慢性戊型肝炎的研究进展

戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)引起的戊型肝炎一直被认为是一种急性自限性感染过程,然而最近发现,器官移植、人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)感染者等免疫力低下的患者感染HEV能够发展为慢性戊型肝炎.有些慢性戊型肝炎病例肝脏快速纤维化而出现肝硬化,并最终导致肝脏衰竭.患者免疫抑制作用减弱,免疫功能恢复有助于体内持续存在的HEV清除.研究发现干扰素和利巴韦林对治疗慢性戊型肝炎有效.

对斑点杂交方法检测治疗性单克隆抗体制品中残留宿主细胞DNA含量的影响因素研究

目的:对斑点杂交方法检测重组生物制品中残留宿主细胞DNA含量试验中的6个影响因素进行评价。方法:对不同的样品稀释液,样品中是否含有蛋白,含蛋白样品是否采用蛋白酶K处理,采用不同方法预处理的模板DNA作为标记用模板,采用不同体积的离心管进行探针标记,分别采用不同的杂交温度,共计6个因素对检测结果的影响进行评价。结果:在使用随机标记的探针通过斑点杂交方法检测重组生物制品中残留宿主细胞DNA含量试验中:标准品和样品稀释中使用水进行稀释时结果可信度较高;样品中含有蛋白会降低检测的灵敏度;在含蛋白样品中加入蛋白酶K处理可以在一定程度上提高检测的灵敏度;使用超声处理的模板DNA作为探针标记的模板时,检测灵敏度较高,同时背景较低;探针标记过程中应采用0.2 mL薄壁PCR管作为容器以保证试验成功率;最适的杂交温度为42℃左右。结论:在斑点杂交方法检测治疗性单克隆抗体制品中残留宿主细胞DNA含量中,采用水作为稀释液,对含蛋白样品使用蛋白酶K消化,标记用模板DNA使用超声处理,使用0.2 mL薄壁PCR管作为标记反应管和在42℃杂交时,结果的稳定性和灵敏度有较大提高。

干细胞外泌体在抗皮肤老化中作用的研究进展

外泌体作为干细胞分泌的纳米级别囊泡样物质,富含参与细胞间交流的各种信号,且规避了干细胞移植治疗中存在的风险,具有巨大的应用前景。该文简述了外泌体的生物学特性,回顾了干细胞来源的外泌体对皮肤成纤维细胞功能、细胞外基质降解及抗氧化等方面的影响及分子机制研究进展,表明干细胞来源的外泌体作为无细胞治疗的替代方法,在抗皮肤老化中起着重要的作用。

重组细胞中鼠细小病毒检测方法的建立及初步应用

目的建立生物技术产品用重组细胞中鼠细小病毒(Murine minute virus,MMV)污染的检测方法,并进行验证及初步应用。方法以NB324K细胞为指示细胞,建立MMV感染性检测方法,并以不同CCID50的MMV分别感染NB324K细胞,验证方法的灵敏度;通过设计针对编码非结构蛋白1(Non-structural protein 1,NS1)保守序列的引物和探针,建立用于重组细胞中MMV检测的实时荧光定量PCR,并对其线性、特异性、精密性、灵敏度、最低检测限及试验可行性和干扰性进行验证;将NB324K细胞感染试验与荧光定量PCR法相结合,建立NB324K细胞感染-PCR法,并通过对大量样本的检测,分析荧光定量PCR法和NB324K细胞感染-PCR法的可行性。结果 NB324K细胞感染试验的灵敏度为0.2 CCID50;荧光定量PCR检测方法最佳线性范围为1×108～1×104拷贝/μl,R2达0.99以上,特异性良好,与其他种属的细小病毒均无交叉反应,试验内和试验间Ct值的变异系数(CV)均小于5%,试验内病毒定量拷贝数的CV在20%～30%之间,试验间病毒定量拷贝数的CV在20%～50%之间,灵敏度为5×103拷贝/μl,最低感染性病毒颗粒检测限为2 CCID50。该方法能够用于细胞样品中MMV的检测,部分样品基质对病毒的检测具有一定的干扰性。NB324K细胞感染-PCR法的灵敏度为0.02 CCID50,检测时间可缩短为96 h,与荧光定量PCR法分别对47份样品进行检测,结果均为阴性。结论成功建立了MMV荧光定量PCR检测方法和NB324K细胞感染-PCR法,可应用于重组细胞中MMV污染的检测,为进一步提高生产用重组细胞的安全性奠定了基础。

戊型肝炎病毒ORF3蛋白研究进展

戊型肝炎病毒（hepatitis E virus，HEV）是戊型肝炎的病原体，是肝炎病毒科戊型肝炎病毒属的惟一成员，无包膜、正义、单链RNA病毒，病毒基因组全长约7．2kb，由3个开放阅读框ORFl、ORF2和ORF3组成，其中ORFl编码与病毒复制、转录相关的酶等非结构蛋白，ORF2编码660aa的病毒衣壳蛋白，ORF3编码小分子的磷蛋白。

HIV中和抗体评价方法研究进展

诱导广谱有效的中和抗体被认为是预防性疫苗成功的关键,HIV中和抗体检测方法的建立和标准化为HIV疫苗评价和设计提供指导,也为不同HIV疫苗的比较提供了平台。本文从方法的建立、假病毒株的选择、评价标准的制定、评价策略的确定、该方法在HIV其它研究领域的应用等方面,对目前应用最广泛的以假病毒为基础的中和抗体评价方法进行了综述。

HIV-1耐药性的研究进展

HIV-1耐药株的出现是人类艾滋病(AIDS)治疗失败的重要原因之一,HIV-1耐药性的研究对于控制耐药株的流行及临床治疗具有重要意义。本文就HIV-1耐药株的产生、进化和传播,HIV-1的耐药机制及耐药性突变,HIV-1耐药性检测以及新型HIV-1耐药性检测方法等作一综述。

湖北地区人源与猪源戊型肝炎病毒部分基因序列的分析

目的调查湖北地区戊型肝炎病毒(HEV)人源与猪源基因型的流行情况。方法用套式RT-PCR方法对湖北地区25例急性戊型肝炎患者血清和33份用实时荧光RT-PCR检测为HEV核酸阳性的猪血清进行HEV RNA检测。HEV核酸使用QIAamp Viral RNA Mini Kit(QIAGEN)提取,用AMV ReverseTranscriptase(Promega)进行逆转录合成cDNA,所用扩增引物为基于HEV ORF2区域的简并引物,并对阳性产物进行克隆测序,对所得序列进行同源性比较和进化树分析。结果用RT-PCR从25份急性戊型肝炎患者血清和33份猪血清中分别检出HEV RNA阳性者9份和8份。序列分析显示17株戊型肝炎病毒株在ORF2部分区域的核苷酸序列同源性为82%～100%,氨基酸同源性为87%～100%。该17株戊型肝炎病毒序列与HEV 4型代表株的核苷酸序列的同源性为82%～94%,均为HEV 4型,而且人源和猪源HEV均分为相同的4个亚型。进化树分析显示该17株戊型肝炎病毒株分属于4个不同的亚型分支。结论湖北地区人与猪群中流行的HEV基因型以及亚型相同。

5种TNFα单抗及其类似物的TNFα杀伤抑制活性的比较

目的:比较5种以TNFα为治疗靶位的治疗性单抗及其类似物的TNFα杀伤抑制活性。方法:以Anti-TNFαrhmMcAb为参比品,采用TNFα杀伤抑制法测定其他4种制品的TNFα杀伤抑制活性,剂量-反应曲线进行四参数拟合后,测定抑制1.0 ng·mL-1TNFα杀伤的半数有效浓度(EC50)。以Anti-TNFαrhmMcAb的EC50值除以待测样品EC50值计算样品的相对活性。结果:相对于Anti-TNFαrhmMcAb,TNFαⅡR-Fc、Anti-TNFαrhuMcAb、Anti-TNFαsrhmMcAb和Anti-TNFαarhuM-cAb的TNFα杀伤抑制活性分别为4860%,248%,505%,90%。结论:TNFα杀伤抑制方法可以快速测定治疗性抗TNFα单抗及其类似物的TNFα杀伤抑制活性,不同制品的测定结果之间具有一定可比性,可以根据测定结果对不同制品的生物学活性进行评价和比较。