痘苗病毒VV16原核增强子样序列的克隆及其结构与功能的研究

利用带有氯霉素乙酰转移酶报道基因的检测载体 ,从痘苗病毒基因组DNA中筛选到一个增强子样片段VV16。序列分析表明 ,该片段长 112bp ,是痘苗病毒DNA依赖性RNA聚合酶、polyA聚合酶亚单位和DNA聚合酶基因RPO30的一部分 ,含有 4个AT丰富区。采用带有β 半乳糖苷酶报道基因的载体检测发现 ,该片段正向可以增强报道基因表达 9 0倍 ,反向可以增强报道基因表达 4 1倍。RNADotblotting实验证实 ,它对基因的增强活性表现在转录水平上。DNA删切实验证实 ,5′端 10bp及 3′端 12bp对其活性有重要调节作用 ,而该片段nt76～ 82的序列对增强子的活性至关重要。

人粒细胞集落刺激因子受体膜外区在昆虫细胞中的表达

以胎盘组织提取的ｍ Ｒ Ｎ Ａ 为模板， Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ 扩增人粒细胞集落刺激因子（ Ｇ Ｃ Ｓ Ｆ） 受体膜外区 Ｃ Ｒ Ｈ 的ｃ Ｄ Ｎ Ａ 片段，克隆于供体质粒ｐ Ｆ Ａ Ｓ Ｔ Ｂ Ａ Ｃ１ ，与杆状病毒表达载体 Ｂａｃｍｉｄ 同源重组后，转染昆虫细胞 Ｓ Ｆ９ ，获得重组杆状病毒并证明了 Ｃ Ｒ Ｈ 的高效表达。表达产物经 Ｇ Ｃ Ｓ Ｆ 亲和层析进一步纯化，纯度可达９０ ％ 以上。受体竞争性结合实验结果表明，该表达产物能特异性结合 Ｇ Ｃ Ｓ Ｆ，具有较高的亲和力（ Ｋｄ ＝ ３ ．８ｎ ｍｏｌ／ Ｌ） 。