微生物疫苗在1型糖尿病中的应用

1型糖尿病(T1DM)是由抗原特异性T淋巴细胞对β细胞靶向破坏,引起胰岛素绝对缺乏而导致的自身免疫性疾病,患者需终身进行胰岛素治疗,其发病机制尚不完全清楚,但多项数据显示感染性疾病发病率的下降伴随着过敏和自身免疫疾病发病率的上升,因而推测环境因素在T1DM的发生中起到重要作用。现已有多种细菌、寄生虫、病毒及其成分在动物模型中被证明可以预防T1DM,因此,通过微生物疫苗进行早期免疫刺激,进而诱导自身免疫耐受,有望成为预防T1DM安全有效的新方法。本文对临床和动物研究中的1型糖尿病微生物疫苗进行综述,主要从微生物的灭活疫苗、减毒活疫苗、亚单位疫苗、核酸疫苗和活载体疫苗进行概述,并讨论了各类疫苗可能的作用机制。

新型戊二酸胆固醇单酯脂质体的制备及其与H22细胞疫苗的耦联

制备能够与细胞疫苗耦联的新型戊二酸胆固醇单酯脂质体,用作疫苗的载体和佐剂,并研究其贮存稳定性及其最佳耦联条件。以戊二酸酐和胆固醇为原料合成戊二酸胆固醇单酯,再以其为原料与磷脂制备戊二酸胆固醇单酯脂质体,采用薄膜分散法制备脂质体,以粒径及多分散指数为指标优化脂质体处方,制得粒径在150-200 nm之间的戊二酸胆固醇单酯脂质体。对脂质体的稳定性和贮存条件进行研究,结果表明冻干脂质体在-20℃可至少保存12个月。以耦联率为指标,对影响戊二酸胆固醇单酯脂质体与H22细胞疫苗耦联的相关因素进行优化,试验结果表明,复溶后加入EDC活化10 min,再加入H22细胞疫苗和S-NHS孵育3 h,得到耦联率为81.4%的H22细胞疫苗-脂质体耦联物。

人DNase Ⅰ的表达、纯化及降解NETs活性研究

为获得纯度较高的人脱氧核糖核酸酶Ⅰ(DNase Ⅰ)以研究其对中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellulartraps,NETs)的降解作用,构建基因工程表达菌E. coli Rosetta (DE3)/p ET32a-His-DNase Ⅰ,乳糖诱导表达,经镍柱亲和纯化获得融合蛋白His-DNase Ⅰ。提取小鼠中性粒细胞,用佛波酯PMA刺激形成NETs,Sytox Green及荧光显微镜检测融合蛋白对NETs的降解活性。结果表明,成功构建人DNase Ⅰ基因克隆并在原核细胞中实现高效表达,纯化的His-DNase Ⅰ具备较高的核酸酶活性。本研究为进一步探究DNase Ⅰ的临床应用奠定了理论基础。