北京地区流行性出血热SEO型汉坦病毒基因差异的研究

目的 揭示北京地区啮齿类动物所携带的流行性出血热 (EHF)汉坦病毒的基因型、毒株差异 ,追溯其传染来源。方法 本研究应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)扩增技术及核苷酸序列测定方法对免疫荧光抗原阳性的标本进行研究分析。结果 对 5个阳性标本的 30 0bp部分M基因组片段序列分析表明均为SEO型汉坦病毒 ;毒株核苷酸序列比较表明 :与其他SEO型毒株同源性均达 94%以上 ,而与其他HNT型毒株同源性均低于 72 % ;毒株序列所构建的系统发生树显示 ,北京地区SEO型汉坦病毒可能至少存在 4个不同的进化分支和两个不同的汉坦病毒亚型。结论 北京地区流行性出血热流行的主要毒株是SEO型汉坦病毒 ,毒株间存在着一定的基因差异 ,其传染来源有待深入研究。

汉滩病毒S片段基因cDNA 3′端非编码区对核蛋白在大肠杆菌中表达的影响

为了探讨汉滩病毒Ｓ片段ｃＤＮＡ３′端非编码区基因对核蛋白表达的影响，先后构建了两个核蛋白的表达质粒（ｐＢＶＳ２２和ｐＢＶＳＸ），其中ｐＢＶＳ２２不含非编码区基因，ｐＢＶＳＸ含有３′端非编码区基因。比较两者在大肠杆菌中表达核蛋白的水平后发现３′端非编码区对核蛋白的表达有明显的负调控作用，表达量下降近５０％。可能的原因是非编码区中含有非常丰富的ＡＴ碱基。该研究结果为进一步提高汉滩病毒核蛋白的表达量积累了经验，也为高效表达其它病毒结构蛋白提供了有益的资料。

汉坦病毒A9株全长L片段cDNA克隆和核苷酸序列测定

目的 克隆我国分离的汉坦病毒A9株L片段全长cDNA ,并测定其核苷酸序列。方法 用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术分段扩增汉坦病毒A9株全部L片段 ,用T A克隆方法进行PCR产物克隆 ,测定PCR产物的核苷酸序列。通过亚克隆将分段的L片段连接成全长cDNA克隆。结果 A9株的基因组L片段长度为 6 5 33个核苷酸 ,腺嘌呤核苷酸和尿嘧啶核苷酸丰富 (%A +U =62 47)。包含有一个单一的开放读码框架 (ORF) ,编码一个标准的质量为 2 46× 10 5 的蛋白 ,含有 215 1个氨基酸。A9株与 76 118、C1 1和C1 2株的同源性最高 ,达到 83 8%。与TULA病毒的关系较远 ,其核酸序列的同源性为 65 8%。将推导的A9株编码的氨基酸序列与其他 2 1种负链RNA病毒的依赖RNA的RNA聚合酶的氨基酸序列以及汉坦病毒几个代表株的L片段氨基酸序列进行比较 ,显示A9编码的RNA聚合酶也有 6个比较保守的区域以及几个极端保守的氨基酸残基。结论 汉坦病毒A9株L片段具有和其他汉坦病毒RNA聚合酶相似的核苷酸一级结构 ,通过对推导的氨基酸分析 。