荧光原位杂交(FISH)检测人精子染色体非整倍体率方法的研究

本研究建立了荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）方法，并测定了十名正常健康男子精子Ｘ染色体非整倍体率。取少量精液经洗后制片，用二梳苏糖醇（ＤＴＴ）和二碘水杨酸锂（ＬＩＳ）处理，使精子头部紧密的染色质去凝集，然后与生物素标记的α－卫星Ｘ染色体特异ＤＮＡ探针（ＤＸＺ１）作原位杂交；用Ｃｙ３－链亲和素检测杂交信号。结果在荧光显微镜下可清楚见到带有红色杂交点信号的Ｘ精子。杂交率平均为４８６２％（４７５４％－４９３６％）。此值与Ｘ精子占５０％的理论值差别无显著性。总共计数５５４５３个Ｘ精子，Ｘ染色体双体率为００６％；此结果与国外一些学者先前报导的结果一致，本研究提供的正常人Ｘ精子双体率的资料。

苯、甲苯、二甲苯暴露人群遗传毒性生物标志物的研究

为研究苯系物职业接触人群的生物标志物，应用高效液相色谱－电化学检测系统（ＨＰＬＣ－ＥＣ）分析８７名苯接触工人及３０名对照人群外周血淋巴细胞８－羟基－２－脱氧鸟苷（８－ＯＨｄＧ），同时检测工人个体接触空气苯浓度及尿粘康酸（ＴＴＭＡ）、外周血淋巴细胞微核（ＭＮ）及白细胞（ＷＢＣ）值。结果显示：外周血淋巴细胞８－ＯＨｄＧ、ＭＮ、尿ＴＴＭＡ在苯接触人群增高显著，８－ＯＨｄＧ与空气苯、尿ＴＴＭＡ存在良好相关，且８－ＯＨｄＧ与ＭＮ之间存在一定相关性。结果提示：苯可诱导职业接触人群ＤＮＡ氧化损伤，苯的遗传毒性机理可能是通过多位点、多作用机理、多遗传后果所致。８－ＯＨｄＧ可作为苯系物职业接触人群的生物标志物，影响苯接触人群外周血淋巴细胞８－ＯＨｄＧ形成的因素有性别和甲苯。

冰冻对精子DNA的影响

目的 :探讨冰冻是否引起精子DNA损伤。 方法 :采用改进后的单细胞凝胶电泳法 (SCGE)对 - 80℃条件下保存不同时间的精子DNA进行分析。 结果 :以DNA头部百分比为检测参数 ,方差分析显示 ,对于时间因素 ,P >0 .0 5 ,无统计学差异。 结论

双色荧光原位杂交检测苯系物暴露工人精子9、18号染色体数目畸变

为研究苯系物暴露工人精子常染色体数目畸变。用地高辛标记的９号染色体探针（Ｄ９Ｚ１）和生物素标记的１８号染色体探针（Ｄ１８Ｚ１）进行双色荧光原位杂交，测定精子９、１８号染色体非整倍体率。车间空气苯时间加权平均浓度（ＴＷＡ）为８６．４９ｍｇ／ｍ３，高于国家卫生标准１倍，苯暴露工人尿粘糠酸（ｔｔＭＡ）显著高于对照组。共计数１４名暴露工人１３６ ４０１条精子，１６名对照工人１５６ ９５５条精子。暴露组９、１８染色体双体精子率（分别为０．１６８％± ０．０６３％、０．０５５％± ０．０３１％）和二倍体精子率（０．０７３％± ０．０４５％）均高于对照组相应数值（分别为０．０５０％±０．０３０％、０．０３３％±０．０２５％和０．０４０％±０．０３６％）；暴露组９、１８号染色体缺体率（分别为０．２０６％±０．０４７％，０．０６８％±０．０４４％）高于对照组值（０．０６７％±０．０３７％、０．０４８％±０．０３４％）。总数目畸变率（０．５７０％±０．１４４％）亦高于对照组值（０．２１８％±０．０７１％）。实验表明接触较高浓度苯可引起长期暴露者精子常染色体非整倍体率增高。

维生素B_6(VitB_6)对姐妹染色单体互换(SCE)频率的影响

本文研究了维生素Ｂ６体外体内试验对ＳＣＥ频率的影响，体外试验不同剂量ＶｉｔＢ６诱发中国仓鼠肺细胞株细胞（ＣＨＬ）及人周血淋巴细胞的ＳＣＥ频率显著升高（Ｐ＜００１），但体内试验ＶｉｔＢ６诱导的小鼠骨髓细胞ＳＣＥ频率与对照组比较无显著性差别（Ｐ＞０．０５）。

双色荧光原位杂交(FISH)检测正常人精子中X精子与Y精子比率

本研究应用双色荧光原位杂交法检测正常人Ｘ精子、Ｙ精子及性比率，平均杂交效率为９９０５％±０４２％（９９４２％－９９９２％）对１３位正常健康男子总共计数８９３７５条精子，其中４４３４０条精子为Ｘ精子（４９６３％），４４１７６条为Ｙ精子，占４９４２％，Ｘ精子与Ｙ精子的比率接近１：１，与Ｘ、Ｙ精子各占５０％的理论值差别无显著性。

双色荧光原位杂交检测正常人精子9、18号染色体非整倍体率

目的 :测定健康人精子 9、18号染色体非整倍体率。方法 :用 9、18号染色体着丝粒探针与精子核进行双色荧光原位杂交 ,计数非整倍体率。结果 :检查 16位健康捐精者 15 6 95 5个精子 ,每人约计数 10 0 0 0个精子。平均杂交率 >99%,平均 9双体率 0 .0 5 0 %± 0 .0 30 %,18双体率 0 .0 33%± 0 .0 2 5 %,二倍体精子率 0 .0 40 %± 0 .0 36 %,9缺体率 0 .0 6 7%± 0 .0 37%,18缺体率 0 .0 48%± 0 .0 34 %,无荧光点精子率 0 .42 7%± 0 .35 7%,总数目畸变率 0 .2 18%± 0 .0 71%。结论 :测定了 16例健康人精子 9、18号染色体非整倍体率 ,与传统的人精子染色体分析法测定的结果相近。

铬、镍诱导大鼠DNA─蛋白质交联物形成的探讨

铬、镍诱导大鼠ＤＮＡ─蛋白质交联物形成的探讨雷毅雄，张桥，庄志雄（广州医学院卫生学教研室广州５１０１８２２中山医科大学卫生学院遗传毒理研究室）ＤＮＡ─蛋白质交联（ＤＰＣｓ）是环境污染物和化学致癌物对生物大分子物质的一种重要遗传损害，是近年备受关注的毒...

用双色荧光原位杂交检测人精子染色体非整倍体率

目的检测人精子染色体非整倍体率。方法采用双色荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）方法，取少量精标本经洗后制片，用二硫苏糖醇（ＤＴＴ）和二碘水杨酸锂（ＬＩＳ）处理，使精子头部染色质去凝集。然后，与生物素标记的α卫星Ｘ染色体特异ＤＮＡ探针（ＤＸＺ１）和地高辛标记的α卫星Ｙ染色体特异ＤＮＡ探针（ＤＹＺ３）进行原位杂交。用ＣＹ３－链亲和素、山羊抗链亲和素检测Ｘ染色体探针杂交信号；用鼠抗地高辛抗体、与荧光素结合的兔抗鼠抗体检测Ｙ染色体探针杂交信号。结果在Ｎｉｋｏｎ荧光显微镜下可以清楚看到精子头部的杂交信号，头部有１个红色荧光杂交信号的精子为Ｘ染色体精子（Ｘ精子），有１个绿色荧光杂交信号的精子为Ｙ染色体精子（Ｙ精子）。精子头部有２个荧光杂交信号的精子为染色体数目异常精子。若用１条常染色体探针和１条性染色体探针进行ＦＩＳＨ，可以区别头部有２个相同颜色荧光杂交信号的精子属非整倍体精子或二倍体精子。结论双色荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）方法，可以用于测定接触致突变剂和非整倍体诱导剂后，人精子染色体非整倍体率的变化。

DNA氧化性损伤及生物标记oh^8dG的应用

机体在正常代谢过程中产生的氧自由基可引起DNA氧化性损伤,损伤率与代谢率有关;环境中许多化学、物理因素也可通过氧自由基介导DNA损伤.DNA氧化性损伤同许多年龄有关的退行性疾病关系密切。机体有多水平抗DNA氧化机制,某些外源物质有类似作用。oh^8dG(8-羟基-2‘-脱氧鸟苷)被证实是一个很好的DNA氧化损伤的生物学标记,HPLC/EC法能有效分析组织DNA和尿中oh^8dG的含量。该方法在遗传毒理学、抗衰老医学、肿瘤病因学等领域有广泛应用前景.