酶法提取人工养殖鲟鱼皮中胶原蛋白的工艺研究

胶原蛋白是一种具有生物功能的结构蛋白质,广泛应用于医药、化妆品和食品工业中。研究人工养殖鲟鱼皮胶原蛋白的提取工艺。采用酶法提取胶原蛋白,对提取胶原蛋白过程中酶的选择,酶的浓度,提取温度和提取时间对胶原蛋白提取率的影响进行详细的研究。正交试验表明,酶提鲟鱼皮中胶原蛋白的最佳工艺为:以胃蛋白酶—0.5mol/L乙酸作为提取剂,酶量4000U/g,提取温度37℃,提取时间为6h,固液比为1∶4;在此条件下得胶原蛋白的提取率为70.15%。同时,测定人工养殖的鲟鱼皮胶原蛋白的最大紫外吸收波长为235nm。

食品中抗生素耐药基因研究进展

随着养殖业进入规模化阶段,抗生素在养殖业中被广泛使用。尽管抗生素本身在动物体内积累量很低,但由抗生素诱导产生的耐药基因会残留在肉制品等食品中,并通过食物链转移到人体。结合最新文献,对食品中抗生素耐药基因的产生和转移进行综述,阐明抗生素耐药基因古已有之,大致可分为固有耐药基因和获得性耐药基因,固有耐药基因一般通过代际遗传在同一种属细菌间传递,具有较小的传播风险;而获得性耐药基因的传播与抗生素或环境压力有关,可以在不同种属细菌间传播,推定其是食品中抗生素耐药基因转移和传播的主要原因;还介绍了食品中抗生素耐药基因的检验方法和原理,提出建立食品中残留抗生素耐药基因检测规范体系的必要性。

液相色谱-串联质谱法检测人血浆中碘帕醇

目的建立一种稳定的检测人血浆碘帕醇的液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS),并对该方法进行性能评价。方法以氘代同位素作为内标,人血浆样品经直接沉淀法前处理后进样,用XSelect^(TM) HSS PFP色谱柱进行分离,用含0.1%甲酸-5mmol/L九氟戊酸-10%乙腈的水溶液等度洗脱;正离子电喷雾离子化扫描检测,多反应监测(MRM)扫描分析,建立检测血浆碘帕醇的LC-MS/MS方法。根据CLSI EP10-A和CLSI C62-A,评价该方法的线性范围、正确度、精密度、选择性、基质效应、稳定性。结果 LC-MS/MS检测血浆碘帕醇的线性范围为1～1 000μgI/mL(以含碘量计算);低、中、高浓度(3、50、800μgI/mL)血浆质控品检测结果与理论靶值的偏移为-6.1%～7.5%,重复性以不精密度表示,CV<6.6%(4.6%～6.6%),期间精密度CV<8.5%(6.6%～8.5%),方法回收率为92.5%～95.9%,基质效应为88.8%～95.2%;方法选择性良好,溶血和脂血因素均不影响检测结果。血浆样品在室温下放置最好不要超过48 h,在-80℃下反复冻融不超过2次,经前处理后的血浆样品4℃自动进样器中放置不超过72 h,碘帕醇可稳定检测。结论建立并评价了一种可靠的检测人血浆碘帕醇的LC-MS/MS方法。

奶山羊乳腺瞬时表达溶栓药物瑞替普酶-reteplase(rPA)的研究

从人的黑素瘤细胞提取总RNA,进行RT-PCR,克隆了组织纤维溶酶原激活剂(tPA)基因,对其缺失突变,进一步克隆了溶栓药物瑞替普酶-reteplase(rPA)基因;以羊的β-乳球蛋白基因(BLG)作为调控序列,构建了瑞替普酶的乳腺表达载体BrPA。注射BrPA到乳腺动脉,收集乳汁进行鉴定和检测,体外溶栓活性分析发现瑞替普酶在羊的乳腺中获得了表达,最高表达量为8.52 mg/L,为转基因动物乳腺表达载体构件的检测建立了合理的方法,也为下一步制备转基因奶山羊乳腺生物反应器奠定了基础;该研究提示,对于临床给药剂量小,而价格昂贵的药物,如细胞因子类,也许可以用这种乳腺瞬时表达系统进行生产。

头孢替唑钠合成路线图解

头孢替唑钠2002年开始在我国应用,用量逐年增长,目前国内生产厂家较少。头孢替唑钠的分子结构中,头孢烯酸的7_氨基部分连接的为1H_1_四氮唑乙酰基(A部分),3_亚甲基部分连接的为1,3,4_噻二唑_2_硫醚基(B部分),我们根据其A、B部分在合成过程中引入的先后顺序,对其合成路线进行了图解。

泥螺提取物抗炎与抗氧化活性评价研究

目的研究泥螺提取物的抗炎与抗氧化活性。方法采用小鼠棉球肉芽肿炎症模型评价泥螺提取物的抗炎活性,研究泥螺提取物对LPS刺激巨噬细胞释放炎症因子(IL-1β、TNF?α、NO)的影响,研究泥螺提取物对H2O2诱导内皮细胞损伤的保护作用,测定其中LDH、SOD、CAT等相关酶的活性。结果泥螺提取物能够显著抑制小鼠肉芽肿的形成,能够显著降低LPS刺激巨噬细胞后IL-1β、TNF?α、NO的释放,对H2O2损伤的内皮细胞具有保护作用,能够显著提高SOD、CAT的活性。结论泥螺提取物具有一定的抗炎与抗氧化活性。

Nr(Never ripe)番茄农艺性状的研究

通过温室、田间两种番茄种植试验和果实耐贮性试验,对成熟突变材料Nr番茄的农艺性状进行了研究。结果表明:Nr番茄较其野生亲本发芽出苗率低,生育期较长,耐衰老,坐果率高,结果多,适合于大田种植。其果实黄色长圆,品质一般,口感较酸,耐贮藏。

新的抗凝血三肽及其改造物的合成和生物活性

目的获得抗凝血活性更强的多肽。方法利用Wang树脂通过固相合成的方法,在AAP的C末端上添加不同疏水性的氨基酸得到(Pyr-Asn-Trp-Leu,Pyr-Asn-Trp-Phe,Pyr-Asn-Trp-Tyr,Pyr-Asn-Trp-Ser),用95%TFA将肽链从树脂上切割下来。将所有的合成肽进行抗血小板聚集实验、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)的测定。结果将经高效液相纯化的多肽进行质谱鉴定,结果显示相对分子质量与预期的一致。结论在AAP的C端添加上疏水性越强的氨基酸,其抗血小板聚集的活性越强,同样的情况出现在APTT实验中。

特异性抑制环氧合酶-2表达的siRNA筛选

目的筛选有效抑制环氧合酶-2(COX-2)表达的小干扰RNA(siRNA)序列,并观察其对细胞中COX-2表达的抑制作用。方法设计针对COX-2的3对(siRNA24,siRNA954,siRNA1553)及一条FAM荧光标记的阴性对照siRNA(称为HK)。在Lipofectamine2000介导下转染人胃癌细胞系SGC-7901。同时采用RT-PCR法和Western blot方法检测细胞中COX-2含量,以β-actin蛋白做内参照。结果当Lipofectamine2000浓度在50μmol.L 1时能实现最大转染效果。与其他各组相比,转染了siRNA954的人胃癌细胞中,编码COX-2 mRNA的含量明显减少(P<0.01)。结论成功设计了针对COX-2的siRNA,并从中筛选出siRNA954,能够有效抑制人胃癌细胞COX-2表达,为肿瘤治疗及其临床应用奠定了基础。

薄层色谱-生物自显影联用检测残留抗生素的研究

建立利用薄层色谱-生物自显影联用原位技术检测农副产品中的抗生素残留方法。采用饱和的EDTA-2Na溶液活化的硅胶薄层层析板,展开溶剂系统为乙酸乙酯-氯仿-甲醇-氨水(40∶40∶20∶5),于紫外灯下记录薄层色谱图,以发光细菌费氏弧菌(V.fi scheri)为检定菌,薄层板表面均匀涂布处于最强发光周期的费氏弧菌(V.fi scheri)发酵液,放入生物发光检测仪中,拍照记录。结果表明,100份样品中的72份被检出有残留抗菌物质存在,并对残留抗生素进行初步推定。该方法操作简便、快捷、结果准确,可进一步研究用于抗生素残留定性与定量检测。

苦丁茶冬青皂苷对ApoE基因缺陷小鼠高胆固醇血症致肾脏损害的保护作用

目的:探讨苦丁茶冬青(Ilex kudingcha C. J. Tseng)皂苷对高胆固醇血症致肾脏损害的保护作用及其机制。方法:高胆固醇饲料喂养ApoE基因缺陷小鼠,建立极高胆固醇模型,以阿托伐他汀为对照,观察苦丁茶皂苷3种剂量(75,150,300 mg.kg-1.d-1)对小鼠血浆胆固醇、肾脏病理学改变和对过氧化产物的影响。结果:苦丁茶皂苷可降低ApoE基因缺陷小鼠血浆胆固醇,减轻高胆固醇血症导致的肾小球系膜病变和肾基质增生,同时能降低血中和肾脏中的过氧化产物浓度。结论:苦丁茶皂苷对ApoE基因缺陷小鼠脂质性肾损害的保护作用可能与其在降低胆固醇基础上减轻脂质过氧化反应有关。