腺相关病毒介导的大鼠移植肝基因转移

目的 研究腺相关病毒载体介导的移植肝基因转移的可行性和转导率。方法 以绿色荧光蛋白 (GFP)作为报告基因 ,在大鼠供肝冷保存前经门静脉注入不同剂量 (1× 10 10 pfu/ml、5× 10 10pfu/ml和 1× 10 11pfu/ml)的带有绿色荧光蛋白的腺相关病毒载体 (AAV GFP) ,保存后行异体肝移植 ,术后 2、4及 8周取供肝组织活检 ,运用免疫荧光显微镜和流式细胞仪检测GFP的表达 ,计算转导率 ,观察不同剂量的AAV GFP及不同保存时间 (1h、4h和 10h)对转导率的影响。结果 3个剂量组肝移植术后第 4周移植肝细胞内均可观察到GFP的表达 ,随着AAV GFP剂量的增加 ,转导率也增加 (6 %、15 %和 34 % ) ;随着冷保存时间的延长 ,转导率逐步提高 (15 %、32 %和 5 4% ) ;除移植肝细胞外 ,脑、心、肺、肾、脾脏内均未见GFP的表达 ;与对照组比较 ,移植肝功能的差异无显著性。结论 在模拟临床肝移植条件下 ,利用腺相关病毒可将目的基因转移入移植肝细胞内 ,且能高效表达 ;转导率随病毒剂量的增加、冷保存时间的延长而提高 ;经冷保存途径腺相关病毒的转染具有嗜肝性 ;