利用小鼠模型评价含有5'-GTCGTT-3'特征序列的人CpG寡脱氧核苷酸的免疫刺激活性

为了寻找合适的动物模型来评价人CpG寡脱氧核苷酸 (CpG ODN)的活性 ,研究了CpG2 0 0 6等含有 5 ' GTCGTT 3'特征序列的人CpG ODN对小鼠的免疫刺激活性。在体外它们能够促进小鼠脾淋巴细胞转化 ,促进B细胞分泌IgM ,但不能诱生高水平的IFN γ。研究了CpG2 0 0 6等序列在体内作为疫苗佐剂对HBsAg免疫效果的影响 ,发现 :(1)人CpG ODN能够明显提高抗 HBs抗体水平 ,并逆转Al(OH) 3 对Thl类免疫应答的抑制 ;(2 )初免时以CpG2 0 0 6为佐剂可以使免疫应答“锁定”在Thl类免疫应答 ,而加强免疫时以CpG2 0 0 6为佐剂可以在一定程度上逆转初免时Al(OH) 3 诱生的Th2类免疫应答 ;(3)CpG2 0 0 6联合Al(OH) 3 作为佐剂的单剂量疫苗的免疫效果强于两剂量以Al(OH) 3 为佐剂的常规疫苗。上述结果表明 :小鼠可以作为动物模型用于含有 5 ' GTCGTT 3'特征序列的人CpG ODN免疫效果的研究。

两种CpG基序能高度活化人免疫细胞

目的 筛选活化人免疫细胞的CpG基序 (CpGmotif) ,设计对人免疫细胞有强免疫刺激活性的CpG寡脱氧核苷酸 (CpG ODN)。方法 设计合成含有 5′ CG 3′二核苷酸、长度为 1 2个碱基的硫代修饰CpG ODN ,并利用体外培养的人外周血单个核细胞 (PBMC) ,以培养上清中的IgM水平为指标 ,筛选能够活化人免疫细胞的CpG基序。根据筛选获得的活性CpG基序 ,设计一组含有 2～ 6拷贝CpG基序、长度为 1 5～ 3 0个碱基的CpG ODN ,从中筛选对人免疫细胞有强免疫刺激活性的序列。结果发现了多个活性CpG基序 ,其中 5′ GACGTT 3′ ,5′ GACGTC 3′ ,5′ GGCGTT 3′和 5′ GGCGTC 3′等 4个基序对人B细胞有中度免疫刺激活性 ,和已发表的小鼠CpG基序完全一致 ;5′ GTCGTT 3′和 5′ GTCGTC 3′ 2个基序对人B细胞有高度免疫刺激活性 ,第二位碱基均为“T” ,而在小鼠CpG基序中该位碱基为“G”或“A”。根据后 2个CpG基序 ,设计了多个对人免疫细胞有高度免疫刺激活性的CpG ODN。结论人免疫细胞中存在有高度免疫刺激活性的CpG基序和CpG ODN。

人CpG-寡脱氧核苷酸对质粒DNA免疫刺激活性的影响

目的 研究人CpG寡脱氧核苷酸 (CpG ODN)对DNA疫苗质粒骨架免疫刺激活性的影响。方法 将多拷贝对人和小鼠均有免疫刺激活性的CpG2 0 0 6序列导入质粒骨架 ,并在小鼠模型体内外评价重组质粒DNA的免疫刺激活性。结果 首先构建了质粒pMini,仅含有卡那抗性基因和pUC18复制起点。然后向pMini中导入了多拷贝对小鼠具有交叉免疫刺激活性的人CpG2 0 0 6 ,得到 2个重组质粒pCpG11和pCpG2 6 ,分别含有 9和 16拷贝CpG2 0 0 6。随着插入CpG2 0 0 6拷贝数的增加 ,质粒DNA在体外活化小鼠脾细胞分泌IgM的能力逐渐增强 ,但诱生IFN γ的能力却依次降低。用重组质粒DNA作为HBsAg疫苗佐剂 ,免疫BALB/c小鼠 ,pMini和pCpG11对特异性总抗体以及IgG1亚型抗体水平无明显影响 (P >0 0 5 ) ,但pCpG2 6能够使两类抗体水平分别提高 3倍 (P <0 0 0 1)和 2倍 (P <0 0 2 )。所有质粒DNA均能够使IgG2a亚型抗体水平提高 5～ 10倍 ,但三者之间差异无显著意义 (P >0 0 5 )。结论 向质粒骨架中导入一定数量的人CpG ODN能够增强质粒DNA的免疫刺激活性。

CpG寡脱氧核苷酸作为人用疫苗佐剂的初步研究

目的 研究活化人免疫细胞的CpG寡脱氧核苷酸 (CpG ODN)在动物模型中的疫苗佐剂活性。方法 通过体外试验确定研究人CpG ODN的动物模型 ,评价人CpG ODN在动物模型中对HBsAg的疫苗佐剂活性。结果 CpG2 0 0 6等含有 5′GTCGTT 3′基元的人CpG ODN能够活化小鼠脾细胞分泌IgM和IFN γ ,而CpGT7等含有 5′GTCGTC 3′基元的人CpG ODN对小鼠活性很弱 ,具有较强人特异性 ,但两类序列均能够较好活化恒河猴B细胞。以上结果提示小鼠和恒河猴可能用作研究人CpG ODN的动物模型。在BALB/c小鼠中含有 5′GTCGTT 3′基元的序列能够显著提高抗 HBs总抗体、IgG1和IgG2a亚型抗体水平 ,而含有 5′GTCGTC 3′基元的序列作用稍弱 ,但两者均能够显著逆转Al(OH) 3 对Th1类免疫应答的抑制作用 ,使IgG2a/IgG1从 0 .0 14提高到 1左右。然而在恒河猴体内的疫苗佐剂活性较弱 ,CpGT7能够使特异性抗体滴度提高 2倍 ,而CpG2 0 0 6没有作用。结论 动物模型结果表明CpG