低抗原含量百日咳疫苗效力评价研究

目的应用改良小鼠脑腔攻击试验(MICA)检测评价低抗原含量百日咳疫苗效力。方法通过中检院和国外实验室平行应用改良小鼠脑腔攻击试验进行不同稀释度相同批次低抗原含量百日咳疫苗的效力,并应用统计软件分析。结果中检院与国外实验室所获得低抗原含量百日咳疫苗的MICA试验效力结果数据均较低(<1.1IU/mL),中检院计算出的效价均在国外实验室分析得出效价的95%可信区间内。结论 MICA方法可应用于低抗原含量百日咳疫苗效力检测分析,该研究为进一步确定中国低抗原含量百日咳疫苗的MICA试验检定标准奠定了基础。

无细胞百日咳疫苗中百日咳毒素活性测定分析

百日咳毒素(pertussis toxin,PTx)是鲍特氏菌属百日咳杆菌产生的一种主要毒力因子,具有多种生物学活性,如淋巴细胞增多促进活性、组胺致敏活性、中华仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell,CHO)簇集作用、胰岛激活作用、T细胞有丝分裂促进作用、红细胞凝集活性等[1-4],是引起百日咳众多临床症状的原因,同时也是无细胞百日咳疫苗(acellular pertussis vaccine,APV)的主要保护性抗原组分[5]。

抗破伤风类毒素单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备抗破伤风类毒素单克隆抗体,并对其进行鉴定。方法:用破伤风类毒素免疫BALB/c小鼠,经细胞融合及筛选,将阳性杂交瘤细胞株扩大培养后免疫BALB/c小鼠,收获的腹水用Protein G柱纯化;对获得的单克隆抗体进行鉴定,对杂交瘤细胞株进行稳定性检测。结果:筛选出5株稳定分泌抗破伤风类毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为T1、T2、T3、T4、T5,其分泌的单克隆抗体分别为IgG1、IgG2b、IgG1、IgG2b和IgG1亚类,轻链均为к型;均与百白破疫苗中的T抗原具有较好的反应,与D抗原、PT抗原、FHA抗原和PRN抗原无交叉反应;其中2株单克隆抗体为中和性抗体。结论:获得5株抗破伤风类毒素单克隆抗体,其中2株为中和性抗体,为破伤风疫苗效价检测新方法的建立等奠定了基础。

联合疫苗研发关键技术

目前国内外已上市的各种联合疫苗有几十种,其主要目标是简化免疫程序、提高疫苗接种的便利性和依从性,从而提高疫苗接种率,为人类提供更全面更及时的保护。联合疫苗按照所含抗原种类分为细菌蛋白组成的联合疫苗、细菌多糖组成的联合疫苗、病毒组成的联合疫苗以及不同类别成分组成的联合疫苗,如蛋白-多糖成分组合、蛋白-病毒成分组合、蛋白-多糖-病毒成分组合等。本文从联合疫苗开发的基本原则、研发关键技术路线及研发所面临的挑战几个方面进行综述,为我国新型联合疫苗的研发策略提供技术参考。

百日咳鲍特菌基因组多态性分析

目的了解百日咳鲍特菌(简称百日咳杆菌)基因组特征。方法应用百日咳杆菌等位基因分型法和多位点可变数量串联重复序列分析(MLVA)法分析百日咳杆菌基因多态性,同时对2种分型方法的多态性指数进行统计学分析。结果百日咳黏附素(Prn)、支气管黏附因子(tcfA)和百日咳毒素基因上游启动子区域(ptxP)3种等位基因序列分析结果显示,共发现3种等位基因组合型:Prn1/ptxP1/tcfA2、Prn2/ptxP3/tcfA2和Prn3/ptxP1/tcfA2,所占比例分别为71.43%、19.05%和9.52%。MLVA法将21株分离菌株分成了12个不同的MLVA型,MLVA-136型和MLVA-152型为主要流行MLVA型,所占比例分别为28.57%和19.05%,并发现1种新MLVA型菌株。统计学分析表明MLVA法较等位基因分型法具有更高的分辨率。结论国内部分地区百日咳杆菌流行菌株与欧洲其他国家不同,掌握百日咳杆菌分子流行病学的第一手资料,对有效预防和控制百日咳的流行以及制定新的百日咳疫苗免疫策略具有指导意义。

百日咳鲍特菌分子进化与分型的研究进展

随着基因测序技术的迅猛发展，数千种微生物已经完成了全基因组测定，人类从而能够更加深入地认识和了解各种微生物，尤其是百日咳鲍特菌这种基因组高度保守的单形病原菌。

基于Luminex技术的多组分百日咳疫苗血清抗体效价快速检测方法的建立

目的建立基于Luminex技术的多组分百日咳疫苗血清抗体效价快速检测方法。方法将百日咳类毒素(pertussis toxin,PT)、丝状血凝素(filamentous haemagglutinin,FHA)、百日咳杆菌黏附素(pertactin,PRN)、百日咳菌鞭毛蛋白2,3型(fimbrial-2 and fimbrial-3,FIM 2,3)分别与4种不同型号的微球耦联,耦联的抗原在同一孔中与血清孵育,通过生物素标记抗体和链霉素标记藻红蛋白双重识别,用Luminex荧光检测得到荧光中位数值(MFI),进行效价分析,并通过百日咳标准血清建立五组分百日咳疫苗血清抗体检测的标准曲线。采用ELISA法检测同一组血清样品中的抗体效价,并对两种方法的检测结果进行比较。结果与ELISA法相比,Luminex法的线性范围更宽。两种方法检测五组分百日咳疫苗血清抗体效价的分布范围接近,Luminex法检测50份五组分百日咳疫苗免疫小鼠血清抗体效价的平均值分别为PT 65.365 IU/ml、FIM 15.052 IU/ml、FHA 545.236 IU/ml、PRN 7.876 IU/ml,ELISA法检测的平均值分别为PT 72.640 IU/ml、FIM 16.480 IU/ml、FHA 589.474 IU/ml、PRN 7.345 IU/ml,两种检测方法的检测结果具有良好的相关性,相关系数(R2)分别为:PT 0.905 8、FIM 0.979 1、FHA 0.930 9、PRN 0.997 6。结论与ELISA法相比,基于Luminex的多重分析物的检测方法具有减少样品消耗量、节省成本和测定时间、使多种目标分子之间相关性的分析更准确等优点,可用于五组分百日咳疫苗血清抗体效价的检测。

百日咳细胞免疫的研究进展

近年来,随着研究的深入,特异性细胞免疫在百日咳感染和疫苗诱导的免疫保护等方面的作用越来越引起人们的重视。本文就百日咳杆菌主要毒力因子在诱导细胞免疫及免疫调节中的作用、百日咳感染及疫苗免疫接种后诱导产生的细胞免疫应答等方面的研究进展作一综述。

百日咳鲍特菌黏附分子的研究进展

随着生物技术的发展,研究人员对百日咳鲍特菌致病机理进行了大量研究并取得一定的突破,尤其是黏附分子在细菌致病过程中所起的作用。本文就近年来在百日咳鲍特菌黏附分子的研究进展作一简要综述。

百日咳黏附素的原核表达及其单克隆抗体的制备

目的原核表达百日咳黏附素(Pertactin,Prn),并制备抗Prn单克隆抗体。方法从无细胞百日咳疫苗生产菌株CS株基因组DNA中克隆Prn基因,插入表达载体pQE-30中,构建重组表达质粒pQE-30-Prn,转化E.coli M15,IPTG诱导表达。表达的重组Prn蛋白经阳、阴离子交换层析纯化后,采用Western blot和ELISA法鉴定重组Prn蛋白的反应原性。以纯化的重组Prn蛋白为免疫原,利用杂交瘤技术制备单克隆抗体,并对制备的单抗进行鉴定。结果重组表达质粒经双酶切和测序鉴定构建正确;表达的重组Prn蛋白相对分子质量约为69 000,主要以包涵体形式表达;纯化的重组Prn蛋白的纯度达95%以上,产量可达25 mg/L,能与不同来源的抗Prn-Ab血清特异性结合。获得2株分泌抗Prn单抗的杂交瘤细胞株,分泌的单抗均为IgG1类,轻链类型均为κ,效价均达1∶105以上,并能特异性识别Prn蛋白,而与百日咳杆菌其他抗原蛋白无交叉反应。结论原核表达、纯化了重组Prn蛋白,并制备了2株效价高、特异性强的单抗,为无细胞百日咳疫苗的质量控制及百日咳杆菌致病机制的研究提供了材料。