中国株丙型肝炎病毒(HCV)感染猕猴后5'NTR—C区基因组的cDNA序列分析

从用于接种猕猴的受ＨＣＶ感染的２份献血员的血清，第一代猕猴感染ＨＣＶ１１个月的１＃食蟹猴血清和第二代猕猴受第一代猕猴ＨＣＶ血清感染ＨＣＶ３个月后的１４＃恒河猴血清，提取ＫＮＡ，用自行设计的ＨＣＶ５＇非编码区和核心区（５＇ＮＴＲ—Ｃ区）引物进行逆转录ＰＣＲ，将扩增的７７９ｂｐｃＤＮＡ片段克隆到ｐＵＣ１９质粒上；每一株挑３个克隆用双脱氧链终止法测定其序列并矫正偏差。４株ＨＣＶ的５＇ＮＴＲ—Ｃ区序列，原代人Ａ株（ＣＸ１）ｃＤＮＡ全长７７９ｂｐ，原代人Ｂ株（ＣＸ２）ｃＤＮＡ全长７７８ｂｐ，第一代猕猴株（ＣＸ３）ｃＤＮＡ全长７７６ｂｐ，第二代猕猴株（ＣＸ４）ｃＤＮＡ全长均为７７７ｂｐ，ＣＸ１株和ＣＸ４株均在５＇ＮＴＲｎｔ—２１６有—Ｃ的插入，ＣＸ３和ＣＸ４Ｃ区ｎｔ３８５—３８７处的３个硷基缺失；ＣＸ１株与ＣＸ２、ＣＸ３、ＣＸ４比较，同源性分别为９８．０７％。９６．１５％、９５．２５％：ＣＸ２与ＣＸ３、ＣＸ４的同源性分别为９６．２８％、９５．７６％；ＣＸ３与ＣＸ４的同源性为９７．５６％。由克隆的ＨＣＶＣ区ｃＤＮＡ推导的氨基酸序列，从ＨＣＶ的启始密码起，ＣＸ１株、ＣＸ２株序列全长１６８个氨基酸。

乙型脑炎重组痘苗病毒的抗原表达及其免疫保护性

采用乙型脑炎重组痘苗病毒Ｊ１和Ｊ３株，两者均含乙脑病毒（ＪＥＶ）的Ｅ、ＮＳ１和ＮＳ２Ａ基因，后者还含ＰｒＭ基因，在ＢＨＫ－２１－１５细胞中培养表达，经免疫荧光法（ＩＦＡ）测定，两者均可高效表达ＪＥＶ特异性抗原。用该重组病毒免疫瑞士种小鼠，经ＩＦＡ检测证明Ｊ１、Ｊ３均可诱生抗ＪＥＶ抗体，其中Ｊ３免疫鼠还产生中和抗体（Ｎ）和血抑抗体（ＨＩ），且其抗ＪＥＶ攻击能力显著增高。

甲型肝炎病毒龙甲株结构区基因cDNA序列分析及其克隆

我国的甲型肝炎病毒龙甲株，经免疫捕获病毒颗粒，再进行反转录和聚合酶链反应（ＰＣＲ），获得结构基因区ｃＤＮＡ，用双脱氧法直接测定序列。结果表明，甲肝病毒在结构蛋白基因区有高度的保守性。将我国龙甲株病毒的结构区基因与甲肝病毒ＨＭ１７５野毒株和ＭＢＢ作比较，发现其核苷酸变异率分别为４．５％和３．１％，氨基酸变异均为０．１３％。从结构区基因各区段来看，核苷酸变异主要发生在ＶＰ１和ＰＶ３区域。

蚯蚓纤溶酶PI_(239)基因在杆状病毒中的表达

利用基因重组技术将PI2 39基因通过细菌 /杆状病毒 (Bac to Bac)表达系统构建重组杆状病毒表达载体 ,载体采用苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒 ,将重组病毒转染昆虫Sf9细胞 ,细胞出现明显病变。SDS PAGE电泳可以见到相对分子质量 3 .0万位置有蛋白表达 ,免疫印记结果表明该条带可以与PI2 39抗体反应。提示蚯蚓纤溶酶PI2 39重组蛋白已经获得表达 ,为进一步研究蚯蚓纤溶酶PI2

在我国流行的脊髓灰质炎中发现脊灰病毒Ⅰ型自然重组株

脊髓灰质炎病毒(PV)是引起脊髓灰质炎的最主要的病毒。我们在研究PV1野毒株的分子流行病学时,发现了一株PV1自然重组病毒。用Sabin 1特异PCR检定该毒株基因组2505～2601区段,或用两个Sabin 1特异RNA探针分别打点杂交检定641～740和2502～2575区段时,推断它可能为野毒株;而测定VP1/2A连接区段3296～3445序列时,又表明它为疫苗株。向5′端扩大测序,从3262起的5′侧有与我国PV1野毒株相同的许多核苷酸取代,证明它为野毒株和疫苗株的重组病毒,重组位点为3262/3263。实验中建立了检测该重组病毒的特异的PCR方法。检测我国10个省市、自治区47份PV1分离株中,5个省区14份麻痹病例由重组病毒感染引起。这些重组株在我们测序的3155～3445区段序列彼此几乎相同(同源性≥96.7％),推断它们可能是某病儿受野毒株、疫苗株双重感染产生重组病毒后的子代病毒。有关该重组病毒的毒力、免疫原性、传播性等正在进一步研究中。

病毒性心肌炎与其它心脏病患者血清柯萨奇B组病毒IgG抗体研究

已知柯萨奇B组病毒(CBV)能引起心肌炎和心包炎,至少一半以上病毒性心肌炎发病与CBV感染有关。据文献报道,慢性复发性心包炎CBV感染率为37.5％～64％,扩张型心肌病为7.1％～33％,急性心肌梗塞为8.6％～26.3％,正常人有CBV隐性感染存在。本文采用间接ELISA方法,重点分析病毒性心肌炎和其它心脏病患者血清中CBV IgG抗体,从而了解心脏病患者中CBV感染情况。

单克隆抗体对甲_1型流感病毒的抗原分析和快速诊断的研究

用宁夏地区分离的甲,型流感毒株宁防86—27(H_1N_1)制备了抗甲_1型流感病毒血凝素的McAb39株,其血抑滴度在1:2000—1:256000,Ig亚类为IgG_1、IgG2a、IgG2b。用自制的McAb对宁夏历年分离的甲_1型毒株的抗原分析表明:抗原漂移存在,且以1981和1987年的毒株抗原漂移明显。用我们的McAb对甲_1型毒株的间接免疫荧光试验,证实此法特异性好,敏感性高,确有早期快速诊断的意义。

应用生物素标记探针进行细胞原位杂交探讨新生儿EB病毒感染

随机抽取住院新生儿80例脐血25例利用原位杂交检测EB W病毒基因。感染组59例,39例阳性(阳性率66％),非感组21例,6例阳性(阳性率28.6％);脐血组25例,7例阳性(阳性率28％)。同时测EB抗体,抗体阳性44例中36例EB W病毒阳性、抗体阴性61例中16例EB-W病毒阳性。结果提示新生儿期存在 EB病毒感染.其 EB W基因整合在外周淋巴细胞核上、感染组EB病毒阳性率高。

动物病毒载体与基因治疗的现状和前景（续）

动物病毒载体与基因治疗的现状和前景（续）侯云德（中国预防医科院病毒所）三、单纯疱疾病毒载体单纯疱疹病毒属疮疹病毒科（Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅ）。它是一类双链ＤＮＡ病毒，目前，已分离的成员至少有８０个以上。它可感染人和许多动物，包括哺乳类动物、鱼、蛙...

痘苗病毒VV16原核增强子样序列的克隆及其结构与功能的研究

利用带有氯霉素乙酰转移酶报道基因的检测载体 ,从痘苗病毒基因组DNA中筛选到一个增强子样片段VV16。序列分析表明 ,该片段长 112bp ,是痘苗病毒DNA依赖性RNA聚合酶、polyA聚合酶亚单位和DNA聚合酶基因RPO30的一部分 ,含有 4个AT丰富区。采用带有β 半乳糖苷酶报道基因的载体检测发现 ,该片段正向可以增强报道基因表达 9 0倍 ,反向可以增强报道基因表达 4 1倍。RNADotblotting实验证实 ,它对基因的增强活性表现在转录水平上。DNA删切实验证实 ,5′端 10bp及 3′端 12bp对其活性有重要调节作用 ,而该片段nt76～ 82的序列对增强子的活性至关重要。

感染“乙肝”病毒后

乙型肝炎病毒进入人体后,经过血液的途径进入肝脏,并在肝内细胞里生长繁殖。由于每个人发生乙型肝炎病毒感染时的年龄、感染的程度以及当时身体的状况不同,身体的表现也会有所不同,大致有以下几种类型:第一种是强反应型。

反复下呼吸道感染患儿自然杀伤细胞活性的观察

反复下呼吸道感染患儿自然杀伤细胞活性的观察北京医科大学人民医院儿科于贵杰，李静华，王新江自然杀伤细胞能溶解病毒感染细胞、细菌和预先没有效敏的正常细胞。ＮＫ细胞在保护机体对抗感染方面是一早期的重要防御机理，特别在免疫系统成熟前对婴儿的保护尤为重要。反复...

泌尿生殖道疾患与沙眼衣原体感染的相关性研究

对155例慢性前列腺炎患者，52例非前列腺炎的其它泌尿生殖遣疾患和正常人对照；123例宫颈炎患者、52例正常育龄妇女对照，30例疗后复查患者，同时进行沙眼衣原体（Ct）PCR检测。结果显示：慢性前列腺炎患者的前列腺液Ct阳性率为27.1％（42／155），而且均为非细菌性前列腺炎，对照组皆为阴性，二者具有非常显著性差异。对53例在前列腺按摩前初始尿和尿道脱落的上皮细胞，PCR结果：9例仅前列腺液阳性，3例仅尿液阳性，3例前列腺液与尿液同时阳性．其余皆为阴性，这结果似可说明，前列腺液的Ct主要来源于前列腺并非来源于尿道。123例宫颈炎患者的宫颈分泌物Ct阳性率为31．7％（39／123）．52例正常育龄妇女，Ct阳性单为3．8％（2／52）．从显示的阳性率来看．二者具有非常显著性差异（P＜0．01）。30例PCR阳性的疗后复查患者Ct皆转为阴性。

肿瘤坏死因子结构研究进展

肿瘤坏死因子是α-肿瘤坏死因子和淋巴毒素的统称,它们具有相同的细胞受体.国内外学者在阐明人肿瘤坏死因子三级结构的基础上,结合使用化学修饰,抗 体结构域定位、定点诱变等方法对人肿瘤坏死因子结构与其功能的关系进行了研究,确定了人肿瘤坏死因子分子中对其活性至关重要的部位,同时也基本阐明了人α-肿瘤坏死因子的受体结合位点的氨基酸组成以及它们在人肿瘤坏死因子三、四级结构上的位置.

被动血凝(PHA)快速检测日本乙型脑炎抗体方法的建立

本文报道了快速检测日本乙型脑炎（乙脑）抗体的被动血凝方法。用PEG提纯乙脑BHK抗原致敏醛化绵羊红细胞可用于人、猪血清中乙脑抗体的检测．该方法具有较高的敏感性和特异性，实验结果表明：该方法与血凝抑制试验具有同等的敏感性，两者符合率为85．12％，与ELISA符合率为91．70％。

莱姆病螺旋体P39蛋白的基因克隆及在大肠杆菌中的高效表达

目的 克隆并表达我国莱姆病螺旋体分离株 Bm p A即 P39基因 ,为制备莱姆病螺旋体基因工程重组抗原以用于我国莱姆病的基础与临床诊断研究奠定基础。方法 应用 PCR方法及基因重组技术对我国莱姆病螺旋体分离株 P39蛋白进行全基因克隆 ,并在此基础上去掉信号肽序列 ,将 P39基因插入原核表达载体 L KB2 ,在大肠杆菌 BL 2 1(DE3)中进行诱导表达。表达产物以 SDS— PAGE电泳、Western blot、薄层扫描分析。结果 成功地克隆了 P39基因 ,序列分析显示 ,P39基因全长 10 2 0 bp,其核苷酸序列及氨基酸序列同源性与国外分离株均较高 ,与 Sh- 2 - 82株皆为 99% ,P39基因在大肠杆菌中以天然蛋白形式得到高效表达 ,扫描分析其分子量为 37k Da,单株表达量占菌体总蛋白的 5 8% ,Western blot实验表明其可与莱姆病患者血清发生特异性反应。结论 成功克隆了莱姆病螺旋体国内分离株 P39蛋白基因并且在原核系统中得到高效表达。重组 P39蛋白具有较好的免疫活性 。

多抗原肽在抗HCV血清学诊断中的应用

应用八分支的多抗原肽（Ｍｕｌｔｉｐｌｃａｎｔｉｇｅｎｉｃｐｅｐｔｉｄｅ，ＭＡＰ）树脂，通过固相肽合成技术，合成一系列源于ＨＣＶ核心蛋白和ＮＳ４蛋白的八分支多抗原肽。经ＥＬＩＳＡ检测表明，八分支多抗原肽具有较强的免疫反应性。与相应的单拷贝寡肽相比较，多抗原肽对弱阳性血清的检出率有所提高。中和ＥＬＩＳＡ试验也表明，多抗原肽与抗体的亲合力及包被效率均优于单拷贝寡肽。多抗原肽不仅可以提高检测的灵敏度和可靠性，而且可以降低抗原的包被浓度，故在抗ＨＣＶ血清学诊断中具有一定的应用优势。

肝细胞癌p53基因249密码子热点突变的研究

目的 研究肝细胞癌(HCC)中p53基因249密码子(p53 E7 cd249)点突变情况。方法 用PCR法及HAEⅢ限制性片段长度多态性分析(HAEⅢ/RFLP)检测河南豫东地区38例HCC石蜡包埋组织及2例肝细胞癌株中p53 E7cd249点突变情况,DNA测序证实。选取广西桂西南地区的10例HCC作对照。结果 来自河南豫东地区的HCC p53 E7 cd249点突变率为10.5％(4/38),对照组广西桂西南地区的HCC p53 E7 cd249点突变为40％(4/10),二者相比具有显著性差异(P<0.05)。2例肝细胞癌株中均未发现HCC p53 E7 cd249点突变。结论 河南豫东地区HCC中p53基因E7 cd249点突变为非高发事件;p53 E7 cd249点突变可能发生在肝细胞癌变的晚期。

小儿白血病与N细胞

小儿白血病与ＮＫ细胞北京医科大学人民医院儿科于贵杰，李静华，刘桂兰，谷淑燕近年来人们日益重视ＮＫ细胞在抗肿瘤免疫中的作用。已公认ＮＫ细胞在肿瘤的发生与转移的免疫监视中起重要作用，与白血病的发生、发展及治疗的关系也受到重视。目前国内报道较少。本文就我们...