shRNA干扰Jurkat细胞株MDM2表达对细胞生物特性的影响

目的研究MDM2基因与白血病细胞生物学特性的关系。方法应用pSilencer4.1CMVneo构建MDM2shRNA表达载体pMDM2shRNA,采用脂质体将载体导入Jurkat细胞,利用G418筛选出稳定表达shRNA细胞后,行RTPCR和Westernblot等技术检测细胞MDM2表达水平、基础生长曲线、细胞周期变化以及UV照射后细胞生长变化。结果发现转染pMDM2shRNA的细胞MDM2mRNA及蛋白质的表达均下降>50%,细胞的生长减慢,出现一定程度的G1～S期阻滞,DNA损伤后细胞恢复较慢。结论MDM2基因表达下降后,可导致细胞增殖减慢以及降低损伤修复的能力;细胞内表达shRNA可长期敲低靶基因的表达,可作为较理想的基因功能研究细胞模型。

注射用硫酸链霉素白蛋白微球的研究

用分散剂法制备了链霉素白蛋白微球,并测定了微球一些物理性质包括微球大小、分布与表面状态。结果表明微球在10～30μm范围内,药物含量为20.3±0.16%。完成了体外释药试验,同时用荧光素异硫氰酸盐与^(125)Ⅰ标记微球进行大鼠体内分布实验。实验证实微球主要集中在肺组织,这对于提高链霉素的疗效降低其毒副作用有重要的意义。

雌激素激活血管eNOS的机制

大量临床和基础研究证实雌激素具有显著的心血管保护效应,且该效应至少部分是通过增加血管内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表达和活性进而释放NO产生的。雌激素既可通过基因效应调节eNOS的表达,也可通过位于内皮细胞质膜微囊(caveolae)的ERα的一个亚群介导的非基因效应调节eNOS的活性。非基因效应与MAPK,PI3K/Akt等信号通路及内皮细胞质膜微囊密切相关,雌激素也可直接通过调节微囊蛋白-1表达而对eNOS的激活起负性调节作用。

贵州土家族葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因突变型

目的研究贵州土家族葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)基因致病突变型,检测G6PD缺乏症发生率及基因频率。方法通过硝基四氮唑蓝纸片法对2 789例土家族男性进行G6PD缺乏症定性筛查,用变性高效液相色谱技术和DNA测序对78例个体进行基因突变型鉴定。结果在2 789例纯系土家族男性中,发现2例酶活性异常。在印江县采集的78例(2例酶活性异常和76例正常)纯系土家族男性血样中,共检出G6PD c.1388G>A突变2例、c.1376G>T突变1例和c.1311C>T/IVS 11+93T>C突变2例,基因突变型分别占2.6%、1.3%和2.6%。结论在贵州土家族人群中发现c.1388G>A、c.1376G>T和c.1311C>T/IVS11+93T>C 3种突变型,是共同存在于中国人群的G6PD基因突变型,中华民族可能源于共同的祖先;贵州省印江县土家族男性G6PD缺乏症的基因频率为6.5%,可为上述地区G6PD缺乏症的防治提供依据。

锁核酸探针实时荧光定量PCR检测HBV基因变异

目的描述并评价锁核酸(locked nucleic acid,LNA)探针实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)检测乙型肝炎病毒(HBV)204位基因突变的方法及特点。方法分别用直接测序法、LNA探针实时荧光定量PCR检测109例接受拉米夫定(LAM)治疗6个月以上的慢性乙型肝炎患者的血清样本。结果 LNA探针实时荧光定量PCR能检测HBV野生型YMDD和其突变型YVDD、YIDD,而且这种方法还可以检测HBV野生型和变异型的混合。LNA探针相比普通探针在检测野生型和突变型混合样本方面更敏感,区分度更好。结论 LNA探针实时荧光定量PCR检测YMDD变异具有快速、灵敏等特点,可以用于大量临床样本的快速筛查,在监测拉米夫定治疗疗效及发现新耐药突变型等方面具有广泛的应用前景。

致死性心律失常与离子通道相关基因遗传缺陷

细胞膜离子通道功能异常是导致心脏电生理异常的原因之一 ,近年来发现越来越多的心脏结构正常的心性猝死与遗传缺陷相关 ,可能的机制为基因突变导致离子通道相关蛋白功能异常。基因缺陷者有遗传性心律失常疾病 ,为猝死的高危人群。