轮状病毒组特异性抗原VP6在重组腺病毒中的表达及其免疫学效果的研究

目的 构建可表达A组轮状病毒组特异性抗原VP6的非复制型重组腺病毒载体 ,并对其生物学和免疫学性质进行研究。方法 将人轮状病毒VP6基因插入腺病毒载体pShuttle CMV中 ,通过细菌内同源重组方法获得重组腺病毒DNA ,将其转染 2 93细胞获得重组腺病毒。用聚合酶链反应 (PCR)及Southernblot方法 ,检测目的基因在重组腺病毒中的整合 ,用Westernblot检测VP6的表达。通过灌胃和滴鼻两种途径对小鼠进行免疫 ,并对免疫后小鼠体液和粘膜免疫进行分析。结果 得到了重组腺病毒rvAd VP6 ,VP6基因整合于腺病毒基因组中 ,在 2 93细胞中可稳定表达。 2次免疫后灌胃和滴鼻两组小鼠均产生明显免疫应答 ,血清IgG抗体滴度分别为 1∶1 0 0 0和 1∶1 0 0 0 0～ 1∶1 0 0 0 0 0。除了血清IgG外 ,小鼠还产生了较强的针对轮状病毒的血清IgA ,滴度为 1∶1 0～ 1∶1 0 0。滴鼻组在肺灌洗液和肠匀浆液中均可检测到分泌型IgA(sIgA) ,灌胃组仅在肠道检测到sIgA。滴鼻组的免疫学效果明显优于灌胃组。结论 人轮状病毒VP6基因重组腺病毒载体的成功构建及所取得的良好免疫学效果 。

成人腹泻轮状病毒抗体在人体内维持时间的研究

目的 观察成人腹泻轮状病毒 (ADRV)抗体在人体内维持时间。方法 采用特异性的ADRV ELISA阻断试验检测ADRV抗体 ,对河南义马地区 1992、1987、1983年患成人腹泻的病人恢复 1年、6年、10年后的血清进行ADRV抗体的检测。结果 2 6 0例ADRV病人恢复 1年、6年、10年后其血清中ADRV抗体阳性率分别为 2 2 .7% (34 15 0 )、36 .3 % (2 9 80 )、2 3 .3% (7 30 ) ;对 92例ADRV抗体阳性者进行了抗体维持时间的观察 ,ADRV抗体在人体内可维持 1～ 6年。结论 成人腹泻轮状病毒感染人后一旦产生了抗体 ,可维持

中国不同民族人群中PrP蛋白基因第129位氨基酸多态性分析

目的 研究人类PrP基因 (PRNP)第 1 2 9位氨基酸多态性在中国汉族及维吾尔族人群中的分布。方法 从抽样人群外周血中提取白细胞DNA ,进行聚合酶链反应 限制性片段长度多态性分析 (PCR RFLP) ,使用SASforWindows 6 1 2对结果进行分析。结果 83例汉族人群 1 2 9Met基因频率为 97 0 % ,1 2 9Val为 3 0 % ;35例维吾尔族人群 1 2 9Met基因频率为 91 4% ,1 2 9Val为 8 6 %。分别比较不同人群PRNP第 1 2 9位氨基酸基因型的分布情况 ,结果显示汉族人群和维吾尔族人群 (P =0 0 4 90 )、汉族人群和高加索人群 (P =0 0 0 0 5)、维吾尔族人群和高加索人群间 (P =0 0 0 1 0 )差异有显著性 ,而汉族人群与大和民族人群间差异无显著性 (P =0 50 4 0 )。结论 中国汉族人群PRNP第 1 2 9位氨基酸基因型的分布与大和民族人群相似 。

人朊蛋白基因外显子Ⅰ及其上游序列具有启动子样活性

目的 鉴定朊蛋白 (PrP)基因转录启动子位置。方法 利用聚合酶链反应 (PCR)扩增人PrP基因外显子Ⅰ及其上游序列 ,序列鉴定后插入CAT报道质粒pBL CAT6 ,分别转染HeLa、COS7和Sh sy5y细胞系 ,检测CAT表达值 ;提取三种细胞蛋白 ,以条带移动实验检测细胞转录激活因子SP1含量。结果 人PrP基因外显子Ⅰ及其上游序列为GC富含 ,带有多个SP1可能性结合位点 ,但无明显TATA盒 ;瞬时转染结果显示这段序列可诱导 2～ 3倍的CAT表达增强 ;定量移动条带实验证明HeLa细胞中含有较高浓度的SP1,而COS7和Sh sy5 y细胞中SP1含量极低。结论 人PrP基因外显子Ⅰ及其上游序列具有启动子样功能 ,为弱的非TATA盒启动子 ;不同组织来源的细胞中SP1含量不同 ,在神经细胞系Sh

人PrP特异性多肽抗体的鉴定和应用

目的 为了进一步检测制备的人PrP特异性多肽抗体的免疫反应性和特异性。方法 构建人PrPN端缺失原核表达质粒 ,表达并纯化N端缺失的PrP蛋白 ;Westernblot检测多肽抗体与纯化的各种人全长、N端缺失以及C端缺失PrP蛋白的反应能力 ;免疫荧光法检测多肽抗体与真核表达的人PrP蛋白反应能力 ;提取Creutzfeldt Jakob病 (CJD)病人以及Scrapie感染的仓鼠脑组织 ,Westernblot检测多肽抗体与致病性PrP res蛋白的反应能力。结果 所制备的PrP多肽抗体能与原核及真核细胞表达的各种不同长度的PrP蛋白反应 ,同时还能特异性识别Scrapie感染鼠脑组织中和CJD病人脑组织中的PrP res蛋白。结论 多肽抗体具备良好的免疫反应性和特异性 。