精神分裂症的分子遗传学初探

本文用4种限制性内切酶（PvuⅡ、PstⅠ、BglⅡ、RsaⅠ）和H-ras－1基因探针分析了40例精神分裂症患者（男女各半）和40例正常者（男女各半）的基因组DNA中H-ras-1基因的RFLP，结果提示，精神分裂症基因不与11号染色体短臂的H-ras-1基因连锁．

BALB/c小鼠胚胎干细胞系的建立及其嵌合体小鼠的获得

目的:建立BALB/c小鼠胚胎干细胞系,并用于制作嵌合体小鼠。方法:从BALB/c小鼠囊胚内分离培养内细胞团块。建系后,进行C_(57)BL/6小鼠受体囊胚腔注射,制作嵌合体小鼠。结果:建立了我国第一株BALB/c小鼠胚胎干细胞系。该细胞系具有典型的ES细胞形态,碱性磷酸酶强阳性,核型正常以及具有分化为三种胚层组织的能力,并已产生5只嵌合体小鼠。结论:建立的BALB/c小鼠胚胎干细胞系具有胚胎干细胞的各种特点,可用于体内外诱导分化研究。在进一步观察生殖系嵌合情况后,决定是否可应用于基因打靶等转基因动物的制作。

应用反向斑点杂交技术进行脐血HLA-DRB基因分型方法的建立

HLA分子的多态性对于移植有十分重要的意义。常用的HLA基因分型方法中SSOP基因分型方法有较高分辨率 ,但操作过程复杂 ,仅适于大样本的HLA分型。PCR SSP基因分型方法分辨率较低 ,但操作过程简单 ,适于临床要求。有必要建立一种简便、快速、价廉、高分辨率的基因分型方法。本研究取 6 3份已知HLA DRB型的脐血标本 ,经盐酸胍方法提取DNA用于反向斑点杂交 (RDB)基因分型 ,同时采用SSOP和PCR SSP方法进行比较。结果表明 ,所有样本用RDB方法基因分型均获得成功 ,可准确地分辨 6 0个HLA DRB等位基因 ,且结果与用SSOP和PCR SSP方法的结果完全一致。结论提示 ,RDB方法可准确地分辨HLA DRB等位基因 ,分辨率高 ,操作简单 。

应用ARMS法检测中国人中两种常见G6PD基因突变型

应用ＡＲＭＳ法检测中国人中两种常见Ｇ６ＰＤ基因突变型任晓琴杜传书陈路明蒋玮莹（中山医科大学医学遗传教研室；广州，５１００８９）主题词葡糖磷酸脱氢酶／遗传学；基因；突变；基因扩增中图号Ｒ３９４目前用于葡萄糖６磷酸脱氢酶（ｇｌｕｃｏｓｅ６ｐｈｏｓ...

中国人粘多糖贮积症Ⅰ型IDUA基因突变的检测

【目的】检测中国人粘多糖贮积症Ⅰ型患者IDUA基因 (IDUA )突变。【方法】采用PCR SSCP、PCR产物直接测序等技术对 35例粘多糖贮积症Ⅰ型患者的IDUA第 2、6、7、8、9和 10外显子及其相邻区域进行突变筛查。【结果】本研究筛查出 7种突变 ,均为单碱基置换。一内含子区突变nt1486C→T ;一中性突变nt1945G→C ;1种无义突变E40 4X ;4种错义突变 :F198L、L2 18V、A36 1T和V45 4I。【结论】中国人IDUA在第 2、6、7、8、9和 10外显子区存在突变。在上述检测到的 7种突变中 ,A36 1T国外已确定为多态性 ,E40 4X国外已报道为重型突变。而nt1486C→T、F198L和L2 18V和V45 4I为我们首次发现和报道 ,可能为新突变 ,但其突变性质还有待于进一步鉴定。

染色体易位对妊娠结局的影响

目的:研究染色体易位与妊娠结局的关系,为遗传咨询提供参考。方法:收集684例相互易位、256例罗式易位和36例复杂易位病例,分析不同类型染色体易位,涉及不同染色体部分的染色体异常和易位携带者性别对妊娠结局的影响。结果:相互易位携带者妊娠结局类型以孕早期流产为主,易位携带者生育染色体正常和易位携带者的频率稍高于易位联合体非交换型分离的预期值。孕龄和相互易位片段的长度影响妊娠结局,随着易位片段增长,孕早期流产的比例增加,而生育染色体异常后代的风险减小;随着孕龄的增加,生育染色体正常和易位携带者的比例明显增高,但生育染色体异常后代的风险也有所增加。研究还发现,女性易位携带者较男性易位携带者易生育染色体异常后代,而男性易位携带者易出现不同程度不育。对256例各种类型罗式易位携带者的妊娠结局研究,仅发现生育易位型先天愚型患者,未见生育其它类型不平衡染色体异常后代。结论:对易位携带者应进行有效的产前诊断,产前诊断的时间可考虑选择在孕3个月以后,可避免一些不必要的风险,及节省时间和费用。在为易位携带者进行遗传咨询和生育风险估计时,要考虑易位的类型、易位片段长度,还要考虑已有的生育史和易位携带者的性别。

白血病 BCR-ABL 融合基因逆转录 PCR 检测中的实验因素探讨

建立白血病中费城（Ｐｈ）染色体上独特的ｂｃｒ－ａｂｌ融合基因的逆转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）快速检测方法。利用正交设计原理优化逆转录反应条件，探讨该法中引物设计和嵌套式ＰＣＲ对检测灵敏度的影响，利用扩增产物所含限制性酶切位点进行产物特异性鉴定。运用此法检测１２例慢性粒细胞白血病，除１例阴性外，其余１１例阳性标本含不同类型（ｂ３ａ２，ｂ２ａ２，Ｂ１ａ２）ｂｃｒ－ａｂｌｍＲＮＡ。讨论了用于临床标本检测中应考虑的问题。

线粒体DNA tRNA^(leu(UUR))和 ND1双重突变──糖尿病家系报道

目的：探讨线粒体ＤＮＡ突变在糖尿病发病中的作用。方法：采用ＰＣＲＲＦＬＰ、亚克隆及ＤＮＡ序列分析等技术，对一个母系遗传糖尿病家系成员的线粒体ＤＮＡｔＲＮＡｌｅｕ（ＵＵＲ）及其临近区域进行了突变分析。结果：发现ｍｔＤＮＡｔＲＮＡｌｅｕ（ＵＵＲ）ｎｔ３２４３Ａ→Ｇ和ＮＤ１ｎｔ３３６５Ｔ→Ａ双重突变。结论：结合该家系糖尿病患者具有发病年龄早（＜３０岁），对胰岛素依赖，伴耳聋等较严重的临床表型，推测ＮＤ１和ｔＲＮＡｌｅｕ（ＵＵＲ）突变一起在发病中起协同作用。

不同培养基脆性X表达率研究

采用ＴＣ１９９和ＲＰＭＩ１６４０培养基，加入ＦｕｄＲ和咖啡因诱导剂，分别对１４例ｆｒａ（Ｘ）阳性个体和６例Ｆｒａ（Ｘ）阴性个体进行脆性Ｘ染色体表达率对比研究发现：两种方法均能检出Ｆｒａ（Ｘ）染色体，其表达率无明显差异（０．２＜Ｐ＜０．５）；而用ＲＰＭＩ１６４０培养制作的标本明显优于ＴＣ１９９培养制作的标本，前者计数１００个中期分裂相所需玻片数为３．４张，而后者需１１．１张，两者比较有显著意义（Ｐ＜０．００１）。

利用体外定点诱变技术构建人突变型α-L-艾杜糖醛酸酶基因

【目的】构建突变型α L 艾杜糖醛酸酶基因 (IDUA)cDNA ,为体外表达、鉴定突变的性质提供物质基础。【方法】以野生型pcDNA3 IDUA为基础质粒 ,采用双引物法体外定点诱变技术 ,引入突变E40 4X。【结果】突变区域经PCR SSCP和测序证实诱导突变成功。【结论】本研究成功构建了突变型IDUAcDNA ,可用于下游的体外表达 ;此定点突变技术具有简便、诱变效率高等优点 ,是体外构建突变型基因的一种有效方法。

白血病中P16基因突变的检测

用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）、ＤＮＡ直接测序和多重ＰＣＲ法，检测了１８例慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ），１例Ｋ５６２细胞株，９例急性粒细胞性白血病（ＡＭＬ），６例急性淋巴细胞性白血病（ＡＬＬ），２例多发性骨髓瘤（ＭＭ）患者外周血／培养细胞ＤＮＡ中Ｐ１６基因的点突变和基因缺失。用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ共筛查出５例ＣＭＬ中Ｐ１６基因的异常，突变率为２７．８％（５／１８），对其中１例外显子２异常者经测序证实为第１５１密码子ＣＣＣ→ＣＧＣ的转换，导致Ｐｒｏ→Ａｒｇ的错义突变；并检出１例ＭＭ中Ｐ１６基因外显子３的异常；受检的ＡＬＬ，ＡＭＬ，Ｋ５６２细胞株中，未检出突变。各病例中均未检出Ｐ１６基因的缺失。本文探讨了白血病中Ｐ１６基因突变的意义。

哺乳动物细胞中周期蛋白依赖激酶抑制物的研究进展

癌症的发生发展与一些癌基因和抑癌基因的作用有关．其中某些癌基因和抑癌基因通过参与细胞周期的调节而发挥其作用．而周期蛋白依赖激酶的调控在细胞周期调节中起关键作用．本文综述了近年来的有关哺乳动物细胞周期蛋白依赖激酶的一些主要抑制物（ｐ１５．ｐ１６．ｐ１８，ｐ１９．ｐ２１，ｐ２７等）的研究进展，并阐述它们与肿瘤的关系。

人血基因组PCR扩增模板的制备及其保存

建立一种简单的人血基因组PCR反应扩增模板制备及其保存方法 ,用于α -globin基因HS4 0位点扩增。

Alpha珠蛋白基因片段表达载体的构建

目的 :构建alpha珠蛋白基因片段反义表达载体 ,抑制重型beta地贫患者alpha珠蛋白基因的过量表达 ,为重型beta地贫基因治疗打下基础。方法 :采用PCR扩增alpha珠蛋白基因片段 80 7bp,反应条件 94℃ 30s ,6 8℃ 1min ,72℃ 2min,35个循环 ,然后将所扩增片段用Klenow大片段酶补平PCR产物末端 ,另外用HindⅢ酶切pLNSX ,用Klenow补平后 ,与补平末段的PCR产物平端连接 ,转化用CaCl2 制备的感受态细菌受体DH5α,用碱法提取所得克隆子质粒 ,电泳比较质粒大小 ,再用PCR初筛 ,最后用双酶切进行鉴定。结果 :经过质粒大小比较 ,PCR初筛 ,双酶切鉴定 ,得到 6个正向插入重组子。

改良法克隆淋球菌特征核酸片段

目的 :采用改良法克隆淋球菌特征核酸片段 30 0bp到pBS .sk中 ,作为淋球菌检测试剂盒的阳性标本来源。方法 :采用PCR扩增淋球菌特征核酸片段 30 0bp ,扩增条件 :94℃ 30s,5 5℃ 1min ,72℃ 1min ,35个循环 ,另外用SmalI酶切pBS .sk ,与PCR产物采用改良法平端连接 :连接温度 14℃ ,72h,连接反应体积 15 μl,加 10uSmalI防止pBS .sk自连 ,连接完成后取 5 μl连接液转化 2 0 0 μlCaCl2 制备的感受态受体菌JM10 9,用碱法提取重组子质粒 ,电泳比较质粒大小 ,PCR初筛 ,最后双酶切鉴定。结果 :经过电泳比较质粒大小 ,PCR初筛 ,最后双酶切鉴定 ,得到 5个克隆重组子。

第Ⅷ凝血因子基因内限制性片段长度多态性(RFLP)的研究及其在甲型血友病基因连锁分析中的应用

本文系统地研究了广东地区汉族人群中FⅧ:C基因内BclⅠ,XbaⅠ和BgⅡ位点RFLP的基因频率。多态性位点BclⅠ,XbaⅠ及BglⅠ的切点阳性率分别为63.5%、43.5%和100%。对Bcll和Xbal多态性切点连锁情况研究显示,19.5%的Bcll切点阳性纯合子为Xbal切点杂合子,证明联合应用此两位点RFLP可以把甲型血友病基因连锁分析的有效率提高到65.9%。用RFLP连锁分析对两例甲型血友病家系中的女性进行了致病基因携带者检测,对另一例家系进行了基因产前诊断。

中国广东人群DX_(13)/BglⅡ RFLP基因频率及其甲型血友病基因连锁分析

本文研究了中国广东人群35个甲型血友病家系的DX13/Bg1ⅡRFLP基因频率。66条无遗传关系的X染色体中,等位基因2.8kb和5.8kb的频率分别为0.879和0.121。在中国人群中,DX_(13)/BglⅡ多态性位点阳性率高于欧美白种人。用DX13/Bg1Ⅱ RFLP进行了一例甲型血友病家系连锁分析。

母系遗传糖尿病中线粒体tRNA^(leu(UUR))基因突变的研究

为了解线粒体ｔＲＮＡｌｅｕ（ＵＵＲ）基因ｎｔ３２４３Ａ→Ｇ突变在中国人家族性糖尿病中的发生率及该类糖尿病的临床特征，应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）结合限制性内切酶酶切分析，对５８例有母亲患病史（第１组）、３２例有父亲患病（第２组）、４８例有兄弟姐妹患病史（第３组）和５０例无家族史（第４组）的糖尿病患者进行该基因的筛查。在第１组和第３组患者中发现５例突变基因阳性者，并对其中２例先证者的家系成员进行临床和基因分析。结果显示该突变在家族中与糖尿病和耳聋共分离。提示这是一种独特的糖尿病亚型，存在于中国人ＩＤＤＭ和ＮＩＤＤＭ群体中，在母系遗传糖尿病中有较高的发生率。

云南省四个少数民族中所见的G6PD基因突变型

目的通过鉴定云南省白族、傣族等少数民族中的Ｇ６ＰＤ基因突变型，统计大理市白族Ｇ６ＰＤ缺乏症发生率及基因频率，以了解分子进化和民族起源，并为Ｇ６ＰＤ缺乏症的防治提供理论依据。方法用错配碱基ＰＣＲ／ＲＥ、ＰＣＲ－ＳＳＣＰ、ＡＲＭＳ法和ＤＮＡ序列分析等检测Ｇ６ＰＤ基因点突变。结果经ＤＮＡ序列分析确认，首次在白族人群中发现Ｇ６ＰＤＧ１３８８Ａ，发生率４２％、Ｇ１３７６Ｔ发生率２１％、Ａ９５Ｇ发生率６％；在傣族中发现Ｇ１３８８Ａ，发生率６２％、Ｇ１３７６Ｔ发生率２３％；在哈尼族中发现Ｇ１３８８Ａ１例；在景颇族中发现Ｇ１３８８Ａ１例。用ＰＣＲ／ＲＥ法初步鉴定了１例傣族Ｃ１０２４Ｔ突变型，发生率１．９％。大理市白族Ｇ６ＰＤ缺乏症发生率１．１９％，Ｇ６ＰＤ缺乏症基因频率０．０１１３，与勐腊及德宏傣族相比，Ｐ＜０．０１，差异有显著性。结论（１）Ｇ６ＰＤＧ１３７６Ｔ、Ｇ１３８８Ａ及Ａ９５Ｇ是目前仅在中国人中发现、存在于中国多个少数民族中的基因突变型。提示中华民族中存在比较共同的基因突变，可能起源于共同的祖先；（２）傣族Ｇ６ＰＤ缺乏症发生率高于白族；（３）云南省Ｇ６ＰＤ缺乏症的分布与疟疾流行区一致，这可能是基因组ＤＮＡ长期进化的?