柯萨奇B1病毒VP1基因DNA免疫的研究

目的 构建柯萨奇 B1病毒 (CVB1)的 DNA疫苗 ,评价其免疫学性状。方法 将重组质粒 p MD18-T- VPl中的 CVB1VP1基因亚克隆至 p CEP4载体 ,构建真核表达系统 p CEP4 - VP1作为 DNA疫苗 ,经酶切、PCR和测序鉴定后转染至 He L a细胞 ,用间接免疫荧光法检测 CVB1抗原的体外表达。提纯制备 p CEP4 - VP1接种 BAL B/ C小鼠 ,取血清用 EL ISA法检测抗 CVB1Ig M和 Ig G,用 51 Cr释放法测定 CTL反应。结果 酶切、PCR和测序证明 VP1DNA疫苗构建正确 ;转染 p CEP4 - VP1的 He L a细胞中可见到荧光标记 ,提示表达了 VP1蛋白 ;接种 p CEP4 - VP1的小鼠可检测到抗 CVB1的 Ig M和 Ig G,并能产生较强的特异性 CTL反应。结论 p CEP4 -VP1可作为