鼠肺炎病毒实时荧光定量聚合酶链反应方法的建立及其在新型冠状病毒感染模型用小鼠等动物检测中的应用

目的建立鼠肺炎病毒(pneumonia virus of mice,PVM)实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,Q-PCR)检测方法,用于新型冠状病毒感染模型用小鼠等实验动物及其动物相关样本的检测。方法选择PVM G基因保守序列设计合成引物和探针,建立Q-PCR方法。并进行方法的线性、特异性、敏感性、重复性、稳定性和可信度验证。应用建立的方法对包括用于构建新型冠状病毒感染模型用hACE2等8个品系142只小鼠,及15只大鼠、5只沙鼠、4只黄鼠、63只裸鼹鼠和19只PVM感染小鼠的肺组织样本进行PVM检测。结果建立的方法与仙台病毒、呼肠孤病毒Ⅲ型、汉坦病毒、淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒无交叉反应。方法的线性范围为1×10^(1)-1×10^(8)拷贝/μl,检测病毒质粒标准品灵敏度达101拷贝/μl;重复性、稳定性结果显示实验内和实验间平均变异系数均<5%。用建立的方法检测用于构建新型冠状病毒感染模型用hACE2等8个品系142只小鼠,及15只大鼠、5只沙鼠、4只黄鼠和63只裸鼹鼠,结果均为阴性;检测19只PVM感染小鼠肺组织样本,PVM阳性率为36.84%(7/19),与RT-PCR检测结果符合率为100%。结论建立的PVM Q-PCR方法特异性、敏感性,重复性、稳定性好,检测结果可靠,能够用于构建新型冠状病毒感染模型常用品系小鼠等实验动物的监测及其相关样本的检测。未发现用于构建新型冠状病毒感染模型常用品系小鼠携带PVM。