血浆中辛伐他汀分析方法及药代动力学研究

采用GC/MS的SIM(选择离子监测)定量模式,以洛伐他汀做内标,经乙酸乙酯萃取后,测定人体血中辛伐他汀的浓度.标准曲线在0.27～54μg/L之间呈良好的线性关系,r>0.999,高中低3个浓度点的日间日内RSD(相对标准偏差)小于5.2%,回收率可达96%～103%,并应用在10例健康志愿者口服40mg辛伐他汀的药代动力学的研究.

脊椎动物心脏发育相关基因的研究进展

脊椎动物的心脏是一个复杂的腔状结构 ,由中胚层的祖细胞衍生而来。在心脏发育过程中 ,相关基因的正常表达是有功能心脏形成的关键。探究心脏发育相关基因 ,为了解先天性心脏病的发病机制和干预性治疗提供基础。本文就心脏发育的分子机制及其同源盒、螺旋环螺旋转录因子、Ⅵ胶原蛋白、活性T细胞核因子等相关基因的研究作一综述。

广东地区GBV-C/HGV5′NCR区序列变异的研究

目的 了解广东地区GBV -C/HGV 5′NCR区的序列变异情况。方法 以GBV -C和HGV的 5′NCR区完全同源的序列设计合成引物用于套式RT -PCR。从广东地区的 10例GBV -C/HGV感染者血中扩增了 10个序列 ,分别克隆至pUC19或pT -Adv载体。以 3 5S标记的双脱氧链末端终止法对这 10个序列分别进行正反两个方向的序列测定。结果 10株序列相互间同源性最大为 10 0 % ,最小为 84 4%。与Genbank所载 3个标准株的相应序列比较 ,其同源性最大为89 4% ,最小为 83 9%。与国内周育森报道的相应序列比较 ,两者之间的同源性最大为 96 1% ,最小为 85 0 %。比较还发现 ,这 10株序列的起始处有一段 3 8nt的区域与上述标准序列相比变异比较大 ,其与标准序列的同源性最高只有 79 0 % ,最低为 60 5 %。其中 9株相互间的这一 3 8nt序列的同源性则高达 92 %～ 10 0 %。结论 广东地区流行的庚型肝炎病毒大多带有HGV的特殊点。少数为GBV

胸腺上皮细胞上清液促进85细胞增殖的研究

胸腺是T细胞分化发育的场所。源于骨髓的前T细胞迁入胸腺后,在胸腺微环境作用下,经阳性和阴性选择过程,发育分化成功能性T细胞迁至外周[1]。目前对胸腺基质细胞如何影响成熟T细胞株的研究较少。为此,本文利用体外原代培养人胸腺上皮细胞,比较不同培养条件下细胞生长情况。...

丙肝诊断的竞争定量PCR法的实验研究及应用

迫于丙型肝炎病毒（HCV）的基础研究与实际应用中定量病毒基因的需要，本文利用体外构建的野生型与突变型模板，建立HCVRNA的竞争性聚合酶链反应（PCR）定量检测，进行了敏感性、特异性一重复性实验，并试用于检测血清标本。结果表明，野生型与突变型模板的灵敏度达到RNA为100fg，DNA为10fg；同一条件下，野生型与突变型模板进行竞争反应存在良好的稳定的比例关系，通过已知量的参照模板可较准确地推算出血清标本中的原始浓度。因此，此野生型模板可作为HCVRNA的逆转录及PCR定性诊断中的金标准；而突变型模板则作为内参照用于HCVRNA的竞争性逆转录PCR定量。丙肝诊断从定性走向定量，在实际工作中具有重大意义。

胸腺上皮细胞上清液促进85细胞增殖的研究

目的比较不同培养条件下原代人胸腺上皮细胞生长情况，观察上清液对T细胞林85细胞增殖及存活的效应。方法原代胸腺上皮细胞培养、85细胞增殖测定、台盼兰试验及FACS分析。结果合血清的培养基与合生长日子的培养基均能培养出原代胸球上皮细胞，TES上清单独能促使85细胞增殖且能提高85细胞的存活率。结论研究发现合血清的培养基与合生长因子的培养基培养效果无明显差异，仅剪切也能培养纯净的麻腺上皮细胞。TES上清单独能促使85细胞增殖，提示上清液中可能存在一种未知的细胞因子。上清液能维持85细胞生存，可能与影响T细胞生长周期有关。

β-地中海贫血基因治疗研究进展

基因治疗是根治β地贫的唯一途径。本文就目前对β地贫基因治疗研究的β珠蛋白基因转移治疗、药物的基因治疗、反义核酸技术的治疗作了较为系统的综述，着重介绍了ＲＶ、ＡＡＶ载体介导β基因导入β地贫患者造血干／祖细胞以获得细胞和红系组织的稳定整合和正常表达、ＨＵ等药物激活γ珠蛋白基因表达及提高β６５４突变基因转录本正常剪接水平、反义核酸修复β６５４突变基因转录本正常剪接等研究的新进展及其作用机制和临床治疗的探索。

牛磺酸对大鼠力竭运动后肝组织自由基损伤的对抗作用

以大鼠力竭运动为模型 ,观察牛磺酸对肝脏组织丙二醛 (MDA)含量、谷胱甘肽 (GSH)含量、超氧化物歧化酶 (SOD)和血清谷丙转氨酶 (GPT)的影响。结果显示 :力竭运动后大鼠肝组织MDA含量和血清GPT活性显著上升 ,肝组织GSH含量和SOD活性显著下降 ,而牛磺酸可显著地抑制力竭运动后大鼠肝组织MDA和血清GPT的升高以及肝组织中GSH含量和SOD活性的下降。提示牛磺酸对肝组织具有直接抗氧化损伤的作用。

胚胎干细胞体外分化为心肌细胞诱导因素的探讨

目的：用胚胎干细胞（ＥＳＣ）体外诱导分化为心肌细胞，从分子水平上研究早期心脏发育相关基 因及其功能。方法：（１）胚胎干细胞的培养。（２）胚胎于细胞的分化培养。（３）被分化的心肌细胞鉴定：ＲＮＡ的 提取；心脏特异性引物的合成和ＲＴ－ＰＣＲ反应；探针标记、纯化和比放射活性测定；ＲＮＡ斑点杂交。结果：用最 适条件培养液对ＦＳＣ定向诱导分化，可使８０％以上的ＥＳＣ分化为心肌细胞。心肌细胞以同步的方式进行收缩。 反转录ＰＣＲ和斑点杂交的结果显示：心肌在早期发育就开始表达其特异性基因。结论：胚胎干细胞体外能诱导 分化为心肌细胞。胎牛血清、二甲基亚砜和维甲酸的浓度及它们之间的组成不同，对ＥＳ细胞定向诱导为心肌 细胞均有影响。最佳诱导条件是用２ｎｍｏｌ／Ｌ维甲酸、０．６％二甲基亚砜和２０％胎牛血清组成的条件培养液。

番茄红素与癌

番茄红素是主要的类胡萝卜素之一。最近的科学研究发现 ,它对人类健康有重要的作用。本文介绍了番茄红素的食物来源、生物合成、物理化学特性和生理活性 ,它的抗癌效果与其抗氧化活性有关。很多的流行病学研究证明 ,番茄红素对一些类型的癌有预防效果 ,如前列腺癌和消化道癌。体内和体外的癌细胞培养研究也支持这一结论。因此 ,具有广泛用途的番茄红素 。

人ureb1在大肠杆菌中高效表达及其抗体的制备

目的 :构建人的ureb1(hureb1)原核高效表达重组质粒 ,以此表达的外源蛋白为抗原制备抗ureb1的抗体。方法 :用XhoI/NotI从pGU 2质粒酶切得到hureb1的ORF与pGEX 4T 2的XhoI/NotI大片段连接 ,构建表达GST hureb1融合蛋白的重组载体。转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,IPTG诱导表达。以粗制的GST hureb1融合蛋白分别免疫大白兔和小鼠 ,制备抗hureb1的多克隆抗体和单克隆抗体 ,采用WesternBlot进行特异性鉴定。结果 :构建了高效表达GST hureb1融合蛋白的原核表达载体 ,融合蛋白的表达量占菌体蛋白质总量的 33 45 %。以大肠杆菌表达的GST hureb1融合蛋白免疫动物制备了高滴度、高特异性的抗hureb1的抗体。结论 :利用重组GST hureb1融合蛋白免疫动物可获得高滴度的抗hureb1抗体。重组GST

人UREB1基因克隆及其在肿瘤组织中的分布

目的：大鼠 ＵＲＥＢ１基因编码的蛋白质能特异性地结合位于强吗啡基因启动子上游的一段 ＤＮＡ序列（ｕｐｓｔｒｅａｍ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｅｌｅｍｅｎｔ，ＵＲＥ）。早期研究证实 ＵＲＥＢ１对强吗啡基因启动子的转录具有促进作用，而对ｐ５３的转录激活作用具有抑制效应。本实验目的就是克隆人ＵＲＥＢ１基因，探索其与肿瘤发生发展的关系。方法：利用人工合成寡核苷酸探针从人脑ｃＤＮＡ文库中筛选人ＵＲＥＢ１基因，应用大肠杆菌表达的重组蛋白质制备的抗体检测肿瘤组织中ＵＲＥＢ１的表达分布。结果：获得了人ＵＲＥＢ１基因，核苷酸序列在对应区域及氨基酸序列与大鼠ＵＲＥＢ１基因ｃＤＮＡ序列和氨基酸序列皆有９１％的同源性。在各种肿瘤组织中都有ＵＲＥＢ１的表达，但是表达水平及定位不一样。初步发现有这样一个规律，随着肿瘤的恶性程度增加 ＵＲＥＢ在１核内的聚集程度增加。 ＵＲＥＢ１的酪氨酸磷酸化分析结果显示，肿瘤恶性程度高，ＵＲＥＢ１的酪氨酸磷酸化程度高。结论：ＵＲＥＢ１可能参与肿瘤的发生发展，其酪氨酸磷酸化水平可以影响肿瘤的恶性程度。

城市生活方式对死亡的影响分析

根据广州、珠海市１９９１～１９９２年死亡调查资料，按Ｄｅｖｅｒ氏法作行为因素对死亡影响的分析，并与１０年前作者对我国１９个城乡调查结果分析比较。发现已达小康生活水平的两市，生活方式和行为占死亡比重４９．０５％，与美国１９７７年同类调查几乎一致。证实ＷＨＯ认为（１９９２年）发展中国家死因中４０％～５０％为生活方式和行为所致。因此，奔小康时不良生活方式和行为是人们健康的首要危害因素。

血浆中洛伐他汀含量测定的色谱-质谱法

用色谱 -质谱法测定血浆中洛伐他汀 ,采用辛伐他汀作内标 ,以乙酸乙酯为萃取液 ,经真空抽干 ,定容进样。洛伐他汀质量浓度在0.36～48mg/L之间线性关系较好。该法灵敏度高 ,前处理简单快速 ,检出限达0.1mg/L ,相对标准偏差小于8.9 % ,回收率大于92 %。

含重组碱性成纤维细胞生长因子培养基中 3T3成纤维细胞在血纤维蛋白凝块上生长的可能性(英文)

目的 :重组碱性成纤维细胞生长因子 (rhbFGF)对培养条件下 3T3成纤维细胞在血纤维蛋白凝块上生长的可能性研究。方法 :采用Giemsa染色和MTT检测法 ,经过电镜扫描 ,分段对比观察 ,研究 3T3细胞在血纤维蛋白凝块上的生长情况。结果 :rhbFGF促进细胞生长并维持细胞存活的最佳浓度是 10 0ng/mL ,在含有 10 0ng/mL的低血清培养基中细胞可在血纤维蛋白凝块上生长。经 48h培养以后仍有大量的细胞存活。结论 :3T3成纤维细胞可在含有rhbFGF的低血清培养基上生长并存活 。

人瘦素基因克隆与序列测定

【目的】构建人瘦素基因cDNA克隆 ,并进行序列分析。【方法】用逆转录聚合酶链反应扩增人瘦素基因cDNA ,获得片段 (6 40bp)连接至 pUC19载体 ,并转化大肠杆菌DH5α。以末端终止法进行序列测定。【结果】所克隆的人瘦素cDNA含全长的人瘦素基因编码区 ,仅 2 87位的腺苷酸被鸟苷酸代替 ,导致 96位编码谷氨酰胺的密码子CAA改变为编码精氨酸的CGA ,其意义尚待阐明。【结论】以逆转录聚合酶链反应方法成功地构建了人瘦素基因cDNA克隆。

草鱼肝胰脏脂肪酸组成的气相色谱测定法

本方法通过甲醇与氯仿的混合液（1:1）提取鱼类的肝胰脏得到的粗脂肪,再用氢氧化钾-甲醇室温脂化法酯化后,用气相色谱技术对经过甲脂化后的脂肪酸进行检测,用程序升温技术和面积归一化法定量,结果表明重复性和精密度都较好,是一种准确、快速和简单的测量方法。

低强度激光照射血液治疗脑梗死的疗效和机制

目的探讨氦氖激光血管内照射治疗脑梗死的疗效及机制。方法对经脑CT确诊的脑梗死患者70例,按就诊先后分为每日照1次,60min/次的治疗组(两组均用丹参、胞磷胆碱静滴)和对照组各35例分别进行治疗。结果1个疗程后治疗组神经功能缺损恢复情况良好,治愈显效率明显优于对照组(P<0.01);其血液流变学指标自身治疗前后对照及对照组比较(血小板聚集率除外),差异均有非常显著性意义(P<0.01)。结论低能量氦氖激光血管内照射能有效改善血液流变学指标,对脑梗死是一种有效的疗法。

神经胶质细胞的体外培养方法

本文综述了星形胶质细胞、少突胶质细胞、Ｓｃｈｗａｎｎ细胞以及小胶质细胞等几种神经胶质细胞的体外培养方法及其新进展。重点介绍有关材料获取、培养基的选择与改良、培养技术要点、体外生长特征以及形态学鉴定等方面的问题。

HCV5’－NCR序列克隆和转录重组质粒构建

选取ＩＶ基因型ＨＣＶ及中国和台湾代表株ＨＣＶ的５’ＮＣＲ区保守序列合成引物，以ＲＴ－ＰＣＲ从输血后非甲非乙型肝炎病人血浆中扩增一段３００ｂｐ的ｃＤＮＡ片段作目的基因，钝端插入ｐＵＣ１９的ＳｍａＩ切点，构建了ｐＵＨＣＶ－ＮＣ重组质粒。对ｐＵＨＣＶ－ＮＣ分别或混合应用ＨＣＶ序列特异的内外引物和载体序列特异的通用引物进行ＰＣＲ扩增，所用产物分子量均同预期相符；酶切分析查出ＨＣＶ基因所带有和克隆位点融合所产生的两个外源ＮｃｏＩ切点也存在；证实ｐＵＨＣＶ－ＮＣ中克隆基因是ＨＣＶ的５’ＮＣＲ序列且插入方向为反向。应用ＢａｍＨＩ和ＥｃｏＲＩ双切出克隆ＨＣＶ基因，粘端插入ｐＳＰ７２的多克隆位点，均建了ｐＳＨＣＶ－ＮＣ转录重组体，对之进行了ＰＣＲ和酶切鉴定。