一种通用型重组2型腺伴随病毒载体的构建及外源基因表达的研究

以野生型2型人腺伴随病毒（AAV－2）基因组载体pSSV9－int-为基础，构建了一种携带和表达真核基因的基础AAV载体pSSV9／MulV－neosv，表达了neo基因，并采用该载体组建了携带人白细胞介素-2cDNA的重组AAV载体pSSV9／MulV－neosv－IL－2，转染A549细胞后表达了人白细胞介素-2基因。为应用腺伴随病毒作基因治疗研究提供了实验基础。

重组腺相关病毒介导人内皮抑素抑瘤作用的实验研究

背景与目的:研究表明,内皮抑素能抑制肿瘤血管的生成,进而抑制肿瘤的生长和转移,然而有关内皮抑素治疗的研究报道却很少。本研究初步探讨了重组腺相关病毒介导内皮抑素对肿瘤生长和转移的作用。方法:用RT-PCR方法获得人内皮抑素基因,构建内皮抑素可分泌表达的通用型重组腺相关病毒(rAAV)载体,包装获得重组腺相关病毒rAAV-SS-Endostatin。以动物实验分析其抗肿瘤作用。结果:C57BL/6小鼠肌肉注射1011TUrAAC-SS-Endostatin一次,该重组病毒对小鼠黑色素瘤B16F10移植瘤生长的抑制率为57.1%,在实验肺转移模型中,对转移灶的抑制率为70.7%。结论:重组腺相关病毒介导的内皮抑素能有效抑制肿瘤的生长和转移。

芳香黄杆菌弹性蛋白酶的纯化及性质研究

报道了弹性蛋白亲和层析分离纯化芳香黄杆菌产胞外弹性蛋白酶。经一步柱层析可获聚丙烯酰胺凝胶电泳均一的酶制品，收率可达５０％，并制备了酶的结晶。该酶在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上测得分子量为２１３８０，ＩＥＦ－ＰＡＧＥ测得等电点８．９，最适作用温度为５０℃，最适作用ｐＨ为７．４，在４０℃以下热稳定性良好，ｐＨ４．５－９．５范围内稳定，重金属离子Ｆｅ３＋、Ｚｎ２＋、Ｃｒ３＋、Ｃｏ２＋、Ｈｇ２＋、Ｎｉ２＋、Ａｇ＋、Ｃｕ２＋等严重抑制酶活性，黄杆菌弹性蛋白酶除了特异水解弹性蛋白外，对干酪素、血纤维蛋白、白蛋白、明胶、血红蛋白等多种蛋白质均能水解。

禽减蛋综合征病毒纤维蛋白基因的克隆与编码产物结构的分析

克隆了禽减蛋综合征病毒纤维蛋白基因 ,并对其进行了核苷酸序列测定及所编码产物的结构分析 .结果表明禽减蛋综合征病毒纤维蛋白具有所有哺乳类腺病毒纤维蛋白的特征结构 ,但是与除羊腺病毒以外的其他腺病毒纤维蛋白在核苷酸及氨基酸序列上有较大差别 .

禽减蛋综合征病毒AAV-2株全基因组文库的构建及核苷酸序列分析

对禽减蛋综合征病毒 (Eggdropsyndromevirus :EDSV 76 )中国分离株AAV 2的基因组进行了部分限制性内切酶物理图谱的分析 ,构建了完整的基因文库 ,并在此基础上完成了包括末端结构在内共 32 838个碱基对的全基因组核苷酸序列测定 ,数据分析表明 :AAV 2株与其他腺病毒相比 ,在基因组结构及开放读码框架 (ORF)的分布等方面差异较大 ,该病毒株基因组中没有明显的E1区、E3区和E4区样结构 ,其中位于基因组两端的 2个长度分别为 1 .1和 8.3kb的片段与其他腺病毒基因组无任何同源性 ,此外 ,AAV 2株基因组中缺失编码E1A ,pV和pIX等腺病毒共有的编码早、晚期蛋白的ORFs.上述结果首次在分子水平上证实了EDSV 76作为禽Ⅲ群腺病毒唯一代表株与其他禽腺病毒的差别 ,将有助于禽腺病毒乃至所有腺病毒的研究 .

激活淋巴细胞cDNA单链库的构建

介绍一种激活淋巴细胞cDNA单链库构建方法 ,此库具有良好的模板活性 .

大鼠血红素加氧酶-1基因转染对心肌缺血再灌注损伤大鼠炎性因子的影响

目的探讨重组腺相关病毒（rAAV）介导大鼠血红素加氧酶-1（HO-1）基因转染对心肌缺血再灌注损伤大鼠炎性因子的影响。方法雄性SD大鼠93只，体重225．275g，随机分为4组：假手术组（SH组，n=12）、生理盐水组（NS组，n=27）、重组腺相关病毒．荧光蛋白组（rAAv-EGFP组。n=27）及重组腺相关病毒．血红素加氧酶-1组（rAAV-rHO-1组，n=27）。NS组、rAAV-EGFP组和rAAV-rHO-1组分别于左心室前后壁共取4点注入600μl生理盐水、rAAV-EGFP或rAAV-HO-1病毒液。在基因转染后3个月，通过RT-PCR和Westernblot法检测HO-1mRNA和蛋白的表达，荧光显微镜下观察荧光蛋白的表达。采用结扎左冠状动脉前降支30min、再灌注120min的方法建立大鼠心肌缺血再灌注模型，再灌注120min后，处死大鼠，测定心肌梗死面积及血清TNF-α、IL-6水平，电镜下观察心肌细胞的超微结构。结果rAAV-rHO-1组HO-1表达明显高于NS组和rAAV-EGFP组（P〈0．01），仅rAAV-EGFP组心肌观察到荧光蛋白的表达；与SH组比较，NS组、rAAV-EGFP组和rAAV-rHO-1组心肌梗死面积增加，血清TNF-α、IL-6水平明显升高（P〈0．05），心肌结构紊乱；与NS组和rAAV-EGFP组比较，rAAV-rHO-1组心肌梗死面积减少（P〈0．01），血清TNF-α、IL-6水平明显降低（P〈0．05），心肌结构破坏程度较轻。结论重组腺相关病毒介导大鼠血红素加氧酶-1基因转染大鼠心肌细胞后，降低炎性因子的产生，从而减轻心肌缺血再灌注损伤。