基于动物实验和网络药理学研究艾纳香对急性肝损伤保护作用机制

[目的]基于动物实验和网络药理学的方法研究艾纳香对于急性肝损伤(ALI)的保护作用及潜在机制。[方法]腹腔注射CCl4构建小鼠急性肝损伤动物模型,通过观察小鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平变化,初步探究艾纳香对急性肝损伤的保护作用。采用网络药理学方法检索艾纳香活性成分,预测作用靶点,构建“药物-活性成分-疾病-靶点”网络、蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,利用分子对接方法对所得化合物和靶点进行对接验证,通过基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,进一步探究艾纳香治疗ALI的作用机制。[结果]实验结果证明艾纳香可明显缓解CCl4诱导的急性肝损伤,降低小鼠血清ALT、AST水平,差异具有统计学意义(P<0.05);网络药理学分析获得艾纳香的主要活性成分36个,关键成分10个,包括羟基芫花素、木犀草素、山奈酚、芫花素、华良姜素、槲皮素-3,3’-二甲醚、金圣草素、香叶木素、圣草酚、5,3’-二羟基-7,4’-二甲氧基黄酮;艾纳香作用靶点171个,筛选核心靶点10个,包括丝氨酸/苏氨酸激酶(AKT1)、血管内皮生长因子A(VEGFA)、表皮生长因子受体(EGFR)、雌激素受体(ESR1)、半胱氨酸蛋白酶(CASP3)、白细胞介素-1β(IL-1β)、热休克蛋白90α家族A级成员1(HSP90AA1)、缺氧诱导因子1(HIF1A)、丝裂原活化蛋白激酶3(MAPK3)、原癌基因酪氨酸激酶(SRC);GO分析显示生物过程主要富集在蛋白磷酸化、氮化合物的细胞反应、细胞迁移的正向调节,KEGG富集涉及癌症通路、PI3K-Akt信号通路、癌症中的微小RNA、脂质和动脉粥样硬化、MAPK信号通路等通路。[结论]研究初步证实艾纳香提取物对CCl4所致急性肝损伤产生显著的保护作用,其可能是通过调控AKT1、VEGFA等核心靶点及癌症、PI3KAkt等信号通路,减轻炎症反应、抑制氧化应激,从而产生肝保护作用。

基于靶点机制的抗阿尔茨海默病天然活性成分研究进展

阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)作为神经系统退行性疾病,发病率随着年龄增长而显著增加,且死亡率亦随之升高,是当前全球性的公共卫生和社会性问题。AD发病机制复杂,涉及多层次多靶点。而天然产物中存在丰富多样的靶向AD的活性成分,是抗AD新药发现的源头,具有非常重要的研究价值和应用潜力。本文以AD不同发病机制假说中涉及的各类靶点为切入点,对近年来发现的单靶点和多靶点抗AD的天然活性成分进行总结评述,并展望其发展前景,以期为抗AD药物研发提供参考。

疑似蛇毒液样品的纳升级超高效液相色谱-高分辨质谱分析鉴定

针对5个疑似蛇毒毒液及其沾染样品,基于纳升级超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(Nano LC-MS/HRMS)技术,结合尺寸排阻色谱分离,建立了一种蛋白质种类及物种归属的严格鉴定方法。5个样品经尺寸排阻色谱分离后均得到3个洗脱峰,分别冻干后以胰蛋白酶进行溶液内酶解处理并进行液相色谱-高分辨质谱分析鉴定。首先采用全扫描-数据依赖型MS/MS(Full MS/dd MS^(2))采集模式对样品中的肽段信息进行非靶向采集,依次与Swiss-Prot、蛇亚目(Serpentes)、游蛇科(Colubroidea)、眼镜蛇科(Elapidae)、眼镜蛇亚科(Elapinae)、眼镜蛇属(Naja)蛋白质数据库逐级收缩比对;再筛选符合肽谱匹配度、肽段错误发现率小于1%和特征肽段数目大于等于2的蛋白质,共鉴定到32种蛋白质均来自中华眼镜蛇(Naja atra),可归属于Naja atra的10个家族,主要为三指毒素、金属蛋白酶、磷脂酶A2等。最后,采用平行反应监测模式选取每种蛋白质的两条特征肽段进行靶向验证,当两条特征肽段均满足“至少75%的y^(+)和b^(+)离子的Δm/z小于5 ppm”时,方认为鉴定到了样品中的某一蛋白质。最终鉴定出5个样品均含有Naja atra蛇毒。此鉴定方法研究系统、严格,可为蛇毒中毒司法鉴定以及蛇毒药物研究等提供有效的技术支持。

基于倾向性评分匹配法筛选高尿酸血症的差异核心菌群

目的基于16S rDNA V3+V4区二代测序技术和倾向性评分匹配法,筛选高尿酸血症患者和非高尿酸血症人群的差异核心菌群。方法采用Illumina HiSeq二代测序技术分析肠道菌群组成和丰度;使用倾向性评分匹配法对高尿酸血症患者和非高尿酸血症人群进行1∶1匹配,R edgeR和bnlearn包筛选高尿酸血症的差异核心菌群;运用PICRUSt平台对差异核心菌群进行功能预测。结果在属水平上,Fla⁃vonifractor、Acidaminobacter、Bilophila为差异核心菌群且均在高尿酸血症患者中上调;Signal Transductiona、Two⁃component system、Carbon fixation in photosynthetic organisms、Glycolysis/Gluconeogenesis、Fructose and mannose metabolism等通路高尿酸血症组均高于对照组。结论高尿酸血症患者与非高尿酸血症人群的差异核心菌群为Flavonifractor、Acidaminobacter和Bilophila,其发病机制与碳水化合物和能量代谢等通路显著相关。

2型糖尿病肌少症中西医结合研究进展

肌少症作为2型糖尿病(T2DM)的慢性并发症,严重降低老年人生活质量,加重医疗及社会负担。目前,西医对于肌少症诊断标准尚无统一认识,具体病因病机仍不明确,尚无针对性治疗方法。糖尿病会刺激老龄患者肌肉丢失加重,出现肌肉与脂肪成分改变。而血糖相较于年龄,可能对骨骼肌损害更为严重。骨骼肌作为胰岛素最大的靶器官,肌肉蛋白质代谢紊乱可能是糖尿病肌少症关键病机。中医认为“脾主肌肉”,临床观察与T2DM肌少症发病的可能机制高度相关,且可用于中医内外治疗的理论指导。通过对糖尿病肌少症中西医研究进展综述,旨在为疾病机制阐释及中医防控提供新思路。

汉族与蒙古族肠道菌群结构差异分析

目的探究汉族和蒙古族人群的肠道菌群差异,为种族-微生物群假说以及以菌群为研究对象的疾病机制研究提供依据。方法采集同一地区三代纯系汉族和蒙古族共28例志愿者的粪便样本,放置-80℃冰箱保存,并提取粪便菌群的DNA,使用PCR扩增技术,得到16S rRNA基因的V3+V4区PCR扩增产物,之后使用HiSeq2500高通量测序,原始序列使用USEARCH软件生成97%相似度的OTU表,并注释,使用R语言中vegan包作Alpha、Beta多样性分析,edgeR包作差异OTU分析,从而尝试筛选出民族差异菌群。结果汉族与蒙古族组肠道菌群中共有309个差异OTU,结果证明汉族和蒙古族人群的肠道菌群存在差异,蒙古族肠道菌群中显著高于汉族组的是细菌属有:梭菌Ⅳ(ClostridiumⅣ)、副杆状菌属(Parabacteroides)、枝菌属(Alistipes),显著低于汉族组的有:瘤胃球菌属(Ruminococcus)、克雷白氏杆菌(Klebsiella)、布劳特氏菌属(Blautia)、毛螺旋菌属(Parasutterella)。结论提示菌群和疾病机制的关联研究应将民族作为潜在影响因素,另外本研究部分验证了种族-微生物群假说。

抗阿尔兹海默症藏药三味豆蔻汤的化学成分分析研究

三味豆蔻汤作为藏药的经典方剂,由药材豆蔻、香旱芹、荜茇和牦牛奶熬煮制成,其对阿尔兹海默症(Alzheimer′s disease,AD)具有一定的治疗作用。该方剂化学成分复杂且极性、挥发性差异大,相关的物质基础研究较少。该研究分别采用气相色谱-质谱(GC-MS)、超高效液相色谱-高分辨串联质谱(UPLC-HRMS/MS)技术针对三味豆蔻汤中不同极性组分进行检测分析,以了解其物质组成。结果显示:从三味豆蔻汤中共发现并鉴定出99个化学成分,分别为豆蔻和香旱芹中含有的含氧单萜和单萜烯类成分(如桉油精)、荜茇的生物碱类成分(如胡椒碱)以及牦牛奶含有的脂类成分(如甘油三酯等)。该结果可为了解三味豆蔻汤的药效物质基础提供重要依据。

野罂粟碱对哮喘和溃疡性结肠炎模型大鼠肺及结肠组织相同差异表达基因的干预作用

目的通过野罂粟碱调控呼吸道疾病与炎性肠病探讨中医归经理论的分子内涵,分析两类疾病动物模型在治疗后共同差异表达基因的变化从而揭示肺、肠相关联的分子机制。方法采用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)雾化法建立过敏性哮喘模型并与复合免疫法建立的溃疡性结肠炎模型相比较,以正常大鼠作为对照。经野罂粟碱给药后,经反转录聚合酶链式反应技术(RT-PCR)检测两组模型大鼠肺组织和肠组织中共同差异表达基因mRNA表达水平。结果野罂粟碱能够明显改善大鼠肺组织和结肠组织病变,通过KEGG注释分析测序结果最终得到三个关键差异表达基因分别是C-C基序趋化因子11,碳酸酐酶1,核激素受体亚家族D组成员1,RT-PCR结果与转录组测序结果上下调情况基本一致,且野罂粟碱显著降低两组模型大鼠肺和结肠组织Ccl11 mRNA表达水平(P<0.05)及升高Ca1和Nr1d1 mRNA表达水平(P<0.05,P<0.05)。结论呼吸道疾病与炎性肠病模型大鼠的肺、肠组织具有相同差异表达基因,野罂粟能显著调节肺与大肠共同差异表达基因的水平,这可能是野罂粟归肺与大肠经的分子机制之一。

基于MaxEnt生态位模型预测蒙药白益母草潜在分布研究

目的:对蒙药白益母草基原植物脓疮草Panzerina lanata var.alaschanica进行适宜性分布研究,为其资源保护和合理开发利用提供参考。方法:利用近年来采集到的96个脓疮草分布信息,采用MaxEnt生态位模型,结合当代和2050年SSP2-4.5、SSP5-8.5情景下的19个生物气候数据,预测脓疮草在我国的潜在分布区域及适生等级。结果:MaxEnt模型精度评价AUC值为0.983,表明模型运算准确度高,分析结果可靠;脓疮草的生长主要受年均温、温度季节性变化、温度年较差、最冷季度均温和最湿月降水量的影响;脓疮草当代潜在分布区面积占全国总面积6.86%。最佳适生区占全国总面积1.74%。在2050年SSP2-4.5和SSP5-8.5气候条件下,脓疮草潜在分布区面积占全国总面积分别为10.41%,8.38%,最佳适生区占全国总面积分别为1.31%、0.87%。结论:脓疮草当代主要分布在内蒙古自治区阿拉善左旗、鄂尔多斯市等区域。2050年SSP2-4.5和SSP5-8.5气候条件下,脓疮草最佳适生区面积减小,并呈现向北迁移的趋势,故应该加强脓疮草资源保护工作,以防止其资源趋于濒危。

新型生物碱提取分离研究进展

生物碱作为一类结构类型多样的含氮类有机化合物,具有明显的生理药理活性,在新药研发中占据非常重要的地位。天然植物是生物碱发现及筛选的重要源头,但其中生物碱含量低,提取分离方法的选择尤为重要。本文对近年来发现的一些新活性生物碱进行了总结。在此基础上,对它们的提取分离方法进行了分析和评述,以期为新生物碱的进一步发掘提供参考借鉴。

斑马鱼在血液系统研究中的应用

斑马鱼为一种硬骨淡水鱼,其胚胎透明、发育和繁殖快,且70%以上的基因与人类相同。目前广泛地应用于遗传、发育、毒理、环境污染以及药物筛选等方面的研究。本文归纳整理斑马鱼血液系统常用的实验技术和检测方法,同时介绍与斑马鱼血液系统研究相关的常用斑马鱼转基因品系,以期为本领域的研究提供参考,促进斑马鱼在生命科学领域的应用。

刮痧疗法治疗原发性高血压的研究概况

传统医学对原发性高血压治疗有着独到的疗效,本文以刮痧为例,综述近年来高血压病的传统医学研究进展,以此说明传统医学疗法对高血压病的疗效明显,毒副作用小,且降压效果平稳。

基于石墨烯纳米酶效应构建民族药醉马草抗氧化活性测定方法

目的利用石墨烯纳米酶优良的类过氧化物酶活性,构建药物抗氧化活性测定新方法;并实际用于民族药醉马草抗氧化活性的测定。方法在优化H2O2浓度和反应时间的基础上,对18批醉马草样品进行抗氧化活性测定。同时采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)法作为方法对照。使用Bland-Altman、Passing-Bablok回归法,对2种方法测定结果进行比较。结果利用纳米酶法,测得18个批次醉马草的抑制率在37.28%~71.58%,平均值为50.87%,中位数为47.09%;利用DPPH法,测得的自由基清除率在36.06%~83.11%,平均值为54.89%,中位数为50.83%。统计结果显示,纳米酶法和DPPH法的测定值相近;2种方法之间存在线性关系,且可以通过Passing-Bablok回归法实现不同方法的相互转化。结论成功将石墨烯纳米酶应用到抗氧化活性检测,避免了试剂光敏感问题,缩短了反应时间,减少了药材用量,且结果与经典DPPH法一致。同时也显示了醉马草具有抗氧化活性,为进一步探究其生物活性奠定了基础。

氧化石墨烯基质毛细管电色谱胰蛋白酶微反应器的性能研究

基于石墨烯优良的物化性能,利用层层组装法将氧化石墨烯修饰于石英毛细管内壁,制备了氧化石墨烯基质的毛细管电色谱,通过电渗流、拉曼光谱等对其进行表征。在此基础上,基于离子键合法将胰蛋白酶固定于毛细管电色谱柱头,制备胰蛋白酶微反应器。两者结合构成毛细管电色谱胰蛋白酶微反应器。实验结果显示,氧化石墨烯作为基质既可提高样品的分离效率,还能促进胰蛋白酶的催化性能。氧化石墨烯修饰的毛细管电色谱对N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯盐酸盐(BAEE)和N-苯甲酰-L-精氨酸(BA)混合物的分离度从裸毛细管的3.70提升至4.71,而其固定化酶活性(米氏常数Km=1.10mmol/L,最大反应速率Vmax=0.32mmol·L^-1·s^-1)也明显优于裸毛细管(Km=109.77mmol/L,Vmax=0.00046mmol·L^-1·s^-1)。利用所制备的微反应器从10种中药材中筛选胰蛋白酶抑制剂活性成分的药材,结果发现三七和大黄中均存在胰蛋白酶抑制剂活性成分。

汉族与藏族健康人群肠道菌群结构的差异

目的探究汉族和藏族健康人群肠道菌群差异,为种族-微生物群假说以及以菌群为研究对象的疾病机制研究提供参考。方法采集同一地区汉族和藏族健康志愿者粪便样本共133例,通过倾向性评分匹配法(propensity score matching,PSM)筛选出42例样本,其中,汉族样本14例,藏族样本28例。通过对样本DNA的16S rRNA基因V3+V4区高通量测序后,生成OTU表并注释。在分析Alpha、Beta多样性基础上,使用R语言的DESeq2包和edgeR包进行汉族和藏族的肠道菌群差异分析;通过bnlearn包、psych包和reshape2包进行网络分析,筛选与民族因素密切相关的菌群,通过LEfSe分析鉴定物种在属水平上的民族生物标志物。最后通过IDBA-UD软件将高质量数据进行拼接组装,使用CD-HIT软件构建非冗余基因集,使用PICRUST分析,获得代谢通路信息和GO注释结果。利用STAMP软件进行组间差异分析,比较两组代谢通路的差异。结果汉族和藏族肠道菌群共有199个差异OTU,证明汉族和藏族人群的肠道菌群存在差异。藏族肠道菌群中瘤胃球菌属(Ruminococcus)、厌氧支原体属(Anaeroplasma)、变形杆菌属(Proteobacteria)显著高于汉族;丁酸蓖麻单胞菌(Butyricimonas)、粪厌氧棒杆菌(Anaerostipes)、小杆菌属(Dialister)显著低于汉族。与民族因素密切相关的菌群有普氏菌(copri)、粪普雷沃氏菌(stercorea)、副流感嗜血杆菌(Haemophilus parainfluenzae)等。藏族在属水平上菌群标志物为假丁酸弧菌(Pseudobutyrivibrio)、琥珀酸弧菌属(Succinivibrio)、伯吉古菌(Catenibaterium);汉族属水平上的生物标志物为小杆菌属(Dialister)、血尿杆菌(Turicibacter)。差异代谢通路共有10个,在藏族组中显著上调的通路有酶家族、复制和修复、转化、核苷酸代谢、萜类化合物和聚酮类化合物的代谢。结论本研究部分验证了种族-微生物群假说,菌群与疾病的相关研究应考虑民族因素的影响。

响应面法优化蒙药白益母草总生物碱超声提取工艺

目的:建立蒙药白益母草中总生物碱的含量测定方法,考察蒙药白益母草总生物碱提取条件,以期为白益母草的总生物碱含量测定和质量控制提供实验依据。方法:以盐酸水苏碱为总生物碱含量测定的标准对照品,利用分光光度法测定白益母草中总生物碱含量,以总生物碱提取量为评价指标,选取乙醇浓度、料液比、提取时间为考察因素,采用单因素试验考察单因素最佳水平,采用Box-Behnken响应面法多指标综合考察最佳提取条件。结果:盐酸水苏碱在0~72 mg·L^(-1)范围内具有良好的线性关系(r=0.9999),回归方程为Y=-0.6345 X。白益母草总生物碱单因素考察表明70%乙醇提取、超声50 min、20倍(以上)料液比可获得最佳提取效果。响应面试验分析结果表明,乙醇浓度60%、料液比1∶15.52、提取时间50 min为白益母草总生物碱最佳提取条件,乙醇浓度与提取时间之间存在交互作用,乙醇浓度与料液比和料液比与提取时间之间无显著交互作用。结论:蒙药白益母草总生物碱的最佳提取工艺为:乙醇浓度60%、料液比1∶16、超声50 min。本提取方法操作简便,提取率高,可为白益母草的总生物碱含量测定和质量控制提供参考。

基于LC-MS/MS分析壮药龙钻通痹颗粒的化学成分

目的采用液相色谱-串联质谱联用(LC-MS/MS)技术分析壮药经典方剂龙钻通痹颗粒的化学成分。方法使用ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm)及体积分数0.1%甲酸水(A)-0.1%甲酸乙腈(B)流动相系统对供试品溶液进行梯度洗脱,而后在正负离子模式下采集MS/MS数据。结果通过高分辨质谱数据解析、对照品及数据库比对,同时参考文献已报道的化合物裂解规律,共鉴定出113个化合物,包括生物碱类64个、黄酮类20个、有机酸类12个、香豆素类8个、木脂素类5个及其他类4个,并对其中的109个次生代谢产物进行归属识别。结论龙钻通痹颗粒物质基础丰富,以生物碱类成分为代表,且飞龙掌血为其重要“主药”,以上可为此方剂的药效机制研究与临床合理使用提供科学依据。

相思子毒素的分析检测技术及毒性机制与解毒对抗措施研究进展

相思子毒素是目前已知毒性最强的植物毒素蛋白,受到国际《禁止化学武器公约》和《禁止生物及毒素武器公约》共同关注,亟须有效的检测和解毒对抗措施,以应对其对于人类健康和公共安全的潜在威胁。该文在文献聚类研判的基础上,结合对相思子毒素的多种亚型结构的认识,对其分析检测技术、毒性机制、解毒对抗措施进行了全面综述,最后阐述了该领域的难点及发展趋势。目前主要的相思子毒素分析检测技术包括亲和分析、理化分析以及活性检测技术三大类,亟须发展灵敏特异准确的结构与活性测定技术方法,以准确厘清毒素威胁。目前尚无有效解毒剂,治疗仅为对症治疗。研发中和抗体仍然是对抗其中毒最有潜力的手段。

苦味受体调控巨噬细胞功能及其作用机制的研究进展

苦味受体/2型味觉受体(type 2 taste receptors,T2Rs)是一类G蛋白偶联受体,最初在味蕾细胞中被发现,现已证实在多种组织中表达并发挥功能。本文重点探讨了T2Rs在巨噬细胞中的表达水平、分布特征,以及T2Rs激动剂调节巨噬细胞的功能和作用机制,包括增强吞噬作用、诱导趋化性定向运动和调节巨噬细胞极化等,可能涉及NF-κB、PI3K/Akt和JAK/STAT等通路,但仍需更多数据支撑。T2Rs对巨噬细胞的调控作用虽已初显,但T2Rs亚型的作用规律尚不明晰。未来研究可从明确T2Rs亚型与巨噬细胞特定功能的对应关系、探究其调节巨噬细胞的具体分子机制、揭示在疾病进程中的详细机制等角度深入,为开发以T2Rs为靶点的新型药物奠定基础。

藏药名方七十味珍珠丸减重金属后干预D-半乳糖/亚硝酸钠诱导痴呆小鼠的作用及机制研究

目的:藏药名方七十味珍珠丸中含多种重金属问题是藏药现代化研究的热点和难点,本研究旨在探明藏药名方七十味珍珠丸减重金属后对痴呆小鼠模型的促智作用及机制。方法:以D-半乳糖/亚硝酸钠诱导复制C57/BL6小鼠的阿尔茨海默病模型,动物分为正常对照组、模型对照组、七十味珍珠丸60 mg/kg组、无重金属七十味珍珠丸60 mg/kg组,灌胃给药8 w后,进行行为学评价,用HE染色、ELISA试剂盒、Western blot法检测脑组织关键因子和蛋白的表达;并利用氧糖剥夺/再复氧诱发的BV2细胞损伤模型,评价无重金属七十味珍珠丸处理对细胞活力的影响。结果:与正常对照组相比,OGD/R处理后,模型对照组BV2细胞数目减少,形态改变,出现触角和突触,发生细胞激活,且出现较多细胞死亡,BV2细胞活力显著降低(P<0.01),模型对照组小鼠自发交替反应率显著降低,小鼠进入新臂的次数显著降低,小鼠僵直总次数和僵直时间所占百分比显著降低,小鼠脑组织Glu活力、AchE含量显著增加(P<0.01),脑组织BDNF、BCL-2蛋白表达显著下调,Caspase-3蛋白表达显著上调(P<0.01);与模型对照组相比,无重金属七十味珍珠丸60 mg/kg组显著提高小鼠的认知功能、逆转脑组织形态损伤;降低脑组织Glu、AchE含量,上调脑组织BDNF、BCL-2表达,下调Caspase-3表达,显著增加细胞活力,明显减轻BV2细胞损伤(P<0.05或P<0.01)。结论:无重金属七十味珍珠丸组对D-半乳糖/亚硝酸钠诱导的痴呆小鼠有一定的保护作用,对氧糖剥夺/再复氧诱导的BV2细胞损伤也有保护作用,且在活性方面无重金属七十味珍珠丸样品类似原方。其机制可能与改善大脑海马齿状回功能神经元结构紊乱、逆转模型动物脑内Glu和AchE紊乱,调控海马区BDNF、BCL-2和Caspase-3蛋白表达,减轻胶质细胞过度活化有关。