药源性眼损伤快速评价的斑马鱼模型

目的苯扎溴铵和羟苯乙酯是广泛应用于眼用制剂的防腐剂,其在眼表的积累是引起眼用制剂药物毒性的重要因素。目前还没有一种简单、快速的方法来检测防腐剂的体内毒性。本研究以苯扎溴铵和羟苯乙酯为探针药物建立一种快速筛选和评价化合物眼毒性的斑马鱼模型和方法。方法体式显微镜下活体观察斑马鱼幼鱼给药后眼部形态的变化;采用斑马鱼行为学检测实验,检测在明暗交替条件下斑马鱼幼鱼视觉对光刺激的反应能力;利用RT-PCR和原位杂交实验检测斑马鱼幼鱼眼发育相关基因转录水平的变化。结果苯扎溴铵和羟苯乙酯能够诱导斑马鱼幼鱼眼损伤,其虹膜带宽与瞳孔直径之比呈剂量依赖性下降,角膜有斑块样病变以及巩膜有凸起样病变。行为学实验表明苯扎溴铵和羟苯乙酯导致斑马鱼幼鱼的光反应能力降低。RT-PCR结果显示苯扎溴铵和羟苯乙酯均可导致斑马鱼眼发育相关基因crb1、six3、lumican、pax6a、pip5k3和pitx2 mRNA水平显著下调。原位杂交结果证实了苯扎溴铵和羟苯乙酯均能抑制six3和pitx2在斑马鱼眼部的表达。羟苯乙酯的毒性弱于苯扎溴铵。结论苯扎溴铵和羟苯乙酯诱导的斑马鱼药源性眼损伤与人类眼损伤相似。本研究建立了一种快速评价化学药品眼损伤的体内筛选模型和评价方法。

麻腮风联合减毒活疫苗中新霉素残留量微生物学检测方法的建立

目的建立麻腮风联合减毒活疫苗(Measles,mumps and rubella vaccine,MMR)中新霉素残留量的微生物学检测方法,并进行验证。方法采用管碟法测定新霉素含量,并以新霉素浓度的对数和抑菌圈半径的平方值绘制标准直线。对建立的方法进行同质性、最低检出限、加样回收率及精密度验证。结果建立的方法在新霉素浓度为0.24～4.18 U/ml的范围内线性关系良好,R2=0.997 8;新霉素标准品与供试品的剂量反应直线的回归方程的斜率差异无统计学意义(P>0.05),即标准品与供试品间可满足同质性的要求;该方法的最低检出限为0.05 U/ml;该方法检测新霉素浓度约为0.5和1.0 U/ml的混合溶液,回收率分别为99.22%和99.86%;日内RSD为1.09%,日间RSD为1.42%。结论建立了一种适用于定量测定MMR中新霉素残留量的微生物学检测方法,该方法操作简便,结果可靠,可用于MMR的常规质量控制。

应用3T3细胞光毒性实验评价几种非甾体抗炎药的光毒性

目的研究采用体外BALB/c 3T3细胞光毒性实验评价几种常用非甾体类抗炎药的光毒性。方法通过比较在光照和非光照条件下,受试物对细胞杀伤的半数抑制浓度,来计算光刺激因子PIF值,并根据PIF值判断受试物有无光毒性。结果研究表明,酮洛芬PIF>134.4,有光毒性;萘普生PIF>6.69,有光毒性;芬布芬PIF=5.96,有光毒性;布洛芬和吲哚美辛因在光照和非光照条件下,对细胞杀伤率均大于50%,因此无光毒性。结论本次实验结果显示,BALB/c 3T3细胞光毒性实验方法有很好的预测性和适用性,与其他方法联合应用来全面评价化合物潜在的光毒性,是该领域研究逐渐发展完善的必然趋势。

重组赖脯胰岛素中四环素残留量微生物学检测方法的建立

目的建立重组赖脯胰岛素中四环素残留量微生物学定量检测方法。方法采用管碟法对重组赖脯胰岛素中四环素含量进行测定,以四环素浓度对数为纵坐标,抑菌圈半径平方值为横坐标绘制标准直线。同时验证方法的同质性、最低检出限及准确性。采用建立的方法检测3批重组赖脯胰岛素原料中四环素的残留量。结果重组赖脯胰岛素为4 mg/mL时,其作为基质不影响方法的准确性;浓度为10 mg/m L时,存在基质效应,影响检测的准确性。该方法的最低检出限为0.12μg/mL,最低定量限为0.24μg/mL。基质浓度为4 mg/mL时,0.60、0.84和0.96μg/mL四环素标准品溶液的四环素回收率分别为95.59%、98.78%和96.17%;基质浓度为10 mg/mL时,回收率分别为82.55%、89.38%和82.30%。3批重组赖脯胰岛素原料中均未检出四环素的残留。结论成功建立了一种适用于定量检测重组赖脯胰岛素中四环素残留量的微生物学检测方法,且具有良好的准确性。