电感耦合等离子体光谱和质谱法用于饮水中多元素分析的研究

将电感耦合等离子体光谱和质谱相结合 ,建立了水中 2 3种元素 (Ca、Mg、Fe、Mn、B、Cr、Si、Zn、Be、Al、V、Co、Ni、Cu、As、Se、Mo、Ag、Cd、Sb、Ba、Tl、Pb)测定的新方法 ,研究了各元素的检出限、精密度、干扰校正及线性范围。方法灵敏、快速、简便 ,样品无需冗长的预处理 ,可直接进行多元素分析 ,为水质分析提供了重要手段。加标回收实验证明 ,回收率介于 94.5 %～ 116 .2 %。经水质标准物质验证及国标法比对 ,表明方法准确可靠。已用于深圳市饮水水质的调查 。

肺癌患者O^6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶基因多态性研究

目的 检测人类O6 甲基鸟嘌呤 DNA甲基转移酶 (MGMT)基因 5个外显子的单核苷酸多态 (SNPs)及其与肺癌的关系。方法 采用聚合酶链式反应 (PCR) 单链构像多态性 (SSCP) DNA直接测序法对 10 0例正常人和 6 0例肺癌患者外周血白细胞进行MGMT基因SNPs研究。结果 在正常人群和肺癌患者中检测到MGMT基因的第 3、4外显子上存在着SNPs ,即第 3外显子上第 2 5 0位碱基C被T所取代 ,导致错义突变 (CTTTTT ,使Leu84Phe) ;第 4外显子上第 2 80位碱基C被T取代 ,导致同义突变 (TTCTTT ,均编码Phe)。这两个位点的SNPs在两组人群间的检出率差异无显著性(P >0 0 5 )。结论 MGMT基因第 3、4外显子上存在着SNPs ,其多态改变与肺癌形成的关系较弱。

完整弓形虫P35重组蛋白IgM-酶联免疫吸附测定法检测弓形虫急性感染

为利用重组的完整弓形虫表面抗原P35 GST蛋白对弓形虫感染进行血清学诊断 ,构建了可表达P35 GST的JM10 9细胞株 .采用亲和层析对融合蛋白进行分离和纯化 ,用SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和蛋白质印迹 (Westernblot)分析所表达的蛋白质 ,并用纯化的重组蛋白进行IgM 酶联免疫吸附测定法 (IgM ELISA)检测不同病人血清中的抗 P35抗体 .SDS PAGE分析发现P35 GST重组蛋白的大小约 6 0ku ,为一亲水性蛋白 ,蛋白质印迹分析表明该蛋白与弓形虫阳性感染病人的血清有特异性反应 .利用P35 GST为抗原 ,对 6 0例血清进行IgM ELISA分析 ,发现P35 GST可明显区分近期感染和既往感染 ,在弓形虫的诊断上有很大的应用前景 .

镍致DNA链断裂及对聚腺苷二磷酸核糖聚酶活性的影响

目的 探讨镍所致DNA链断裂及其所诱导的聚腺苷二磷酸核糖聚酶 (PARP)之间的关系。方法 培养猴肾Vero细胞 ,分别用 0、12 5、2 5 0、5 0 0、10 0 0 μmol L的醋酸镍染毒 2 5、6和 12h ;苔盼蓝计数法检测细胞存活率 ,单细胞凝胶电泳法检测DNA链断裂 ,3H掺入法检测PARP活性。结果 镍浓度与DNA链断裂程度之间存在剂量 效应和时间 效应关系 ;镍也可诱导PARP活性显著升高 ,但在高浓度和长时间染毒时 ,其活性不再增加。结论 镍所致的DNA链断裂与其诱导的PARP活性之间存在特殊关系 ,这可能与镍的致癌性相关。

ABO血型及其和吸烟的交互作用与肺癌易感性

目的探讨 ABO血型及其与吸烟交互作用后与肺癌的相关性。方法肺癌病例 143例 ,年龄、性别匹配的对照 12 1例 ;血清学方法检测血型 ,面访或查阅病历调查 ,分层分析血型与吸烟的交互作用。结果单 B型血者与肺癌无显著性联系 ,单吸烟者则联系显著 ,OR值 2 .0 9,同时具有 B型血并吸烟 ,则联系非常显著 ,其 OR值达 5 .88。结论 B型血是肺癌的可能易感标志 。

hMSH2基因cDNA保守区域的T载体克隆及序列分析

目的 构建含限制性内切酶位点PstⅠ、KpnⅠ的hMSH2基因cDNA保守区域的pGEM T S载体 ,比较分析序列的变化 ,为以后的毒理学研究提供实验材料。方法 从人胚肺成纤维细胞HLF中抽提总RNA进行RT PCR扩增 ,直接与T载体连接后转化大肠杆菌DH5α ,用蓝 白斑试验筛选阳性克隆 ,抽提质粒进行酶切鉴定 ,再行序列分析。结果 经RT PCR获得 6 31bp含限制性内切酶位点的阳性产物 ,T载体克隆、酶切鉴定及序列分析后证实 ,克隆片段与genbank中该基因的序列同源性为 99 5 %。结论 本文成功地构建了含hMSH2基因cDNA保守区域的T载体克隆 ,该克隆可为DNA错配修复缺陷与致癌关系研究提供工具。

线粒体DNA氧化损伤热点的形成及其修复速率的比较

本研究旨在探讨线粒体DNA氧化损伤热点的形成是否与该点DNA修复速率慢有关 .BRL 3A细胞暴露于 5 0mmol·L- 1过氧化氢 (H2 O2 ) 30min后 ,分别于 0 ,1,4及 2 4h收获细胞 ,应用连接介导聚合酶链反应分析线粒体DNA氧化损伤热点的修复百分率并与线粒体DNA氧化损伤的总修复百分率比较 ,通过狭缝印迹法 ,比较了各时间点细胞内p5 3/线粒体DNA比率来验证其修复的可靠性 .结果表明 :在 4及2 4h ,热点的修复速率分别为 5 .2 %和 4 2 .1% .而线粒体DNA的总修复百分率分别为 76 .9%和 84 .1% ,后者与前者相比 ,其修复速率快 1～ 14倍左右 .应用狭缝印迹发现各时间点细胞内p5 3/线粒体DNA比率无明显变化 .因此 ,线粒体DNA氧化损伤热点的形成与其修复速率较慢有关 .

氯化镍在体内诱导大鼠DNA-蛋白质交联

目的 了解NiCl2 在体内对大鼠细胞的DNA产生何种损伤以及与聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)活性的关系。方法 以 10 ,2 0 ,30mg·kg- 1NiCl2 ip给大鼠进行染毒 ,2 4h后处死动物 ,分离外周血淋巴细胞和肺细胞 ,应用单细胞凝胶电泳 (彗星试验 ) ,检测DNA单链、双链断裂和DNA 蛋白质交联 ,同时用 [3H]NAD渗透法检测PARP活性的变化。结果 外周血淋巴细胞和肺细胞均没有出现明显的DNA单链和双链断裂。所有剂量组的外周血淋巴细胞都出现了不同程度的DNA 蛋白质交联 ,交联率为 14 %～ 36 %,但没有剂量反应关系。 2 0mg·kg- 1NiCl2 也能诱导肺细胞DNA 蛋白质交联 ,交联率达 30 %。所有剂量组的NiCl2 均能明显抑制大鼠外周血淋巴细胞PARP酶的活性 ,酶活性下降至对照组的 38%～ 5 7%,但没有表现出剂量反应关系。大鼠肺细胞中该酶活性不受NiCl2 染毒的影响。结论 NiCl2 在体内环境下能诱导大鼠外周血淋巴细胞和肺细胞的DNA损伤 ,主要是引起DNA 蛋白质交联 ,而不直接造成DNA链的断裂 ;NiCl2 还能明显抑制外周血淋巴细胞的PARP酶活性 ,进而可能影响DNA修复。

O^6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶基因多态性与肿瘤易感性的关系

目的 :探讨中国南方汉族人群O6 甲基鸟嘌呤 DNA甲基转移酶 (MGMT)基因 5个外显子的多态性与肿瘤易感性的关系。方法 :采用聚合酶链式反应 (PCR) 单链构象多态性 (SSCP) DNA直接测序法对 10 0例正常人和 88例肿瘤患者外周血白细胞进行MGMT基因多态性研究。结果 :正常人群和肿瘤患者第 3外显子第 84位密码子的第 1个碱基C被T所取代 ,导致错义突变 (CTT→TTT) ,氨基酸由亮氨酸 (Leu)变成了苯丙氨酸 (Phe) ;第 4外显子第 94位密码子的第 3个碱基C被T所取代 ,导致同义突变 (TTC→TTT ,均编码Phe)。这 2个位点的多态性在 2组人群中的检出率差异不存在统计学意义 (P >0 .0 5 )。同时在肿瘤患者中还检测到MGMT基因第 5外显子第 2 0 0位密码子的第 2个碱基G被C取代 ,即GGC→GCC ,所编码的氨基酸由甘氨酸变为缬氨酸 ,这一多态不存在于正常对照中。结论 :MGMT基因第 3、4、5外显子上存在着多态性 ,其中第 3、4外显子的多态改变与肿瘤形成的关系较弱 ,而第 5外显子的多态仅见于肿瘤患者 ,可能与肿瘤的形成有关。

广东汉族人群核苷酸切割修复基因XPF exon4的多态性分析

目的探讨人类核苷酸切割修复基因XPF第4外显子在广东地区汉族人群中的多态性及其分布特点。方法结合聚合酶链式反应 (PCR) -单链构象多态性分析(SingleStrandConformationPolymorphism,SSCP) -异源双链杂交分析 (HateroduplexAnalysis,HA)等方法和DNA测序法检测170例汉族人外周血中的XPF基因exon4 ,以了解该外显子的多态位点及其分布。结果PCR -SSCP -HA分析发现XPFexon4存在两种异常构象带型 ,经测序发现两个多态位点 :一个是 g9975C缺失 (移码突变 ) ,170份样本中出现9例 (5.29 % ) ;另一个多态位点是 g10024G→C(Met218Ile) ,该型出现15例(8.82 % )。结论XPFexon4上至少存在两个多态位点 ,它们的发生频率可能用于间接评价DNA修复效率、肿瘤易患性和基因组的稳定性。

单细胞凝胶电泳法分析指标及检测DNA交联的标准断裂剂的研究

目的 寻求单细胞凝胶电泳计算机成像与分析系统中的有效分析指标 ,为H2 O2 在 1℃条件下作为检测DNA交联的标准DNA断裂剂提供依据。方法 常规培养Vero细胞 ,消化后悬浮在PBS中 ,H2 O2 染毒 ,分别在 37℃和 1℃条件下孵育 1h ,常规单细胞凝胶电泳 ,专用软件分析其图像。结果 H2 O2 的染毒浓度在 2 5 0 0 μmol/L以下时 ,尾长、尾面积、尾矩和尾积分等指标均有剂量 -效应关系 (T =37℃时 ,r分别为 0 .6 80 ,0 .72 5 ,0 .796 ,0 .798;T =1℃时 ,r分别为 0 .6 85 ,0 .717,0 .6 2 2 ,0 .714,P均 <0 .0 1)。在H2 O2 浓度较高的另一实验中 ,当H2 O2 为 2～ 7μmol/L时 ,仅尾矩和尾积分间存在这种关系 ;H2 O2 各剂量 (2 0、10 0、5 0 0、2 5 0 0 μmol/L)在 37℃时对DNA的损伤程度均明显高于1℃时。两种条件下上述 4个指标都存在剂量 -效应关系。结论 由该系统得到的尾矩和尾积分所反映的DNA损伤信息更准确、更全面、适用范围更广 ,但尾长可用作较初步的研究 ;H2 O2 在

镍诱导pSP189质粒的非定标性突变及其与DNA损伤的关系

目的 检测醋酸镍诱导pSP189质粒在Vero细胞中的非定标性突变及其DNA损伤 ,分析其间的关系 ,为探讨镍的致癌机制提供线索。方法 醋酸镍染毒Vero细胞 2 5h ,再常规培养 2 4h后 ,转染野生型质粒pSP189,获取经该哺乳动物细胞复制过的质粒 ,转化其进入大肠杆菌MBM70 70 ,通过特殊培养基筛选突变子 ;用改良的单细胞凝胶电泳法检测开始转染时Vero细胞的DNA损伤。结果 醋酸镍浓度为 2 5 0 μmol/L和 10 0 0 μmol/L剂量组诱导出了非定标性突变 ,其突变率分别为 9 46×10 4 和 15 0 1× 10 4 ,是对照组的 4 41和 6 98倍 ,各剂量组的DNA链断裂、DNA 蛋白交联和DNA DNA交联均显著高于对照组 ,但无剂量 效应关系 ;突变率和DNA DNA交联均出现了剂量跳跃现象。结论 醋酸镍在穿梭质粒系统中可诱导出非定标性突变 ,并与宿主细胞的DNA

聚腺苷二磷酸核糖聚合酶假基因多态性分布及其与肺癌易感性的关系

目的 研究聚腺苷二磷酸核糖聚合酶假基因多态性在汉族人群中的分布 ,探讨该等位基因在衡量肺癌易感性方面的意义。方法 肺癌患者 6 3例 ,与病例在年龄、性别等方面匹配的健康对照 82名 ,抽提外周血白细胞基因组 DNA,特定引物 PCR扩增 ,在含溴乙锭的琼脂糖凝胶中电泳 ,紫外光下观测和成像。结果 病例组和对照组的基因型分布差异无显著性 ,B等位片段频率分别为 0 .0 95和 0 .116 ;无论是否含有 B基因 ,吸烟都是肺癌的危险因素 (P<0 .0 5 ) ,基因型为 AA时 ,吸烟的比值比 (odds ratio,OR)是2 .2 8,基因型为 AB或 BB时 ,其 OR则达 4.83;在不吸烟者中 ,AB或 BB基因型者患肺癌的危险性并未增高 (P=0 .2 0 2 )。结论 中国汉族人群 B等位片段频率较其他民族低 ,是肺癌的可能易感标记 ,但只在吸烟者才表现出来 。