗体,用SDS-PAGE和Western blot法鉴定JZC00;MTT法分析JZC00/2-DG联用组对肿瘤细胞体外增殖的抑制作用;葡萄糖和乳酸测定试剂盒测定培养基中葡萄糖和乳酸浓度,并计算肿瘤细胞葡萄糖摄取抑制率及乳酸释放抑制率;给药周期为15 d,给药同周期内测量肿瘤质量及体积。结果显示:经原核表达的JZC00相对分子质量正确,在体外能够抑制肿瘤细胞的增殖;JZC00及2-DG单独给药均能够抑制肿瘤细胞糖酵解,且JZC00/2-DG联合使用能够协同抑制糖酵解,当在体外模拟缺氧环境时JZC00抑制作用下降,加入2-DG后能够逆转其对糖酵解的抑制作用;两组体内模型显示与JZC00单药组相比,联合用药组抑瘤作用显著提高,2-DG能够提高抗血管生成抗体抑瘤效果,提示其联合在治疗实体瘤方面具有潜在价值。

双特异性抗体mAb04-MICA对人白血病细胞K562的体内外抗肿瘤活性

探讨双特异性抗体m Ab04-MICA对人白血病细胞K562的体内外抗肿瘤活性。前期研究显示,m Ab04-MICA具有抗血管生成和重塑肿瘤微环境中的免疫监视作用,体外对K562细胞具有良好的抗肿瘤作用。通过ELISA鉴定m Ab04-MICA对抗原VEFGR2和受体NKG2D的亲和力;CCK8法分析m Ab04-MICA对K562的体外增殖抑制作用;采用流式细胞术分析m Ab04-MICA对鼠源VEGFR2的交叉反应能力;建立K562皮下荷瘤BALB/c裸鼠模型,通过测定瘤体积、称量瘤重、观测荷瘤鼠生存期等方法检测目的抗体的体内抗肿瘤活性;免疫组化方法测定其对肿瘤组织本身及组织内新生血管生成的影响。结果显示:m Ab04-MICA对VEGFR2和NKG2D都具有良好的亲和力,并且在体外能够特异性地抑制VEGF诱导的K562细胞的增殖;m Ab04-MICA与鼠源VEGFR2具有较高的结合能力;相同给药剂量下,双特异性抗体抑瘤作用显著优于母体单抗,且能延长荷瘤裸鼠生存期,其中Ki-67、p-VEGFR2、VEGF及CD34的表达量显著降低,提示m Ab04-MICA可通过特异性地阻碍瘤组织VEGFR2的磷酸化而控制瘤体新生血管的生成,在治疗白血病方面具有潜在的应用价值。

基于实验设计法针对抗VEGFR2-MICA融合蛋白进行发酵工艺优化（英文）

中国仓鼠卵巢细胞(CHO)是目前生产治疗性抗体的主要表达系统,该细胞的培养和抗体表达与培养条件密切相关。本实验室构建出了一种靶向VEGFR2单抗融合MICA的融合蛋白,具有良好的抗肿瘤活性,但是抗体产量较低,限制了该抗体的进一步研发和应用。为了探究适合该抗体的最佳发酵体系,本研究通过Minitab16.0正交法设计多种流加培养方式,探索了4种培养基、流加物以及培养条件对发酵细胞密度和抗体产量的影响,并优化出最佳的发酵方式,即以1×106cells/mL接种密度将细胞接种于商业培养基CDM4PerM Ab,每2 d加入12%(V/V)的流加物Boost2+Boost5。为保持抗体的稳定性和质量一致性,将此发酵方式扩大至3 L发酵罐以提高抗体的批次产量。最终抗体产量可达54.45 mg/L,并且Western blot实验结果验证了融合抗体装配的正确性。MTT实验结果表明JZB01能有效抑制HUVEC、MDA-MB-231和K562的细胞增殖,具有显著的抗血管生成作用以及比母体单抗更有效的抗肿瘤活性。综上,本研究开发出了一种有利于抗体生产的发酵工艺,能够满足实验室抗体研发需求。本实验室将进一步扩大该工艺适用的发酵规模,以满足抗体的临床前研究以及后续工业化生产。

B细胞成熟抗原的抗肿瘤免疫治疗研究进展

B细胞表面成熟抗原(B-cell maturation antigen,BCMA)是一种浆细胞选择性的蛋白,最早发现于成熟的B淋巴细胞表面,在其他组织细胞中几乎不表达。其在恶性增殖的B淋巴细胞(例如骨髓瘤细胞、白血病细胞)中高度表达,同时其介导的下游信号通路,对细胞的存活、增殖、转移和耐药中起着关键性的作用,这些特性使得它成为免疫治疗多发性骨髓瘤的一个靶点。近年来,针对BCMA的新型肿瘤免疫治疗方法日趋成熟,主要包括CAR-T(Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy)疗法、双特异性抗体(Bispecific antibody,BsAb)和抗体药物偶联物(Antibody-drug coupling,ADC)3大阵营,且目前已有4类药物进入临床Ⅰ期。从已经公开的临床前及临床Ⅰ期试验的结果来看,针对BCMA的靶向药物能够有效的靶向肿瘤细胞,并通过免疫细胞或小分子的细胞毒作用杀伤肿瘤细胞,药效显著,不良反应可控,是一个极具发展潜力的肿瘤靶向治疗新靶点。该文就BCMA的生物学功能、信号通路以及以其为靶点的肿瘤免疫治疗药物进行综述。