哺乳动物精子磷脂酶C zeta(PLCζ)在受精中作用的研究进展

哺乳动物受精是高度分化的雌雄配子结合,形成一个合子的过程。精卵细胞融合过程中,精子将携带的遗传物质和功能性分子释放到卵子内,引起一系列生物学事件,激活停留在减数分裂前期的卵子。精子释放的分子诱导卵子内质网中的钙离子(Ca^(2+))以一定的频率释放到胞质中形成钙振荡,作用于下游分子,打破细胞周期抑制网络,引发皮质颗粒释放,成为卵子激活的首要标志。文章综述了精子内诱发卵子激活的磷脂酶C zeta(PLCζ)和类似分子的鉴定、分子结构和作用机制方面的研究进展,并讨论了相关精子缺陷引起的人和动物的生殖障碍,以及人工卵子激活方法研究进展,以期为增进人类生殖健康和提高动物体外胚胎生产效率提供参考。

几种常用实验动物垫料的质量评价研究概述

实验动物垫料是保证实验动物质量和影响动物试验结果的重要环境因素,也是衡量动物福利的重要标准。本文就常用实验动物垫料的种类、垫料的标准化、垫料的质量评价、灭菌方法等方面进行论述和总结,特别介绍接触性垫料、非接触性垫料的优缺点,对实际应用中选择和使用实验动物垫料提供参考依据,有利于实验动物垫料的新型研发和完善实验动物垫料国家标准等相关工作的开展。

关于我国实验动物资源建设与发展的思考

阐述了实验动物资源作为科研基础条件在生命科学和生物技术、医学研究、新药创制等领域科技创新中的重要作用,分析国际实验动物现状和发展趋势,简要概述了我国实验动物资源建设和发展现状。在此基础上,根据新时代实施创新驱动发展战略、提升国家科技创新能力对条件资源建设提出的新要求,提出加强我国实验动物资源建设的相关思考和建议。

中国大陆地区实验动物使用现状分析

本文目的是调查分析中国大陆地区实验动物使用现状。通过对中国大陆地区31个省、直辖市、自治区的调查,共收集到1 448个使用许可证的相关信息。分析发现,我国实验动物的使用领域逐渐增多,高质量动物使用占比明显上升。虽然我国实验动物使用总量逐年增多,但使用动物品种远超生产的品种,而且这种生产品种数量与使用品种数量倒挂的状况还将长期存在。

中国大陆地区实验动物生产现状分析

本文目的是调查分析中国大陆地区实验动物生产现状。通过对中国大陆地区31个省、直辖市、自治区的调查分析发现,大陆地区实验动物生产的规模化供应初步实现,1个生产许可证所提供的实验动物数量至少可以满足3~4个使用许可证所需要的实验动物。调查还发现,我国的实验动物生产呈现出明显的区域性分布状态,与地理环境和经济发展密切相关;在实验动物的生产等级方面,还有较大的提升空间,其中小鼠、大鼠和鸡胚以SPF级生产为主;地鼠以清洁级生产为主;其他动物的生产均以普通级为主;此外我国有生产许可证的实验动物种类还比较少仅13种,科技人员的选择余地不多。因此,我国实验动物行业的发展需要从国家层面系统规划,以期全面提高我国实验动物的产量、种类和质量等,为我国科技的发展提供有力支撑。

北京地区实验动物中猴痘病毒感染情况调查

目的对北京地区实验动物中猴痘病毒(MPXV)感染情况进行调查。方法参照世界卫生组织(WHO)MPXV实验室检测指导意见,采用荧光PCR法检测北京地区实验动物中MPXV,共642只动物,包括猴127只、小鼠215只、大鼠80只、豚鼠40只、地鼠10只、兔85只、犬85只。其中猴采集咽拭子,大小鼠、豚鼠和地鼠等采集盲肠,兔和犬采集肛拭子,采集的样本加入适量灭菌PBS,盲肠样本充分匀浆,拭子样本涡旋振荡1 min,-70℃反复冻融3次,离心取上清提取核酸,荧光PCR检测MPXV DNA,最后对结果进行分析。结果经荧光PCR检测,127只猴、215只小鼠、80只大鼠、40只豚鼠、10只地鼠、85只兔、85只犬MPXV DNA均为阴性。结论目前未在北京地区实验动物中发现MPXV感染。

应用PCR方法对三种新型实验动物钩端螺旋体感染情况的调查研究

目的建立有效的钩端螺旋体PCR检测方法,并对树鼩((tree shrew,Tupaia belangeri))、长爪沙鼠(Meriones unguiculatus;Mongolian gerbil)和灰仓鼠(Cricetulus migratorius)等三种新型实验动物进行感染情况调查。方法针对NCBI公布的钩端螺旋体序列,设计并筛选特异性引物,优化PCR体系,进行特异性和敏感性测试;并运用优化PCR方法对树鼩、长爪沙鼠和灰仓鼠样品进行检测。结果成功建立钩端螺旋体PCR检测方法,序列测定验证了该方法的特异性。普通级树鼩钩端螺旋体的阳性率为8.33%,普通级长爪沙鼠钩端螺旋体为100%,清洁级长爪沙鼠和清洁级灰仓鼠钩端螺旋体的阳性率为0%。结论本研究建立了钩端螺旋体PCR检测方法,调查了树鼩、长爪沙鼠和灰仓鼠三种新型实验动物的感染情况,为这三种实验动物的研究和使用奠定基础。

融水小型猪的实验动物化系列研究概述

融水小型猪的种源来自广西融水县,2012年被引到广东繁育并测定了基础数据,包括种质特性、繁殖性能、生长曲线、血液学指标、血生化指标、脏器系数、染色体分析。参照国家和地方有关实验动物标准,初步建立了融水小型猪微生物与寄生虫、环境与设施、饲料、病理学、遗传学等质量控制标准。融水小型猪能适应当地气候,繁殖良好,自然受孕率为88.3%,妊娠期平均112 d,初产平均胎产仔6.1头,经产平均产仔7.9头。融水小型猪体型小,雌雄成年体重(6月龄)分别为17.21±5.20 kg和16.35±5.23 kg,性情温顺,线粒体DNA分析表明融水小型猪比兰屿猪更为古老。通过标准化的饲养管理与质量控制,具有培育成实验用小型猪的基本条件。

中国大陆地区实验动物机构、人员和设施现状分析

本文目的是调查分析中国大陆地区实验动物机构、人员和设施的现状。通过对中国大陆地区31个省、直辖市、自治区和军队系统的调查分析发现,大陆地区实验动物许可证数量共计1870个,其中生产许可证数量为422个,使用许可证数量为1448个。调查还发现,实验动物行业的主力是企业,主要服务于医药卫生行业,而且提供综合性服务已经成为实验动物机构的发展方向;实验动物从业人员的管理走向正轨,虽然科技人员在实验动物从业人员中的比例最高,但学历和职称整体偏低,需要加强人才培养;实验动物生产和使用设施的面积以及建设经费投入逐年增大,但政府对生产设施建设的经费投入有待加强。

胚胎期颞下颌关节形态发育研究进展

颞下颌关节(TMJ)是哺乳动物特有的滑膜关节,其发育过程与长骨关节有着显著的不同。TMJ胚胎发育研究已有近百年的历史,然而一方面人类TMJ胚胎发育研究的连续性受到限制,TMJ发育起始以及髁突骨化与生长方式等问题还尚未完全阐明;另一方面啮齿类动物作为TMJ发育研究的模式动物与人类TMJ还存在一定的差异,寻求与人更为接近的模式动物开展TMJ胚胎发育研究的脚步从未停止。本文从人类与动物模型两个方面对胚胎期TMJ的形态发育进行了综述。

实验动物金黄色葡萄球菌的实验室检测能力验证结果评价

目的通过实施实验动物金黄色葡萄球菌检出能力验证计划,了解实验动物检测机构检验能力,提高实验动物质量检测水平。方法按照CNAS批准的能力验证方案,通过低温冻干制备样品,经过稳定性和均匀性检验合格,作为能力验证样品。采用随机编号,发样给参加单位,并附作业指导书。在规定时限提交检验报告和原始记录复印件,其结果与样品预检结果一致的判为满意结果,不一致或未能提交结果的判为不满意结果。结果共有28个实验室参加本次能力验证项目,其中获得满意验证结果的实验室为22个,占总参加机构的78.57%;未得到满意验证结果的实验室为6个,占21.43%。采用国标检测方法的有27个,采用PCR检测方法的有1个。结论实验动物质量检测机构对金黄色葡萄球菌的检测能力较高,实施能力验证计划能够反映实验室的检测水平。

实验动物中沙门菌的实验室检测能力验证的结果与分析

目的通过实验动物中沙门菌检测能力验证计划,了解实验动物检测机构对沙门菌的检验能力,提高实验动物质量检测水平。方法按照CNAS批准的能力验证方案,通过冷冻干燥法制备含有沙门菌及干扰菌的实验动物粪便样品,经过稳定性和均匀性检验合格,作为能力验证样品。采用随机编号,经冷链运输发放给参加单位,并附作业指导书。在规定时限提交检验报告和原始记录复印件,其结果与样品预检结果一致的判为满意结果,不一致或未能提交结果的判为不满意结果。结果全国共有20个省市的30个实验室参加沙门菌能力验证项目,其中28个实验室获满意结果,占总参加机构的93.3%,不满意的2个实验室,占6.7%。采用分离培养方法的有29个实验室,采用PCR方法的有2个实验室。结论实验动物质量检测机构沙门菌检测能力较高,实施能力验证计划能够反映实验室的检测水平。

我国临床前药物致癌试验转基因动物模型研究进展

目的:综述我国临床前药物致癌试验转基因动物模型研究进展。方法:介绍致癌试验常用转基因动物模型的构建、利用转基因动物模型开展致癌试验的优势、国际认可及国际监管机构新药申报中的应用、国内外致癌试验相关指导原则、我国开展基于转基因动物致癌试验面临的困境以及转基因动物模型构建的最新进展。结果与结论:基于转基因动物模型的致癌试验具有诸多优势也是目前国际趋势,在我国建立临床前药物致癌试验转基因动物模型非常必要。

六年实验动物病原菌检测能力验证结果分析

目的总结分析2011年、2013~2017年实验动物病原菌检测能力验证活动情况,提高检测能力,促进能力验证活动开展。方法 2011年、2013年~2017年,本院组织开展了六次7个项目的实验动物病原菌检测能力验证活动。通过汇总六年中能力验证活动的结果数据,分析整体趋势,总结归纳出现的问题。结果六年中共有全国20个省市的45个单位先后报名参加实验动物病原菌的能力验证活动,项目包括肺支原体、泰泽病原体、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门菌、肺炎克雷伯杆菌和支气管鲍特杆菌;满意率分别为75%、87.5%、80.0%、78.6%、93.3%、96.2%和88.0%。不满意结果原因主要有培养时间不足、可疑菌落筛选错误、生化鉴定错误、报告书写笔误以及未及时提交报告等。结论通过连续的能力验证活动,国内实验动物病原菌检测水平逐渐提高,达到预期目标。

微生物法检测实验动物血清中的抗生素残留

目的建立实验动物血清中抗生素残留检测方法,保证微生物质量检测结果的准确。方法采用微生物抑制法,用嗜热脂肪芽孢杆菌作为指示菌,对1640份实验动物血清进行抗生素残留检测。并与Premi@Test抗生素检测试剂盒进行比对。结果在受试样品中,检测出小鼠、大鼠、豚鼠、兔和犬的血清中存在抗生素残留,阳性率分别为27.2%、16.4%、39.9%、23.7%和47.6%。抽取82份血清和18份阴阳对照品,与Premi@Test检测的结果相比较差异不显著(X2=16.680,P>0.05)。血清中抗生素的残留与DHL琼脂平皿的菌落生长有一定相关性(X2=9.939,P<0.05)。结论本研究采用嗜热脂肪芽孢杆菌作为指示菌的微生物抑制法,能够对动物血清中的抗生素进行检测,具有良好的敏感性和重复性,成本低,操作简便。为实验动物体内抗生素残留检测和微生物学检测结果的准确性提供依据。

北京地区2008～2011年实验动物绿脓杆菌检测结果与分析

目的了解SPF级实验动物中绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)感染现状和规律,为防止绿脓杆菌感染提供依据。方法参照国家标准,对SPF级小鼠、大鼠、豚鼠和兔进行检测。结果在2008～2011年中检测的SPF级动物中,PA感染的阳性率为8.9%(267/2988);不同动物感染率无显著差异;不同时间(不同年份和不同季度)PA阳性检出率无显著差异;其中,免疫缺陷动物的PA阳性检出率为32.5%明显高于免疫功能正常动物的7.6%;PA检出率随着送检单位和动物数量的增加逐年升高;不同动物群体间感染率相当,且保持稳定。结论北京地区SPF级实验动物中PA检出率较高,应加强管理。

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测实验动物病原菌效果初探

目的评价基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)检测实验动物病原菌的效果。方法使用德国Bruker Biotyper系统对40株标准菌株及384株实验动物分离菌进行鉴定。结果 Bruker Biotyper检测标准菌株和分离株的准确率分别为90. 0%和80. 0%。对鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)、假结核耶尔森氏菌(Yersinia pseudotuberculosis)、志贺菌(Shigella spp.)、肺炎克雷伯杆菌(Klebsiella pneumoniae)、嗜肺巴斯德杆菌Heyl生物型(Rodentibacter heylii)和支气管鲍特杆菌(Bordetella bronchiseptica)的鉴定存在偏差。结论MALDI-TOF MS方法高效、准确率高,可用于实验动物病原菌的快速鉴定。

实验动物皮肤病原真菌多重PCR检测方法的建立与初步应用

目的建立石膏样毛癣菌(Tm)、石膏样小孢子菌(Mg)、犬小孢子菌(Mc)和猴类毛癣菌(Am)的多重PCR检测方法,用于实验动物皮肤病原真菌的快速检测。方法根据Genbank公布的四种皮肤病原真菌的18S-28S rRNA序列设计特异性引物,通过引物、d NTP、Taq DNA聚合酶浓度及退火温度和时间的优化,建立四种皮肤病原真菌的多重PCR体系。经特异性和敏感性检验后,对15份人工感染真菌大鼠毛和260份实验动物毛发样本进行检测。结果所建多重PCR方法能够有效区分四种皮肤病原真菌,产生192 bp(Tm)、460 bp(Mg)、290 bp(Mc)和602 bp(As)的目的片段,最低检测限分别为5.9 pg/μL、6.6 pg/μL、9.5 pg/μL和5.1 pg/μL。被检的15份人工感染样本扩增结果准确,260份毛发样本中未检测出四种真菌。结论所建立的多重PCR方法能够同时对实验动物中的四种皮肤病原真菌进行快速的检测,具有较高的应用价值。

我国实验动物科技工作发展的政策支撑与思考

实验动物是生命科学研究的基础材料和支撑条件,是重要的战略性科技资源,也是国家科技基础条件平台建设的重要组成部分。十三五国家科技创新规划提出:“开展实验动物新资源和新品种培育,加快人源化和复杂疾病动物模型创制与应用,新增一批新品种、新品系,资源总量接近发达国家水平;……”。因此,本文从我国实验动物法律法规、标准体系、管理制度等方面梳理我国实验动物科技工作发展的相关政策,浅谈这些政策对我国实验动物资源建设与共享的导向作用,以及完善相关政策法规与落实管理措施的思考与建议。

北京地区实验动物中嗜肺巴斯德杆菌的表型分析

目的对北京地区实验动物中的嗜肺巴斯德杆菌分离株进行表型分析,提高检测的准确性。方法通过生化鉴定和16S rDNA测序,对306株嗜肺巴斯德杆菌可疑菌株进行鉴定。结合分离株在血琼脂平皿上的菌落特征和生化特性,组成53个特征数据谱,进行表型特征的聚类分析。结果 306株分离株中,BD自动细菌鉴定系统和16S rDNA测序鉴定出嗜肺巴斯德杆菌的阳性率分别为164/306和227/306。227株嗜肺巴斯德杆菌真阳性的表型特征共有140种,Heyl型106种,Jawetz型23种。结论北京地区实验动物中嗜肺巴斯德杆菌主要为Heyl型感染,Jawetz型较少,表型特征多样,分布广泛。