UPLC-MS/MS法分析β淀粉样蛋白中Asp残基的外消旋化

目的:建立β淀粉样蛋白中Asp外消旋化的LC-MS/MS分析方法。方法:采用胰蛋白酶和Glu-C酶两步酶解β淀粉样蛋白,酶解产物LC-MS/MS分析的色谱条件:分离柱为InfinityLab Poroshell 120 EC-C18色谱柱(2.7μm,3.0×150 mm Agilent),流动相A为5%乙腈-0.1%甲酸水,流动相B为75%乙腈-水,梯度洗脱(0~30 min,0~28%B;30~30.01 min,28%~100%B;30.01~35 min,100%~100%B;35.0~35.01 min,100%~0%B;35.01~40 min,0%B),流速为0.3 mL/min。质谱条件:采用电喷雾离子源及正离子多反应监测模式(SRM)定量。结果:在L型多肽存在下,D型多肽的质量浓度在1~250 ng/mL内,其峰面积与多肽的质量浓度之间线性良好(r>0.999),最低定量限(LLOQ)为1 ng/mL;LLOQ、低(LQC)、中(MQC)、高浓度(HQC)日内和日间精密度RSD值均小于15%,加样回收率为85.3%~107.3%。建立的方法对D/(D+L)型淀粉样蛋白为2%~50%的混合样本中Asp1,Asp23外消旋化测定结果准确,准确度在95.35%~117%之间。联合胰蛋白酶与Glu-C成功鉴定了淀粉样蛋白中Asp7残基的外消旋化。结论:所建立的方法可用于淀粉样蛋白中Asp残基外消旋化的分析,该方法操作简便,结果准确,灵敏度高。

蛋白质中氨基酸外消旋化的研究进展

蛋白质结构中L-氨基酸可通过外消旋化转化为D-氨基酸,蛋白质中氨基酸的外消旋化可影响蛋白质的空间结构和功能,并证实与一些疾病的发生相关。随着分析仪器技术的不断发展,蛋白质中氨基酸外消旋化分析方法及检测技术也在不断地更新。本文综述了蛋白质中氨基酸外消旋化与疾病的关系、影响外消旋化的因素以及氨基酸外消旋化的检测方法,并对蛋白质中氨基酸外消旋化的研究方向进行了展望。

多肽色谱保留预测及其在蛋白质组学中的应用

基于串联质谱的蛋白质组学分析方法往往依赖于实际谱图和理论谱图的匹配打分,而大量共洗脱肽的干扰会降低多肽和蛋白的鉴定及定量的准确性。多肽保留时间预测可将多肽色谱保留行为转变为稳定独立的特征时间属性,作为多肽鉴定的辅助和验证指标,改善多肽鉴定的准确性。复杂体系中多肽色谱保留预测也对优化蛋白质组学测定条件、提高数据非依赖采集中质谱数据的检出率和重复性具有重要意义。本文针对未修饰多肽及修饰多肽常用的色谱保留预测方法(包括基于标准化索引、多肽分子模型、氨基酸残基参数和机器学习等)进行了综述,总结各种方法的原理及其特点,并对其在蛋白质组学中的应用及发展方向进行了展望。

作用于polo-box结构域的拟肽类polo样激酶1抑制剂的设计、合成及其生物活性

为寻找新型的作用于polo-box结构域的拟肽类polo样激酶1(Plk1 PBD)抑制剂,将先导化合物(PLHSpT)结构中的磷酸基团替换为羧基,并采用非天然氨基酸进一步改造与优化,设计合成了一系列不含磷酸基团的拟肽类Plk1 PBD抑制剂(化合物7a^7u)。设计合成的21个拟肽类化合物均对Plk1 PBD抑制作用较强,其中化合物7l高选择性地抑制Plk1 PBD,IC50为0.285μmol/L,体外对HeLa肿瘤细胞株的生长抑制作用优于含磷酸基团的化合物。经过非天然氨基酸修饰和改造,化合物在大鼠血浆中的稳定性得到了提高。实验证明,用羧基替换磷酸基团并进行肽链的结构改造,可以获得成药性更好的选择性Plk1 PBD抑制剂。

蛋白质中氨基酸外消旋化修饰的非特定位点分析方法研究进展

生物体内蛋白质的D-氨基酸残基主要通过外消旋化产生,而外消旋化修饰也被证明与白内障等疾病的发生和发展具有相关性。常见的蛋白质外消旋化修饰分析方法包括蛋白质整体外消旋化修饰分析、特定位点外消旋化修饰分析和非特定位点外消旋化修饰分析等几种类型。非特定位点外消旋化修饰分析对于全面探究体内外蛋白质中外消旋化修饰规律、评价外消旋化修饰对蛋白质功能的影响,以及阐明重大疾病与蛋白质外消旋化的关系均具有重要意义。综述了近年来非特定位点外消旋化修饰分析方法的研究进展,将其与蛋白质整体外消旋化修饰分析方法、特定位点外消旋化修饰分析方法进行对比,并对非特定位点外消旋化分析方法进行了展望。

衍生化LC-MS/MS法测定大鼠血浆中内源性谷胱甘肽的含量

建立一种巯基衍生化LC-MS/MS法测定大鼠血浆中内源性谷胱甘肽含量的方法。血浆样品经衍生化处理后采用电喷雾离子源(ESI)-三重四极杆质谱仪于正离子模式下进行选择反应检测(SRM)。色谱柱为Zorbax HILIC PLUS(4.6 mm×100 mm,3.5μm);流动相为乙腈-水(含0.1%甲酸)(75∶25);流速为1 m L/min;柱温为35℃。甘氨酰酪氨酸作为内标物,4-(N-马来酰亚胺)苯基三甲基碘化铵(MPTA)作为衍生化试剂。方法学验证结果表明:衍生化后的谷胱甘肽在3.000~2 000 ng/m L范围内线性良好,r=0.997 1,最终定量下限约为10 pmol/L。准确度、提取回收率和基质效应均符合生物样本分析的要求。该方法对生物体内谷胱甘肽准确的定量、定性分析,以及其存在状态的正确评价有着重要的临床意义。

表面多孔颗粒填料在手性拆分与生物大分子色谱分析中的应用研究进展

新型固定相填料的研发一直是液相色谱实现高效快速分离的基础。表面多孔颗粒填料柱凭借着在非高压系统(<40MPa)下依然可高速高效分离的特性,近年来在手性拆分及生物大分子色谱分析领域崭露头角。从表面多孔颗粒填料的结构特性,探讨了其用于色谱分析的优势和局限性,并综述其在手性拆分和多肽及蛋白质类生物大分子色谱分析领域的应用研究进展。

壳聚糖复合创面敷料研究进展

壳聚糖因具有止血、良好的生物相容性和生物降解性、诱导细胞增殖和组织修复以及抗菌等生物活性而被广泛用于创面治疗。虽然壳聚糖具有作为生物敷料的优势,但机械强度低,抗菌效果不稳定,促创面愈合时间长等缺陷限制了它的临床应用。壳聚糖复合创面敷料通过在壳聚糖基质上负载或交联其他材料或药物,可提高敷料的机械强度,加速细胞增殖和伤口愈合,增强抗菌活性。文章针对近几年的壳聚糖及其衍生物的复合型创面敷料表现的优势特性开展了综述,并对其进一步研究方向也进行了展望。