5个X-STR基因座荧光复合扩增体系的建立及法医学应用

为了发掘更多多态性高的X染色体短串联重复(X-STR)基因座,以解决法医学实践中的特殊案例,建立了一组荧光复合扩增体系,同时检测DXS6803、DXS981、DXS6809、DXS6789和DXS7132 5个X-STR基因座,并用ABI PRISM 3100作毛细管电泳和GeneMapper ID 3.1软件进行基因分型,结果清晰,灵敏度高,重复性好。最低检出限为0.25 ng,10～20 ng模板DNA能得到最佳结果,在实际检案中能得到满意结果。实验表明,本体系能为用X-STR基因座解决特殊的亲权鉴定案提供快速鉴定技术,是常染色体STR、Y-STR等鉴定方法的良好补充,在法医学实践中有较好的实用价值。

7个Y-STR基因座单倍型及其法医学应用

目的调查7个Y-STR基因座单倍型及其法医学应用。方法利用二组复合扩增体系,(Ⅰ:DYS391、GATA-A4、GATA-A10和GATA-H4;Ⅱ:DYS439、DYS437和DYS434)检测7个Y染色体特异性的STR基因座,并用聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染显色技术进行基因分型。结果在广东汉族372名无关男性个体中,二组7个基因座分别检出5、7、6、5和6、4、4个等位基因,共检出254种单倍型,其中201种为唯一的。单倍型基因多样性为0.9960。结论7个Y-STR基因座具有很高的识别能力,对建立Y染色体STR数据库,研究群体遗传学和进行法医学鉴定有重要意义。

X-STR基因座的法医学应用研究进展

对X染色体的结构特征、遗传特征及其短串联重复序列(STR)基因座在法医学领域的研究历史、现状进行了综述。并分析了X染色体STR基因座在混合斑鉴定和复杂亲子关系鉴定中的应用,以及在法医学领域应用中应注意的问题,如单倍型和连锁不平衡现象等。

43例中毒致死案的法医学分析

收集本文作者1990年至2000年所检验的43例中毒致死案例的资料,旨在探讨这类案例的特点及其在法医学鉴定中的意义。1资料统计1.1中毒者的年龄与性别分布 在43例中毒致死者中,男性27例,女性16例,男女比例为1.69:1;年龄分布主要集中在10~40岁(35例,81.4％),年龄最小的4岁,最大58岁。

播散型毛霉病致死1例

1案例1.1简要案情某男,68岁,于某年9月11日因“上腹疼痛1周”入住某医院治疗。10月30日行“胆囊切除+胆总管切开胆道镜探查+T管引流术”,当天下午开始出现血压低,转重症监护室继续治疗。该男病情仍持续恶化,逐渐出现少尿、神志昏迷症状。血常规检查提示红细胞、血红蛋白及血小板持续减少。11月13日20:55突然出现心率减慢,血压下降,经抢救无效,于当日22:45宣告临床死亡。

大鼠心肌缺血再灌注模型的改进及心电图判断指标

目的改进心肌缺血再灌注模型的制备,研究大鼠心肌缺血再灌注的心电图特点和损伤心肌超微结构改变,确定判断模型成功的心电图标准。方法制备幼年雄性SD大鼠心肌缺血再灌注模型,气管切开,开胸,结扎时将一硅胶管与冠状动脉一起结扎,结扎30min后再灌注;观测记录心电图改变,制作常规电镜切片,观察超微结构改变。结果造模成功率90%;心电图:QRS波群增高是判断结扎完全的标准;心肌酶水平升高显著;超微结构破坏明显。结论该方法有效建立心肌缺血再灌注模型,提出心电图判断标准;心肌超微结构损害明显。

正常人皮肤表皮干细胞定位特征对修复皮肤创伤的意义

目的:研究正常人皮肤中表皮干细胞的定位特征,探讨表皮干细胞与烧伤创面愈合的关系。方法:在需手术治疗的患者身上获取正常皮肤组织共24例,用α2、β1整合素和K10角蛋白作为第一抗体标记表皮干细胞,采用LSAB免疫组化方法研究皮肤中的表皮干细胞的表达位置。结果:分化高的K10阳性细胞分布于除表皮基底层以外的所有基底上层包括角质层、透明层、颗粒细胞层和棘细胞层的细胞中,而阴性染色区域则集中于表皮基底层。说明表皮基底层细胞不表达K10角蛋白;而α2、β1整合素阳性细胞位于基底膜上、邻接真皮的基底层,呈波浪状,起伏不平分布,同时在头皮的真皮网状层、毛囊末端底部及汗腺周围也发现有阳性细胞。而阴性染色细胞则位于基底层以上的表皮细胞。结论:表皮基底层、毛囊及汗腺周围中存在的表皮干细胞可能与皮肤创伤的修复有关,不同创面中残存的表皮干细胞可能是创伤修复过程中再上皮化的细胞来源,这提示对残存的表皮干细胞的保护、激活、促进其增殖和分化是研究促进创面愈合的关键,从而可以部分阐明创伤愈合的机制。

中国南方汉族人群9个STR基因座多态性分析

【目的】分析中国南方汉族人群9个STR基因座的遗传多态性。【方法】用STR_Typer_10_v1荧光标记试剂盒,对1619例中国南方汉族无关个体的9个STR基因座(D11S2368,D12S391,D13S325D18S1364,D22-GATA198B05,D6S1043,D2S1772,D7S3048,D8S1132)进行扩增,用AB公司3100遗传分析仪和GeneMapper 3.1v软件作STR分型,用PowerStateV12.xls分析软件进行等位基因频率和法医学常用参数统计分析,用Arlequin 3.11v软件包作Hardy-Weinberg equilibrium平衡检验。【结果】在中国南方汉族人群中,该9个STR基因座的遗传多态性高,杂合度(H)分布在0.818～0.879之间,随机匹配(MP)率分布在0.031～0.063之间,个体识别力(PD)在0.937～0.970之间,非父排除率(PE)在0.632～0.753之间,多态性息含量(PIC)在0.80～0.88之间,典型父权指数(TPI)在2.74～4.13之间。统计分析证明这些群体资料均达到Hardy-Weinberg equilibrium(P>0.05)。【结论】中国南方汉族人群9个STR基因座具有较高多态性,可以用于法医学亲权鉴定和个体识别,也可以用于人类学和遗传学研究。

D8S1179基因座等位基因丢失现象的研究

目的 探讨在进行STR分型时发生的等位基因“丢失”情况的原因。方法 分别采用Profiler Plus试剂盒和GenBank数据库设计的引物,对D8S1179基因座进行基因分型,并对丢失的等位基因进行测序分析。结果D8S1179基因座丢失的等位基因在第147位碱基出现G-A转换。在中国人群中,该位置出现碱基转换的频率是0.50×10-2(在2013个无关个体中观察到10例无关变异事件)。结论 第147位碱基转换正好位于Prfiler Plus试剂盒中D8S1179基因座的引物结合区域,导致扩增时等位基因丢失。

叔侄指数计算方法

目的介绍计算叔侄指数的方法。方法常染色体STR基因座鉴定争议叔与孩子的叔侄关系,用引入血缘一致性系数法、引入共祖系数法和AI定律计算叔侄指数。结果引入血缘一致性系数法、引入共祖系数法以及AI定律计算叔侄指数的结果一致。结论不同情形下3种方法计算叔侄指数的结果一致,孩子母亲参与鉴定计算所得的叔侄指数往往比孩子母亲不参加鉴定的叔侄指数高。

15个STR在单亲亲子鉴定中的排除分析

目的评估15个短串联重复(DODIS)基因座和Penta D、Penta E)在单亲亲子鉴定中的亲权排除率。方法 以644个随机个体构成207046个假想的家系,然后统计不排除或只有一个基因座排除亲权关系的例数。结果有27个假想家系15个STR均不排除亲权关系,排除率为0.999869。有384个假想家系只有一个基因座排除,占0.185％。结论用15个STR认定单亲案的亲权关系时要谨慎。出现单个基因座排除时要检测更多的遗传标记,以区分是否系突变。

应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术检测载脂蛋白E基因多态性

【目的】应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术检测人类载脂蛋白E(apoE)基因的多态性。【方法】用PCR扩增出含apoE两个单核苷酸多态性(SNPs)位点(334T/C和472C/T)的DNA片段作为模板,经延伸反应,产物纯化后利用MALDI-TOFMS进行检测。从而确定样本apoE基因型。【结果】应用本技术对50例广东地区无关个体进行apoE基因多态性检测,共检出3种常见的apoE基因型,其中以apoEΣ3/3型最多,占总数的74.00%;等位基因频率分布以ε3(87.00%)最高。【结论】本实验建立的基于MALDI-TOFMS与引物延伸技术检测apoE基因多态性的方法,具有快速、准确和可靠的特点。

DNA降解与腐败尸体死亡时间的相关性

目的探讨骨髓细胞核DNA含量变化与腐败尸体死亡时间的关系。方法应用DNA高度特异性染色方法Feulgen改良法结合计算机图像分析技术对死后不同时间(0～14d)胸骨骨髓细胞核DNA含量变化进行分析。结果胸骨骨髓细胞核DNA含量随死亡时间延长呈缓慢而规律下降,直至死后两周仍未完全降解。结论死后DNA降解速率与死亡时间呈线性关系,测定死后骨髓细胞核DNA含量可望成为腐败尸体死亡时间推断的新方法。

注视程度对视诱发电位检查结果的影响

目的探讨法医临床鉴定视诱发电位(visual evoked potential,VEP)检测中注视程度对结果的影响。方法选取110名视力或矫正视力正常(视力范围为4.8～5.2)、年龄在20～30岁的受试者作为实验对象,分别进行图形视诱发电位(pattern visual evoked potential,PVEP)和闪光视诱发电位(flash visual evoked po-tential,FVEP)检查。PVEP检查要求受试者以下述3种注视方式进行:正视屏幕中央图像(同时默数黑白方格交替变化的次数以提高受试者的注意力)、正视屏幕中央图像但同时思考其他问题、斜视屏幕下方一角(检查左眼时左眼斜视屏幕左下角,检查右眼时右眼斜视屏幕右下角)。FVEP检查要求受试者分别在睁眼与闭眼状态进行。记录P100波的潜伏期和波幅,采用SPSS 13.0进行多组定量数据的比较。结果 PVEP检查3种注视方式的P100波潜伏期和波幅差异均有统计学意义,FVEP检查睁眼与闭眼状态P100波的潜伏期和波幅比较差异均有统计学意义。结论 VEP虽然是一种客观的检测视功能的电生理学方法,仍可受到注视程度等人为因素的干扰,应引起司法鉴定人的注意。

微量DNA的短串联重复序列分型可行性

目的了解微量DNA分型的法医学应用的可行性。方法一系列浓度的DNA模板用PowerPlexTM16System试剂盒扩增,并用ABI377DNA测序仪进行短串联重复序列(STR)的分型。结果当模板量小于250pg时,部分位点发生了等位基因漏扩,并出现非特异带、杂合子扩增不平衡等干扰分型的杂峰。结论上述这些不正常的现象可能会导致分型错误。在对微量检材的DNA检验结果进行判型时一定要小心谨慎,全面考虑。

猪眼玻璃体液钾离子、次黄嘌呤浓度变化与PMI推断

目的研究猪眼玻璃体液成分变化及其与死亡时间(postmortem interval,PMI)的关系。方法放血处死家猪后取带眼睑的眼球96只,随机分为24组,在避光、温度(15±2)℃、湿度(50±5)%条件下分别放置2～96h,采集玻璃体液,运用全自动生化检测仪、超高效液相色谱检测K+、Na+、Cl-及次黄嘌呤(hypoxan-thine,Hx)浓度;用SPSS统计软件检测数据进行统计分析。结果玻璃体液中K+、Hx的浓度与PMI呈线性相关,R2分别为0.767和0.793;K+和Hx两者浓度与PMI经二元线性回归分析,R2为0.866;玻璃体液中Na+、Cl-浓度与PMI无明显相关性。结论玻璃体液K+、Hx浓度变化可作为较为客观的推断PMI的参考指标,两者与PMI的二元回归方程推断死亡时间有更高的准确性。

依据共有等位基因数判别叔侄关系

【目的】建立基于共有等位基因数(A)的典型判别函数,并探讨其在叔侄鉴定中的应用。【方法】根据119对叔侄、119对无关个体的15个STR基因座的分型结果,计算每对个体的共有等位基因数(A)和叔侄指数(AI),进行统计学处理。【结果】共有等位基因数(A)在叔侄对和无关个体对中均符合正态分布。采用共有等位基因数(A)建立的典型判别函数=0.437A-5.268,判别叔侄和无关个体的平均准确率为80.7%;采用lg AI建立的典型判别函数=1.021 lg AI+0.051,平均准确率为82.8%,两者判别结果无统计学差异(P>0.05)。【结论】依据共有等位基因数建立的典型判别函数的判别效能与ITO法相近,且计算简便、易于掌握,可以应用于叔侄关系鉴定。

4个Y-STR基因座银染复合扩增

建立一个复合扩增体系,同时扩增DYS391、GATA-A4、GATA-A10和GATA-H44个Y染色体特异性的STR基因座,并用聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染显色技术进行基因分型。采用该复合扩增系统调查广东汉族311名无关男性个体的单倍型频率,这4个基因座分别检出5、7、6和5个等位基因,其基因多样性分别为0.4623、0.6972、0.7173、0.6015。共检出98种单倍型,单倍型基因多样性为0.9755。该复合扩增体系在建立Y染色体STR数据库,研究群体遗传和进行法医学鉴定有重要意义。

3个X-STR基因座荧光标记复合扩增(英文)

为研究DXS6803、DXS981和DXS68093个基因座多态性及其在法医学中的应用,建立X染色体基因座(DXS6803、DXS981和DXS6809)的荧光复合扩增体系。用荧光标记引物PCR技术复合扩增3个基因座,并用ABIPRISM3100毛细管电泳及其软件进行基因分型。结果在中国汉族340名无关男性个体及195名无关女性个体中,DXS6803、DXS981和DXS6809三个基因座分别发现了13、12、11个等位基因,男性个体共检出183种单倍型,单倍型多样性为0.9926。结果表明这3个基因座有较高的多态性信息,在个体识别和亲权鉴定(特别是在缺失双亲的特殊检案)中有重要的应用价值。