重组腺相关病毒9型空壳率阴离子交换高效液相色谱检测方法的建立及验证

目的建立检测重组腺相关病毒9型(recombinant adeno-associated virus type 9,rAAV9)空壳率的阴离子交换高效液相色谱(anion-exchange high-performance liquid chromatography,AEX-HPLC)法,并进行验证。方法采用基于电荷差异的AEX-HPLC法,通过对流动相洗脱梯度、流动相pH、色谱柱柱温、流速、样品浓度、进样体积和荧光检测器检测波长进行优化,建立检测rAAV9空壳与实心病毒比例的方法,并对方法的专属性、线性、检测限、定量限、精密度和准确度进行验证,确认方法可行性。结果利用CIMac AAV full/empty-0.1 mL分析柱,以20 mmol/L 1,3-二[三(羟甲基)甲氨基]丙烷(BIS-Tris propane,BTP)为流动相A,20 mmol/L BTP+1 mol/LNaCl为流动相B进行梯度洗脱,流动相pH均为9.0,柱温20℃,流速1 mL/min,样品浓度4×10^(12)vg/mL,进样体积10μL,激发波长为280 nm,发射波长为330 nm,可实现rAAV9空壳与实心病毒的基线分离及定量检测。方法验证结果表明,制剂缓冲液无干扰,专属性较好;rAAV9在(1.6~8)×10^(12)vg/mL范围内线性关系良好,r=0.993;检测限为5×10^(10)vg/mL,定量限为1×10^(11) vg/mL;重复性和中间精密度RSD分别为2.95%和2.10%;准确率均不低于80%。结论建立了一种高灵敏度且可快速检测rAAV9空壳与实心病毒比例的AEX-HPLC法,可用于基因治疗产品空壳率的分析及质量控制。

冻存对复溶后人粒细胞刺激因子国家标准品生物学活性的影响

目的探讨冻存对复溶后人粒细胞刺激因子(human granulocyte colony-stimulating factor,hG-CSF)国家标准品生物学活性的影响,为hG-CSF国家标准品的使用提供参考。方法依据《中国药典》三部(2020版)通则3525测定标准品的生物学活性;将复溶后的hG-CSF国家标准品分装后置于-80、-40、-20℃保存,分别于第1、2、3、5和6个月取样检测生物学活性,用临用前复溶的标准品定量-80℃存放不同时间的标准品,以-80℃存放的样品为100%活性对照品定量其余样品的相对生物学活性。结果热加速稳定试验拟合Eyrlng方程为:ln{k(t)}=6.75-3772.20/T+ln(T),R2=0.969,预测hG-CSF国家标准品于-80℃贮存时,生物学活性衰减5%约需93.4个月;-80℃冻存的复溶标准品生物学活性值下降约24%。结论hG-CSF国家标准品复溶分装后于-80℃可稳定保存半年以上。但冻融会引起活性值下降超过20%,因此不建议复溶后分装储存使用。

生长激素作用通路、调控机制及生物学活性测定研究进展

生长激素是由脑垂体前叶嗜酸性细胞分泌的1种单一肽链的蛋白质激素,是人出生后促生长最重要的激素。生长激素通过与细胞表面特异性受体结合,激活非受体酪氨酸激酶JAK2及Src家族激酶的下游信号通路发挥生物学效应。深入了解生长激素作用机制是其生物学活性测定研究的基础。本文综述了近年来生长激素相关研究进展,包括生长激素与受体作用机制,生长激素与受体结合后激活的STATs、PI3K-Akt和MEK-Erk等信号通路,以及生长激素作用通路调控机制,并对生长激素活性测定方法研究进行了总结和展望,以期为生长激素药物生物学活性质量控制研究提供参考。

戊型肝炎疫苗抗原国家标准品的建立

目的建立戊型肝炎疫苗抗原国家标准品,用于我国戊型肝炎疫苗质量控制。方法选取一批戊型肝炎疫苗原液为标准品原料制备候选标准品(编号CS),进行均匀性和稳定性检测,并分发给3个实验室进行协作标定和适用性研究。结果CS均匀性结果显示分装精度为0.7%;抗原含量均匀性CV值为6.8%;水分含量为0.4%。稳定性结果显示CS具有较好的加速稳定性和复溶稳定性。协作标定共获得16个有效数据,结果显示CS平均值为259271 YU/支[95%CI:(259271±5768)YU/支],实验室内CV值为2.8%~6.9%,实验室间CV值为4.5%。依据3个实验室完成的协作标定结果,将CS赋值260000 U/支。以CS为标准检测企业自制样品均显示较好的平行性和线性。结论本研究建立了首个戊型肝炎疫苗抗原国家标准品(300051-202101),可用于我国戊型肝炎疫苗质量控制。

戊型肝炎疫苗效力国家参考品的制备

目的制备戊型肝炎疫苗(简称戊肝疫苗)效力国家参考品,用于戊肝疫苗效力的质量控制。方法选取1批戊肝疫苗为候选参考品原料,加入经筛选的冻干保护剂,分装、冻干后制备为候选参考品,进行均匀性和稳定性考察,并分发给4个实验室进行协作标定和适用性研究。结果选择5%海藻糖+2%右旋糖酐作为冻干保护剂制备候选参考品。候选参考品的分装精度为0.7%;抗原含量均匀性变异系数(coefficient of variation,CV)为9.0%;铝含量均匀性CV为4.0%。水分含量为1.7%。候选参考品具有较好的加速稳定性和复溶稳定性。协作标定共获得18个有效数据,结果显示候选参考品半数有效量(median effective dose,ED50)均值为0.15μg(95%置信区间为0.12~0.18μg),实验室内CV为30.8%~64.2%,实验室间CV为32.6%。2家实验室自行研制的戊肝疫苗与候选参考品均表现出良好的剂量效应关系,阳转率均随疫苗抗原含量减少而降低,曲线变化趋势相近。结论首次制备了戊肝疫苗效力国家参考品(300031-201801),用于戊肝疫苗效力ED50检测质量控制。