霍乱弧菌毒力表达调控基因toxR缺失株的构建及其功能的研究

目的 通过构建霍乱弧菌toxR基因缺失株来研究toxR基因对霍乱弧菌减毒菌株IEM10 1和高产毒株 5 6 9B毒力表达的调控作用。方法 采用自杀性质粒和接合转移技术 ,将 2个中间含有四环素基因的toxR基因分别与霍乱弧菌减毒株IEM10 1和高产毒株 5 6 9B染色体toxR基因重组 ,从而获得toxR基因缺失株IEM10 1 4和 5 6 9B 43 ,并对 2个toxR基因缺失株和其原出发菌株的霍乱肠毒素的产率和主要外膜蛋白图谱进行比较。结果 采用GM1 ELISA检测受测菌CT基因表达 ,toxR基因缺失株 5 6 9B 43的P/N值为 1 82 ,而其原出发菌株 5 6 9B的P/N为 4 5 2 ,而IEM10 1和其toxR基因缺失株的P/N值均低于 2。采用SDS PAGE对受试菌外膜蛋白进行分析 ,toxR基因缺失株 5 6 9B和IEM10 1的外膜蛋白图谱相比 ,均多出 2条相对分子质量 (Mr)为 40× 10 3 和 43× 10 3 外膜蛋白区带。结论 toxR蛋白是霍乱肠毒素基因ctx表达的正调控因子 ,是霍乱弧菌主要外膜蛋白 (Mr 为 40× 10 3 和43× 10 3)编码基因的负调控因子。